1、細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第1頁(yè)第一節(jié) 細(xì)胞病理學(xué) 基礎(chǔ)檢驗(yàn)技術(shù)細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第2頁(yè)定義細(xì)胞病理學(xué) 采集、制備、染色觀察 是經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)細(xì)胞形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，進(jìn)行 健康和疾病篩查、診療和研究 體檢、普查 診療、判別診療細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第3頁(yè)本節(jié)內(nèi)容提要一.標(biāo)本采集二.標(biāo)本涂片三.涂片固定四.涂片染色五.觀察涂片六.細(xì)胞學(xué)診療七.細(xì)胞學(xué)診療質(zhì)量確保細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第4頁(yè)一.標(biāo)本采集標(biāo)準(zhǔn)：準(zhǔn)確選擇采集部位標(biāo)本保持新鮮，盡快制片盡可能防止血液及粘液等混入方法簡(jiǎn)便，操作輕柔，降低病人痛苦，預(yù)防并發(fā)癥和腫瘤擴(kuò)散采集、制備、染色、觀察標(biāo)準(zhǔn)：準(zhǔn)確選擇采集部位標(biāo)本保持新鮮，盡快制片

2、盡可能防止血液及粘液等混入（潔凈）方法簡(jiǎn)便，操作輕柔，降低病人痛苦，預(yù)防并發(fā)癥和腫瘤擴(kuò)散細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第5頁(yè)標(biāo)本分類.脫落細(xì)胞 ：自然脫落細(xì)胞 非自然脫落細(xì)胞2.細(xì)針穿刺細(xì)胞細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第6頁(yè)自然脫落細(xì)胞標(biāo)本：咳出：痰 排出：尿、便 擠出：乳頭分泌物等。非自然脫落細(xì)胞標(biāo)本：如氣管，宮頸，皮膚，乳頭等。穿刺細(xì)胞標(biāo)本：漿膜腔積液腫瘤穿刺采集、制備、染色、觀察細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第7頁(yè)自然脫落細(xì)胞標(biāo)本特點(diǎn)包含痰，尿液，乳頭分泌物，精液等。輕易獲取標(biāo)本能屢次采樣成份復(fù)雜，含各種細(xì)胞成份，炎細(xì)胞，微生物及外源污染物細(xì)胞成份保留較差采集、制備、染色、觀察包含痰，尿液，乳頭分泌物，精液等

3、。輕易獲取標(biāo)本能屢次采樣成份復(fù)雜，含各種細(xì)胞成份，炎細(xì)胞，微生物及外源污染物細(xì)胞成份保留較差細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第8頁(yè)霉菌污染0926963,男,78歲, 臨床診療:肺炎 送檢標(biāo)本:痰細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第9頁(yè)污染蟲卵0926965,男,79歲, 臨床診療:肺癌? 送檢標(biāo)本：痰細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第10頁(yè)痰細(xì)胞退變細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第11頁(yè)非自然脫落細(xì)胞標(biāo)本特點(diǎn) 包含氣管刷，宮頸刷，支氣管灌洗液及皮膚乳頭等刮取標(biāo)本。直接從病變器官表面采樣纖維鏡能從器官內(nèi)部獲取標(biāo)本能獲取上皮下病變標(biāo)本細(xì)胞成份保留良好，但診療標(biāo)準(zhǔn)不一樣于脫落細(xì)胞采集、制備、染色、觀察細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第12頁(yè)宮頸細(xì)

4、胞學(xué)取材與制片方法刮取法刷取法細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第13頁(yè)氣管刷細(xì)胞涂片細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第14頁(yè)肺泡灌洗液0925790,男,66歲CT：左肺上葉尖后段不整形實(shí)變影氣管鏡：未見病變細(xì)胞學(xué)診療：腺癌細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第15頁(yè)穿刺細(xì)胞標(biāo)本1體腔抽出液：胸腹水、心包液、腦脊液等；2細(xì)針穿刺吸收液：如體表腫物穿刺液，超聲定位下肝、胰腺和腎臟穿刺液；借助內(nèi)窺鏡技術(shù)穿刺等。理論上適合用于任何器官簡(jiǎn)便，費(fèi)用低，創(chuàng)傷小良好穿刺和制片技術(shù)可取得最正確結(jié)果需外科病理學(xué)知識(shí)有一定不足，如采樣不足等采集、制備、染色、觀察細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第16頁(yè)二.涂片制備標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)本新鮮玻片清潔操作輕柔涂片牢靠涂片數(shù)量

