1、發(fā)酵菌體生長的幾種檢測方法微生物的檢測，無論在理論爭辯還是在生產(chǎn)實踐中都具有重要的意義，本文分生長量測定法，微生物計數(shù)法，生理指標(biāo)法和商業(yè)化快速微生物檢測簡要介紹了利用微生物重量，體積，大小，生理代謝物等指標(biāo)的二十余種常用的檢測方法，簡要介紹了這些方法的原理，應(yīng)用范圍和優(yōu)缺點。概述一個微生物細(xì)胞在適宜的外界條件下，不斷的吸取養(yǎng)分物質(zhì)，并按自己的代謝方式進(jìn)展陳代謝。假設(shè)同化作用的速度超過了異化作用，則其原生質(zhì)的總量重量，體積，大小就不斷增加，于是消滅了個體的生長現(xiàn)象。假設(shè)這是一種平衡生長，即各細(xì)胞組分是按恰當(dāng)?shù)谋壤鲩L時，則到達(dá)肯定程度后就會發(fā)生生殖，從而引起個體數(shù)目的增加，這時，原有的個體已經(jīng)

2、進(jìn)展成一個群體。隨著群體中各個個體的進(jìn)一步生長，就引起了這一群體的生長，這可從其體積、重量、密度或濃度作指標(biāo)來衡量。微生物的生長不同于其他生物的生長，微生物的個體生長在科研上有肯定困難，通常狀況下也沒有實際意義。微生物是以量取勝的，因此，微生物的生長通常指群體的擴增。微生傳等問題的重要指標(biāo)，同時，微生物在生產(chǎn)實踐上的各種應(yīng)用或是對致病，霉腐微生物的防治都和他們的生長抑制嚴(yán)密相關(guān)。所以有必要介紹一下微生物生長狀況的檢測方法。既然生長意味著原生質(zhì)含量的增加，所以測定的方法也都直接或間接的以次為依據(jù)，而測定生殖則都要建立在計數(shù)這一根底上。微生物生長的衡量，可以從其重量，體積，密度，濃度，做指標(biāo)來進(jìn)展

3、衡量。生長量測定法體積測量法：又稱測菌絲濃度法。通過測定肯定體積培育液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。方法是，取肯定量的待測培育液如 10 毫升放在有刻度的離心管中，設(shè)定肯定的離心時間如5 分鐘和轉(zhuǎn)速5000 rpm，離心后，倒出上清夜，測出上清夜體積為v，則菌絲濃度為10-v/10。菌絲濃度測定法是大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長的一個重要監(jiān)測指標(biāo)。這種方法比較粗放，簡便，快速，但需要設(shè)定全都的處理條件，否則偏差很大，由于離心沉淀物中夾雜有一些固體養(yǎng)分物，結(jié)果會有肯定偏差。稱干重法：可用離心或過濾法測定。一般干重為濕重的10-20%。在離心法中，將肯定體積待測培育液倒入離心管中，設(shè)定1-

4、5 105100下烘干，8040下真空枯燥，枯燥后稱重。如用過濾法，絲狀真菌可用濾紙過濾，細(xì)菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾，過濾后用少量水洗滌，在40下進(jìn)展真空枯燥。稱干重發(fā)法較為煩瑣，通常獵取的微生物產(chǎn)品為菌體時，常承受這種方法，如活性干酵母activity dry yeast, ADY,一些以微生物菌體為活性物質(zhì)的飼料和肥料。比濁法：微生物的生長引起培育物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定肯定波長下的吸光值，推斷微生物的生長狀況。對某一培育物內(nèi)的菌體生長作定時跟蹤時，可承受一種特制的有側(cè)臂的三角燒瓶。將側(cè)臂插入光電比色計的比UNICO 公司的紫外-600nm OD600E.Coli 的生長及

5、誘導(dǎo)時間。菌絲長度測量法：對于絲狀真菌和一些放線菌，可以在培育基上測定肯定時間內(nèi)菌絲生長的長度，或是利用一只一端開口并帶有刻度的細(xì)玻璃管，到入適宜的培育基，臥放，在開口的一端接種微生物，一段時間后記錄其菌絲生長長度，借此衡量絲狀微生物的生長。微生物計數(shù)法:0.1 mm0.1 mm2 400 個小方格。1 但只適宜于單細(xì)胞狀態(tài)的微生物或絲狀微生物所產(chǎn)生的孢子進(jìn)展計數(shù)，并且所得結(jié)果是包括死細(xì)胞在內(nèi)的總菌數(shù)。染色計數(shù)法：為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀看計數(shù)，而直接用血球計數(shù)板法又無法區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞的缺乏，人們制造了染色計數(shù)法。借助不同的染料對菌體進(jìn)展適當(dāng)?shù)娜旧?，可以更便利的在顯微鏡下進(jìn)展活菌計

