1、 3化學(xué)藥物質(zhì)量把握分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則一、概述保證藥品安全、有效、質(zhì)量可控是藥品研發(fā)和評(píng)價(jià)應(yīng)遵循的根本原則，其中，對(duì)藥品進(jìn)展質(zhì)量把握是保證藥品安全有效的根底和前提。為到達(dá)把握質(zhì)量的目的，需要多角度、多層面來(lái)把握藥品質(zhì)量，也就是說(shuō)要對(duì)藥物進(jìn)展多個(gè)工程測(cè)試，來(lái)全面考察藥品質(zhì)量。一般地，每一測(cè)試工程可選用不同的分析方法，為使測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確、牢靠，必需對(duì)所承受的分析方法的科學(xué)性、準(zhǔn)確性和可行性進(jìn)展驗(yàn)證，以充分說(shuō)明的是推斷承受的分析方法是否科學(xué)、合理，是否能有效把握藥品的內(nèi)在質(zhì)量。從本質(zhì)上講，方法驗(yàn)證就是依據(jù)檢測(cè)工程的要求，預(yù)先設(shè)置肯定的驗(yàn)證內(nèi)容，并通過(guò)設(shè)計(jì)合理的試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證所承受的分析方法能否符合檢

2、測(cè)工程的要求。方法驗(yàn)證在分析方法建立過(guò)程中具有重要的作用，并成為質(zhì)量爭(zhēng)辯和質(zhì)量把握的組成局部。只有經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的分析方法才能用于把握藥品質(zhì)量，因此方法驗(yàn)證是制訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的根底。方法驗(yàn)證是藥物爭(zhēng)辯過(guò)程中的重要內(nèi)容。二、方法驗(yàn)證的一般原則原則上每個(gè)檢測(cè)工程承受的分析方法，均需要進(jìn)展方法驗(yàn)證。方法驗(yàn)證的內(nèi)容應(yīng)依據(jù)檢測(cè)工程的要求，結(jié)合所承受分析方法的特點(diǎn)確定。法用于制劑的鑒別和雜質(zhì)定量試驗(yàn)應(yīng)進(jìn)展不同要求的方法驗(yàn)證，前者重點(diǎn)要求驗(yàn)證專屬性，而后者重點(diǎn)要求驗(yàn)證專屬性、準(zhǔn)確度、定量限。三、方法驗(yàn)證涉及的三個(gè)主要方面一需要驗(yàn)證的檢測(cè)工程鑒別、雜質(zhì)檢查定量測(cè)定含量測(cè)定、溶出度、釋放度等、其他特定檢測(cè)工程 分子量及分

3、子量分布、生物活性等鑒別的目的在于判定被分析物是目標(biāo)化合物，而非其它物質(zhì)，用于鑒別的分析方法要求具有較強(qiáng)的專屬性。雜質(zhì)檢查主要用于把握主成分以外的雜質(zhì)，如有機(jī)雜質(zhì)、無(wú)機(jī)雜質(zhì)等。雜質(zhì)檢查可分為限度試驗(yàn)和定量試驗(yàn)兩種狀況。用于限度試驗(yàn)的分析方法驗(yàn)證側(cè)重專屬性和檢測(cè)限。用于定量試驗(yàn)的分析方法驗(yàn)證強(qiáng)調(diào)專屬性、準(zhǔn)確度和定量限。定量測(cè)定包括含量測(cè)定、制劑的溶出度測(cè)定等，由于此類工程對(duì)準(zhǔn)確性要求較高， 故所承受的分析方法要求具有肯定的專屬性、準(zhǔn)確度和線性。其他特定檢測(cè)工程包括粒徑分布、旋光度、分子量分布、生物活性等，由于這些檢測(cè)工程的要求與鑒別、雜質(zhì)檢查、定量測(cè)定等有所不同，對(duì)于這些工程的分析方法驗(yàn)證應(yīng)有不

4、同的要求。二分析方法分析方法是為完成上述各檢測(cè)工程而設(shè)定和建立的測(cè)試方法。分析方法原理儀器及儀器參數(shù)試劑系統(tǒng)適用性試驗(yàn)供試品溶液制備比照品溶液制備測(cè)定計(jì)算及測(cè)試結(jié)果的報(bào)告等測(cè)試方法化學(xué)分析方法儀器分析方法這些方法各有特點(diǎn)，同一測(cè)試方法可用于不同的檢測(cè)工程，但驗(yàn)證內(nèi)容可不相三驗(yàn)證內(nèi)容驗(yàn)證內(nèi)容：方法的專屬性線性范圍準(zhǔn)確度周密度檢測(cè)限定量限耐用性系統(tǒng)適用性等四、方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容一專屬性專屬性系指在其他成分如雜質(zhì)、降解物、輔料等可能存在下，承受的分析方法能夠正確鑒定、檢出被分析物質(zhì)的特性。通常，鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定方法中均應(yīng)考察其專屬性。如承受的方法不夠?qū)伲瑧?yīng)承受多個(gè)方法予以補(bǔ)充。1、鑒別反響