5、采集、制備、染色、觀察細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第17頁(yè)方法直接涂片：將新鮮標(biāo)本直接涂在載玻片上 .推片法 .涂抹法 .壓拉涂片法間接涂片：將各種液體標(biāo)本進(jìn)行濃縮處理后再涂片 .離心法 .液基薄層法 .細(xì)胞塊法細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第18頁(yè).推片法采集、制備、染色、觀察細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第19頁(yè).涂抹法采集、制備、染色、觀察細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第20頁(yè).壓拉涂片法采集、制備、染色、觀察細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第21頁(yè).離心法和細(xì)胞離心法離心法：大量液體標(biāo)本，如漿膜腔積液、尿液、灌洗液。細(xì)胞離心法：將細(xì)胞直接離心到載玻片上，制成單層細(xì)胞涂片。適合用于少許液體、中等量細(xì)胞。采集、制備、染色、觀察細(xì)

6、胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第22頁(yè).液基細(xì)胞學(xué)（1）薄層法ThinPrep采集、制備、染色、觀察細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第23頁(yè)宮頸病變好發(fā)部位細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第24頁(yè)細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第25頁(yè)細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第26頁(yè)細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第27頁(yè)(2) SurePath Prep 法 標(biāo)本乙醇固定 懸浮于密度梯度溶液中渦旋法使聚集細(xì)胞團(tuán)和粘液分開 密度梯度離心法使細(xì)胞成份和非上皮細(xì)胞成份分開 細(xì)胞在重力作用下沉淀到載玻片上細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第28頁(yè)傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)情況傳統(tǒng)制備方法（普通是涂抹法） 標(biāo)本質(zhì)量不一致細(xì)胞分布不均雜質(zhì)成份妨礙視線一個(gè)樣本需涂多張涂片細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第29

7、頁(yè)標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞學(xué)技術(shù)液基細(xì)胞學(xué)卓越標(biāo)本質(zhì)量清楚背景標(biāo)準(zhǔn)化標(biāo)本制備過(guò)程均勻細(xì)胞分布一個(gè)樣本只需一張含有代表性標(biāo)本剩下樣本可進(jìn)行其它各種測(cè)試（免疫組化等）提升細(xì)胞學(xué)測(cè)試敏感性和特異性細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第30頁(yè)痰低分化鱗癌 改進(jìn)背景 細(xì)胞清楚度TCTTCT細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第31頁(yè)6.細(xì)胞塊法將標(biāo)本中細(xì)胞聚集成團(tuán)，形成與傳統(tǒng)組織塊類似細(xì)胞塊，制成細(xì)胞切片，然后能夠進(jìn)行特殊染色。細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第32頁(yè)三.涂片固定目標(biāo)：是保持細(xì)胞自然狀態(tài)，預(yù)防細(xì)胞自溶和細(xì)菌造成腐敗。固定液能凝固和沉淀細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和破壞細(xì)胞內(nèi)溶酶體酶，保持細(xì)胞自然狀態(tài)，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)清楚，易于著色。所以標(biāo)本愈新鮮，固定愈及時(shí)，

8、細(xì)胞結(jié)構(gòu)愈清楚，染色效果愈好。采集、制備、染色、觀察細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第33頁(yè)固定不及時(shí)腺癌細(xì)胞固定及時(shí)腺癌細(xì)胞細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第34頁(yè)固定方法： 濕固定：是使細(xì)胞原生質(zhì)脫水、蛋白質(zhì)凝固到達(dá)固定目標(biāo)。可引發(fā)細(xì)胞皺縮。 干燥固定：是經(jīng)過(guò)空氣蒸發(fā)方式到達(dá)固定目標(biāo)。細(xì)胞有增大趨勢(shì)。細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第35頁(yè)固定方法比較A未固定細(xì)胞B平鋪在玻片上C濕固定D干固定細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第36頁(yè)固定液種類： 乙醚乙醇固定液；氯仿乙醇固定液；95%乙醇固定液。固定時(shí)間：1530分鐘細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第37頁(yè)四.常見染色方法巴氏染色法（papanicolaou stain）（濕固定）蘇木素-