6、數(shù)。如酵母活細(xì)胞計數(shù)可用美藍(lán)染色液，染色后在顯微鏡下觀看，活細(xì)胞為無色，而死細(xì)胞為藍(lán)色。J0ix2 Kt1SU比例計數(shù)法將顆粒如霉菌孢子或紅細(xì)胞濃度的液體與一待測細(xì)胞濃度的菌液按肯定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數(shù)出各自的數(shù)目，即可得未知菌液的細(xì)胞濃度。這種計數(shù)方法比較粗放。并且需要配制顆粒濃度的懸液做標(biāo)準(zhǔn)。液體稀釋法：10 5 1毫升到3組共5probably number得出菌樣的含菌數(shù)，依據(jù)樣品稀釋倍數(shù)計算出活菌含量。該法常用于食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。+ P*K6wAh平板菌落計數(shù)法：這是一種最常用的活菌計數(shù)法。將待測菌液進(jìn)展梯度稀釋，取肯定體積的稀釋菌液與適

7、宜的固體培育基在凝固前均勻混合，或?qū)⒕和坎加谝涯痰墓腆w培育基平板上。保溫培育后，用平板上消滅的菌落數(shù)乘以菌液稀釋度，9cm 50-500 個菌落為宜。但方法比較麻煩，操作者需有嫻熟的技術(shù)。平板菌落計數(shù)法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數(shù)，而且同時將菌液中的細(xì)菌進(jìn)展了一次分別培育，獲得了單克隆。試劑紙法：在平板計數(shù)法的根底上，進(jìn)展了小型商品化產(chǎn)品以供快速計數(shù)用。形式有小型厚濾紙片，瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有適宜的培育基，其中參加活性指示劑 2，3，5-氯化三苯基四氮唑TTC，無色待蘸取測試菌液后置的含菌量。試劑紙法計數(shù)快捷準(zhǔn)確，相比而言避開了平板計數(shù)法的人為操作誤差。膜過濾法：用特別的濾膜過

8、濾肯定體積的含菌樣品，經(jīng)丫叮橙染色，在紫外顯微鏡下觀看細(xì)胞的熒光，活細(xì)胞會發(fā)橙色熒光，而死細(xì)胞則發(fā)綠色熒光。生理指標(biāo)法：微生物的生長伴隨著一系列生理指標(biāo)發(fā)生變化，例如酸堿度，發(fā)酵液中的含氮量，含糖量，產(chǎn)氣量等，與生長量相平行的生理指標(biāo)很多，它們可作為生長測定的相對值。測定含氮量：Dumas N2 氣法。Dumas N2 氣法是將CuO CO2 KOH CO2 N2 的量。測定含碳量：將少量0.2-2.0 mg1 2 2%K2Cr2O7 100 0C 下30 5 580nm 的波長下讀取吸光光度值，即可推算誕生長量。需用試劑做空白比照，用標(biāo)準(zhǔn)樣品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。復(fù)原糖測定法：復(fù)原糖通常是指單糖或寡糖

9、，可以被微生物直接利用，通過復(fù)原糖的測定可間接反映微生物的生長狀況，常用于大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長的常規(guī)監(jiān)測。方法是，離心發(fā)酵液，取上清液，參加斐林試劑，沸水浴煮沸 3Na2S2O3 Na2S2O3 至終點，查表讀出復(fù)原糖的含量。氨基氮的測定：方法是，離心發(fā)酵液，取上清液，參加甲基紅和鹽酸作指示劑，參加0.02N NaOH 調(diào)色至顏色剛剛褪去，參加18%0.02N NaOH 的用量折算出氨基氮的含量。依據(jù)培育液中氨基氮的含量，可間接反映微生物的生長狀況。其他生理物質(zhì)的測定：P，DNA，RNA，ATP，NAM乙酰胞壁酸CO2用標(biāo)記葡萄糖做基質(zhì)，耗氧，黏度，產(chǎn)熱等指標(biāo)， 都可用于生長量的測定

10、。也可以依據(jù)反響前后的基質(zhì)濃度變化，最終產(chǎn)氣量，微生物活性三BMP-2 的長勢。商業(yè)化快速微生物檢測法：微生物的檢測，其進(jìn)展方向是快速，準(zhǔn)確，簡便，自動化，當(dāng)前很多生物制品公司利用傳統(tǒng)微生物檢測原理，結(jié)合不同的檢測方法，設(shè)計了形式各異的微生物檢測儀器設(shè)備，正逐步廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)微生物檢測和科學(xué)爭辯領(lǐng)域。例如：1、抗干擾培育基和微生物數(shù)量快速檢測技術(shù)結(jié)合解決了傳統(tǒng)微生物檢測手段不能解決的難題，為建立一套完整的抗干擾微生物檢測系統(tǒng)奠定了堅實的根底。中科院廣州分院合作產(chǎn)業(yè)處供給的抗干擾微生物培育基，型生化鑒定管，微生物計數(shù)卡，環(huán)境質(zhì)量檢測試劑盒等，可便利的用于多項檢測。2、BACTOMETER 全自動各類總菌數(shù)及快速細(xì)菌檢測系統(tǒng)可以數(shù)小時內(nèi)獲得監(jiān)測結(jié)果，樣本顏色及光學(xué)特征都不影響讀數(shù)，對酵母和霉菌檢測同樣高度敏感原理是利用電阻抗法IMPEDANCE TECHNOLOGY