1、黃芪多糖對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用【摘要】目的：研究黃芪多糖對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的治療保護(hù)作用。方法：利用線栓法阻斷大腦中動脈A制作大鼠局灶性缺血再灌注腦損傷模型，并將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分假手術(shù)組，模型組，黃芪多糖低、中、高劑量組，于再灌后第1天、第3天、第7天處死取材，檢測各組大鼠腦組織含水量、超氧化物歧化酶SD、丙二醛DA變化情況，輔以氯化三苯四氮唑TT染色觀察腦梗死灶變化情況。結(jié)果：與假手術(shù)組比擬，模型組腦組織含水量及DA含量顯著升高，梗死灶體積顯著增大，SD值明顯降低；與模型組比擬，黃芪多糖各劑量組的腦含水量，DA含量顯著降低，SD值顯著增高，梗死范圍也明顯減校結(jié)論：黃芪

2、多糖可以通過降低腦組織含水量、DA程度，升高SD程度，對缺血腦損傷有一定的保護(hù)作用。【關(guān)鍵詞】黃芪多糖腦缺血再灌注損傷腦含水量SDDAPrtetiveEffetfAstragalusplysaharidenFalerebralIsheia-ReperfusinInjuryinRats【Abstrat】bjetive:TstudytheprtetiveeffetfAstragalusplysaharidenfalerebralisheia-reperfusininjuryinrats.ethds:Thedelsffalbrainisheia-reperfusininjuryaspreparedb

3、yiddleerebralarterylusin(A)inSD-rats.Theratsererandlydividedintshaperatinntrlgrup,delgrup,l,iddleandhighdsedruggrup,aftertreatentthebrainaterntentandthelevelfSD,DAereeasuredatthefirst,thirdandseventhdayafterreperfusin.TherangeferebralinflartasbservedbyTTdyEing.Resuit:parediththeshaperatinntrlgrup,th

4、ebrainaterntentandthelevelfDAeresignifiantlyhigher,andthelevelfSDassignifiantlylerindelgrup.ThebrainaterntentandthelevelfDAeresignifiantlyler,andthelevelfSDasbviuslyhigherinl,iddle,highdsegrupsthannesindelgrup.nlusin:PrtetiveeffetfAstragalusplysaharidenfalerebralisheia-reperfusininjuryinratsasrearda

5、blebyreduingthebrainaterntentandthelevelfDA,andinreasingthelevelfSD.【Keyrds】Astragalusplysaharide;erebralIsheia-ReperfusinInjury;SD;DA黃芪多糖Astragalusplysaharide,APES是從傳統(tǒng)中藥黃芪中提取的具有較強(qiáng)生物活性的大分子化合物，對造血系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、物質(zhì)代謝系統(tǒng)以及保肝護(hù)腎、抗病毒、抗腫瘤、抗應(yīng)激等多方面具有藥理學(xué)活性1。其對缺血腦損傷的影響作用，已經(jīng)引起人們的重視。本實(shí)驗(yàn)通過線栓法制備大鼠局灶性腦缺血A再灌損傷模型，研究黃芪多

6、糖對缺血腦損傷中腦組織含水量、SD、DA含量的影響。1材料與方法1.1材料1.1.1實(shí)驗(yàn)動物SD大鼠，雌雄各半，體重250300g，購自安徽長臨河醫(yī)藥科技普通級。1.1.2藥品與試劑APES由博泰生物科技提供，純度95%；SD試劑盒批號：20220414，DA試劑盒批號：20220416，考馬斯亮蘭蛋白試劑盒批號：20220413均購自南京建成生物工程研究所；水合氯醛批號：20220613上海五聯(lián)化工廠；TTAres07/2022；直徑0.26魚線日本PATU公司。1.1.3儀器7200型紫外分光光度計(jì)尤尼柯上海儀器；冷凍離心機(jī)3K30siga；恒溫培養(yǎng)箱HPX-9272BE常州諾基儀器；玻璃

7、勻漿器上海儀器二廠。1.2方法1.2.1分組與給藥隨機(jī)分為5組，分別為假手術(shù)組；模型組：黃芪多糖孝中、大劑量組；每組19只，藥物組與手術(shù)后10分鐘腹腔注射黃芪多糖低0.5gkg1d1、中1gkg1d1、高2gkg1d1，由生理鹽水配置，之后每天同樣時間給藥，模型組和假手術(shù)組在相應(yīng)時間注射等體積生理鹽水。分別與給藥1天處死7只，3、7天各處死6只。1.2.2大鼠A再灌注模型制作利用改進(jìn)Lnga法23制作A模型：術(shù)前禁食12h但不禁水。大鼠以10%水合氯醛0.36l/100g腹腔注射麻醉，麻醉后仰臥固定，頸正中切口，依次別離暴露右側(cè)頸總動脈A、頸外動脈EA、頸內(nèi)動脈IA、0-3號絲線分別結(jié)扎A遠(yuǎn)心