9、伊紅（H-E）染色法瑞氏-吉姆薩染色法采集、制備、染色、觀察細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第38頁(yè)巴氏染色法（Pap)細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第39頁(yè)巴氏染色來(lái)歷 Papanicolaou(帕帕尼古拉烏) 子宮頸抹片這個(gè)檢驗(yàn)是Papanicolaou 醫(yī)生在公元1928 年在美國(guó)首度提出。因?yàn)楹?jiǎn)便易行，而且能夠早期發(fā)覺子宮頸癌或不正常細(xì)胞方便早期治療，而后風(fēng)靡全世界，成為一個(gè)婦科不可或缺主要例行檢驗(yàn)。為了紀(jì)念這位醫(yī)師貢獻(xiàn)，在國(guó)際上這個(gè)檢驗(yàn)就叫作Pap test 或者Pap smear。 細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第40頁(yè)P(yáng)apanicolaou 醫(yī)生1883年生于希臘。他父親也是一位醫(yī)生，曾經(jīng)當(dāng)過(guò) Kymi

10、 市市長(zhǎng)。他21歲時(shí)完成醫(yī)學(xué)教育，到德國(guó)留學(xué)研究生殖細(xì)胞學(xué)，1913年移民美國(guó)。 他最初研究天竺鼠陰道分泌物內(nèi)細(xì)胞周期改變。以后用相同方法去研究婦女陰道內(nèi)分泌物及細(xì)胞改變。聽說(shuō)全世界第一個(gè)Pap test 就是用在他妻子身上。 細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第41頁(yè)于1925年在紐約以一群自愿婦女做研究時(shí)，在一個(gè)婦女子宮頸抹片上偶然發(fā)覺一些癌細(xì)胞。這個(gè)發(fā)覺使他異常振奮，而后經(jīng)一系列研究后，于1928 年發(fā)表一個(gè)學(xué)術(shù)演講：陰道內(nèi)細(xì)胞能夠用來(lái)早期診療婦女癌癥。 細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第42頁(yè)P(yáng)apanicolaou 醫(yī)生因心臟病病逝于1962年。 他妻子Mary，也是一位偉大、自我犧牲婦人，他是Papan

11、icolaou 醫(yī)生第一個(gè) Pap test 婦人，他曾經(jīng)作過(guò)他細(xì)胞檢驗(yàn)員，幫忙訓(xùn)練許多技術(shù)人員。以后20年時(shí)間，Papanicolaou醫(yī)生基礎(chǔ)上以他作定時(shí)陰道細(xì)胞檢驗(yàn)，而后完成一本婦人周期性陰道細(xì)胞改變著作。每次Papanicolaou 醫(yī)生介紹他妻子時(shí)，總是說(shuō)：這是我太太也是我受害者。 總之，一個(gè)成功男人背后，經(jīng)常會(huì)有一個(gè)偉大無(wú)私女人。 細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第43頁(yè)細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第44頁(yè)蘇木素-伊紅（H-E）染色法細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第45頁(yè)瑞氏-吉姆薩染色法細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第46頁(yè)其它特殊染色組織細(xì)胞化學(xué)染色：過(guò)碘酸Schiff染色（PAS糖原）、三色染色、普魯氏藍(lán)染

12、色等。免疫細(xì)胞染色：識(shí)別細(xì)胞類型、起源等。識(shí)別微生物染色： Gram染色，PAS，六胺銀，Ziehl-Neelsen染色（抗酸染色）等。細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第47頁(yè)胸水細(xì)胞塊免疫組化染色BerEp4染色細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第48頁(yè)五.顯微鏡觀察方法視野采集、制備、染色、觀察細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第49頁(yè)用10倍物鏡進(jìn)行瀏覽細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第50頁(yè)發(fā)覺異常細(xì)胞后，用40倍觀察細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第51頁(yè)六.細(xì)胞病理學(xué)診療細(xì)胞形態(tài)學(xué)判斷基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)1細(xì)胞數(shù)量2細(xì)胞排列結(jié)構(gòu)特征3細(xì)胞核特征4細(xì)胞質(zhì)特征5背景6人為原因細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第52頁(yè).細(xì)胞數(shù)量 多增殖指數(shù)增加（腫瘤或增生）少荒涼