5、鑒別試驗(yàn)應(yīng)確證被分析物符合其特征。專屬性試驗(yàn)要求證明能與可能共存的物質(zhì)或構(gòu)造相像化合物區(qū)分，需確證含被分析物的供試品呈正反響，而不含被測(cè)成分的陰性比照呈負(fù)反響，構(gòu)造相像或組分中的有關(guān)化合物也應(yīng)呈負(fù)反響。2、雜質(zhì)檢查作為純度檢查，所承受的分析方法應(yīng)確保可檢出被分析物中雜質(zhì)的含量，如有關(guān)物質(zhì)、重金屬、有機(jī)溶劑等。因此雜質(zhì)檢查要求分析方法有肯定的專屬性。在雜質(zhì)可獲得的狀況下，可向供試品中參加肯定量的雜質(zhì)，證明雜質(zhì)與共存物質(zhì)能得到分別和檢出，并具適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確度與周密度。在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的狀況下，專屬性可通過(guò)與另一種已證明合理但分別或 檢測(cè)原理不同、或具較強(qiáng)區(qū)分力量的方法進(jìn)展結(jié)果比較來(lái)確定。或?qū)⒐?/p>

6、試品用強(qiáng)光 照耀，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化的方法進(jìn)展破壞制劑應(yīng)考慮輔料的影響比較破壞前后檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)和量。必要時(shí)可承受二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)，進(jìn) 行色譜峰純度檢查。3、含量測(cè)定含量測(cè)定目的是得到供試品中被分析物的含量或效價(jià)的準(zhǔn)確結(jié)果。在雜質(zhì)可獲得的狀況下，對(duì)于主成分含量測(cè)定可在供試品中參加雜質(zhì)或輔料，考察測(cè)定結(jié)果是否受干擾，并與未加雜質(zhì)和輔料的供試品比較測(cè)定結(jié)果。在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的狀況下，可承受另一個(gè)閱歷證了的或藥典方法進(jìn)展比較，比照兩種方法測(cè)定的結(jié)果。也可承受破壞性試驗(yàn)強(qiáng)光照耀，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化，得到含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，用兩種方法進(jìn)展含量測(cè)定，比較測(cè)定結(jié)果。

7、必要時(shí)進(jìn)展色譜峰純度檢查，證明含量測(cè)定成分的色譜峰中不包含其他成分。二線性線性系指在設(shè)計(jì)的測(cè)定范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果與供試品中被分析物的濃度量直接呈 周密稀釋，或分別周密稱樣，制備一系列被測(cè)物質(zhì)濃度系列進(jìn)展測(cè)定，至少制備 5 個(gè)濃度。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀看是否呈線性，用最小二明依據(jù)。三范圍范圍系指能夠到達(dá)肯定的準(zhǔn)確度、周密度和線性，測(cè)試方法適用的試樣中被分析物驗(yàn)方法。圍通常用與分析方法的測(cè)試結(jié)果一樣的單位如百分濃度表達(dá)。涉及到定量測(cè)定的檢測(cè)工程均需要對(duì)范圍進(jìn)展驗(yàn)證，如含量測(cè)定、含量均勻度、溶出度或釋放度、雜質(zhì)定量試驗(yàn)等。范圍應(yīng)依據(jù)劑型和或檢測(cè)工程的要求確定。1、含量測(cè)定 范圍

8、應(yīng)為測(cè)試濃度的 80100或更寬。2、制劑含量均勻度 范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的 70130。依據(jù)劑型特點(diǎn)，如氣霧劑、噴霧劑，必要時(shí)，范圍可適當(dāng)放寬。3、溶出度或釋放度 對(duì)于溶出度，范圍應(yīng)為限度的20；如規(guī)定限度范圍，則應(yīng)為下限的-20至上限的+20。 對(duì)于釋放度，如規(guī)定限度范圍為，從1 小時(shí)后為2024 900110。4、雜質(zhì) 雜質(zhì)測(cè)定時(shí)，范圍應(yīng)依據(jù)初步實(shí)測(cè)結(jié)果，擬訂出規(guī)定限度的20。假設(shè)含量測(cè)定與雜質(zhì)檢查同時(shí)測(cè)定，用面積歸一化法，則線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定限度的-20至含量限度或上限的+20。四準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或認(rèn)可的參考值之間接近的程度。有時(shí)也 于制劑一般以回收率試驗(yàn)來(lái)進(jìn)展

9、驗(yàn)證。試驗(yàn)設(shè)計(jì)需考慮在規(guī)定范圍內(nèi)，制備3 個(gè)不同3 9 次，報(bào)告參加量的回收率或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其可信限。1、含量測(cè)定原料藥可用純度的比照品或符合要求的原料藥進(jìn)展測(cè)定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)展比較。制劑可用含量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)展測(cè)定。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中參加量的被測(cè)物進(jìn)展測(cè)定，必要時(shí)，與另一個(gè)已建立準(zhǔn)確度的方法比較結(jié)果。2、雜質(zhì)定量試驗(yàn)雜質(zhì)的定量試驗(yàn)可向原料藥或制劑中參加量雜質(zhì)進(jìn)展測(cè)定 能測(cè)得雜質(zhì)的相對(duì)響應(yīng)因子，可在線測(cè)定雜質(zhì)的相關(guān)數(shù)據(jù)，如承受二極管陣列檢 測(cè)器測(cè)定紫外光譜，當(dāng)雜質(zhì)的光譜與主成分的光譜相像，則可承受原料藥的響應(yīng)因

10、子自身比照法重量比或面積比。五周密度周密度系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一均質(zhì)供試品，經(jīng)屢次取樣進(jìn)展一系列檢測(cè)所得結(jié)果之間的接近程度離散程度。周密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。取樣測(cè)定次數(shù)應(yīng)至少6 次。周密度可以從三個(gè)層次考察：重復(fù)性中間周密度重現(xiàn)性1、重復(fù)性重復(fù)性系指在同樣的操作條件下，在較短時(shí)間間隔內(nèi)，由同一分析人員測(cè)定所得結(jié)9 3 3 1006 次的結(jié)果進(jìn)展評(píng)價(jià)。2、中間周密度中間周密度系指在同一試驗(yàn)室，由于試驗(yàn)室內(nèi)部條件轉(zhuǎn)變，如時(shí)間、分析人員、儀 器設(shè)備、測(cè)定結(jié)果的周密度。 驗(yàn)證設(shè)計(jì)方案中的變動(dòng)因素一般為日期、分析人員、設(shè)備。3、重現(xiàn)性指不同試驗(yàn)室之間不同分析人員測(cè)定結(jié)果的周密

11、度。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)承受時(shí)，應(yīng)進(jìn)展重現(xiàn)性試驗(yàn)。六檢測(cè)限證指標(biāo)的意義在于考察方法是否具備靈敏的檢測(cè)力量。因此對(duì)雜質(zhì)限度試驗(yàn)，需證明方法具有足夠低的檢測(cè)限，以保證檢出需把握的雜質(zhì)。六、對(duì)方法驗(yàn)證的評(píng)價(jià)一有關(guān)方法驗(yàn)證評(píng)價(jià)的一般考慮總體上，方法驗(yàn)證應(yīng)圍繞驗(yàn)證目的和一般原則來(lái)進(jìn)展，方法驗(yàn)證內(nèi)容的選擇和試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案應(yīng)系統(tǒng)、合理，驗(yàn)證過(guò)程應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)謹(jǐn)。 并非每個(gè)檢測(cè)工程的分析方法都需進(jìn)展全部?jī)?nèi)容的驗(yàn)證，但同時(shí)也要留意驗(yàn)證內(nèi)容應(yīng)充分，足以證明承受的分析方法的合理性。如雜質(zhì)限度試驗(yàn)一般需要驗(yàn)證專屬性和檢測(cè)限，而對(duì)于周密度、線性、定量限等涉及定量測(cè)定的工程，則一般不需要進(jìn)展驗(yàn)證。二方法驗(yàn)證的整體性和系統(tǒng)性方法驗(yàn)證內(nèi)容之間相互關(guān)聯(lián)，是一個(gè)整體。因此不管從研發(fā)角度還是評(píng)價(jià)角度，方析方法不太可能完全鑒別被分析物，此時(shí)承受兩種或兩種以上分析方法可加強(qiáng)鑒別工程的整體專屬性。在方法驗(yàn)證內(nèi)容之間也存在較