13、，注意觀察細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第53頁(yè)0926164,女，65歲，臨床診療：胸水既往史：骨髓瘤細(xì)胞量多細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第54頁(yè)宮頸TCT涂片細(xì)胞量正常 細(xì)胞量少細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第55頁(yè)2.細(xì)胞結(jié)構(gòu)特征 涂片中細(xì)胞經(jīng)常缺乏結(jié)構(gòu)特征 正常細(xì)胞有極向、平鋪 惡性細(xì)胞重合：異常粘附性、異常聚集性。細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第56頁(yè)宮頸涂片中正常宮頸柱上皮細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第57頁(yè)腺癌C0924833，女，65歲，腹水 細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第58頁(yè)3.細(xì)胞核特征 良性大小一致，核質(zhì)細(xì)，核膜光。惡性大小不一，核質(zhì)粗，核膜厚。細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第59頁(yè) 宮頸TCT涂片正常 高度病變細(xì)胞病

14、理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第60頁(yè)胸水涂片 腺癌細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第61頁(yè)4.細(xì)胞質(zhì)特征核質(zhì)比增加 嗜堿、粘液、空泡、吞噬細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第62頁(yè)胞漿內(nèi)粘液細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第63頁(yè)5.涂片背景： 包含細(xì)胞成份和非細(xì)胞成份（血、粘液、炎癥、微生物） 惡性壞死背景（腫瘤素質(zhì)）6.人為原因：制片不佳；污染。細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第64頁(yè)七 細(xì)胞學(xué)診療質(zhì)量確保標(biāo)本采集：塵細(xì)胞，宮頸細(xì)胞數(shù)量制片過(guò)程：離心，固定，染色閱片診療：全方面，結(jié)合臨床及組織學(xué)不停理論學(xué)習(xí)復(fù)查會(huì)診（IQAM,EQAM.P274）定時(shí)隨訪：金標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第65頁(yè)痰中塵細(xì)胞細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第66頁(yè)宮頸涂片上柱

15、上皮細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第67頁(yè)細(xì)胞病理學(xué)診療優(yōu)勢(shì)安全簡(jiǎn)便，痛苦少，不良反應(yīng)少，可重復(fù)取材，設(shè)備要求低，費(fèi)用廉?？焖贉?zhǔn)確，檢出率約60%，適合大規(guī)模防癌普查及高危人群隨訪觀察，可發(fā)覺早期癌和原位癌。檢驗(yàn)范圍大細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第68頁(yè)病例舉例1年3月檢驗(yàn)病理號(hào)04767女，51歲臨床診療：宮頸炎宮頸TCT：細(xì)胞量5000，診療:ASC-H細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第69頁(yè)年8月活檢病理號(hào)19604 ：ABCDE共5點(diǎn)活檢病理診療：慢性宮頸炎細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第70頁(yè)年9月復(fù)查細(xì)胞號(hào)0926170診療:上皮內(nèi)高度病變細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第71頁(yè)年9月手術(shù)病理診療：宮頸CIN 累及腺體細(xì)胞

16、病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第72頁(yè)病例舉例2TCT診療：高度病變病理活檢：慢性宮頸炎六個(gè)月后：病理活檢：宮頸鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第73頁(yè)脫落細(xì)胞學(xué)診療不足有一定誤診率：細(xì)針吸收可有10%假陰性，痰細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)可有20%假陰性，少數(shù)出現(xiàn)假陽(yáng)性。詳細(xì)部位難確定腫瘤分型困難非腫瘤性疾病診療研究少細(xì)胞學(xué)診療為二級(jí)診療，需經(jīng)活檢組織學(xué)證實(shí)后，方可進(jìn)行治療。細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第74頁(yè)細(xì)胞病理學(xué)診療是一個(gè)復(fù)雜過(guò)程，千萬(wàn)不能過(guò)分強(qiáng)調(diào)最終止論主要性。 why ?細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第75頁(yè)細(xì)胞病理學(xué)檢驗(yàn)影響原因多！患者信息：年紀(jì)和性別；激素水平；臨床表現(xiàn)；其它檢驗(yàn)結(jié)果病變部位：局部解剖；影像學(xué)特征細(xì)胞特點(diǎn)：細(xì)胞量；類型；分布和粘附性；背景其它信息：電鏡；免疫組化；流式細(xì)胞儀；細(xì)胞遺傳學(xué)細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第76頁(yè)沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)迄今為止，沒(méi)有一項(xiàng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征或一套規(guī)范細(xì)胞形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)能準(zhǔn)確可靠地判別良惡性細(xì)胞。細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)第77頁(yè)細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)