8、端、EA，微型血管夾夾閉IA，在A處剪一小口，將頭端燒制圓鈍的魚線沿A插入IA，魚線插入18.520處感覺有明顯阻力后停頓進(jìn)線，結(jié)扎IA，固定魚線，縫合肌肉、皮膚，體外留2魚線以備再灌。手術(shù)10in后腹腔注射黃芪多糖；缺血90ins后，輕輕拔出魚線至遇到細(xì)微阻力，實(shí)現(xiàn)再灌，剪去體外部分魚線，待大鼠完全清醒后進(jìn)展神經(jīng)行為學(xué)評分。假手術(shù)只別離A、IA、EA、腹腔注射等體積生理鹽水。1.2.3神經(jīng)行為評分參考Lnga245分制評分標(biāo)準(zhǔn)：0分無神經(jīng)缺損癥；1分提尾時對側(cè)前肢內(nèi)收，不能完全伸直；2分爬行時向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)、劃圈；3分站立時向?qū)?cè)傾倒；4分無自主活動伴意識障礙；5分死亡。14分符合實(shí)驗(yàn)要求，剔除

9、不符合實(shí)驗(yàn)要求的并加以補(bǔ)充。1.2.4腦組織含水量、SD、DA的測定缺血再灌1天、3天、7天后分批處死迅速取腦，取右側(cè)半腦二分之一用于計(jì)算腦含水量變化，稱濕重于100烘箱內(nèi)至恒重，腦含水量%=濕重干重/濕重100%。另二分之一制作腦勻漿，按照試劑盒說明書方法檢測SD、DA。1.2.5腦組織切片TT染色觀察配置1%TT磷酸緩沖液pH7.4；第一天處死的大鼠各組中取一只，迅速取腦放于20冰箱中冷凍15in，切去嗅球和地位腦干，間隔2連續(xù)冠狀切片6片，放入1%TT磷酸緩沖液37避光染色30ins，10%福爾馬林固定，拍照。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差xs表示，組間差異用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)展方差分

10、析。2結(jié)果2.1腦組織含水量變化含水量測定結(jié)果見表1。表1缺血再灌1天、3天和7天腦含水量變化情況注：VS假手術(shù)P0.01；VS模型組*P0.05，*P0.01。2.2各組大鼠腦組織SD、DA含量測定SD、DA含量測定結(jié)果見表2、表3。表2缺血再灌1天、3天和7天腦組織SD含量變化情況注：VS假手術(shù)P0.01；VS模型組*P0.05，*P0.01。表3缺血再灌1天、3天和7天腦組織DA含量變化情況注：VS假手術(shù)P0.01；VS模型組*P0.05，*P0.01。2.2大鼠腦組織切片TT染色結(jié)果轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3討論與分析缺血性腦血管病是一種嚴(yán)重危害人類安康的疾病，缺血性腦血管病導(dǎo)致的偏癱及

11、認(rèn)識功能障礙成為影響人類生存治療的最大保障，臨床上大腦中動脈閉塞導(dǎo)致的腦缺血堵塞占了缺血性腦血管病的絕大部分5，部分腦缺血模型一般采用A方法，因A模擬的病例過程與臨床腦卒中很相似，被普遍認(rèn)為是局灶性腦缺血的標(biāo)準(zhǔn)動物模型67，故本實(shí)驗(yàn)采用線栓法制備局灶性腦缺血損傷模型。腦缺血再灌注損傷機(jī)制非常復(fù)雜，有許多因素參與再灌注損傷過程，如自由基、興奮性神經(jīng)遞質(zhì)效應(yīng)、細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載、一氧化氮、炎性介質(zhì)損傷等89，目前認(rèn)為自由基損傷在其中發(fā)揮著重要的作用1012。與腦缺血有關(guān)的自由基主要是氧自由基，自由基主要攻擊脂質(zhì)膜中的不飽和脂肪酸的多個不飽和鏈，使之發(fā)生過氧化反響，導(dǎo)致質(zhì)膜損傷，通透性增加，各種細(xì)胞器

12、解體，加重細(xì)胞毒性水腫13；DA作為氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反響的代謝產(chǎn)物，其含量的變化間接地反響了腦組織中氧自由基含量的變化；SD是一種帶負(fù)電荷的金屬蛋白酶，它通過歧化的方式去除超氧陰離子自由基，腦缺血及再灌時產(chǎn)生過多的自由基，消耗了大量的SD，導(dǎo)致腦組織中含量下降1415。因此可以通過測定腦組織含水量、DA、SD變化，間接的反響腦組織中自由基含量及腦組織損傷程度。本實(shí)驗(yàn)測定了各組實(shí)驗(yàn)大鼠1、3、7天的腦組織含水量、SD、DA含量變化情況。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，模型組的腦含水量、DA含量明顯高于假手術(shù)組，SD含量明顯低于假手術(shù)組；而各劑量藥物組腦組織的含水量、DA程度與模型組相比明顯有所降低，SD程度有明顯進(jìn)步，尤其是中劑量和高劑量組有極顯著的變化。另外，TT染色可以很好的顯示損傷后腦組織的梗死狀況16，由TT染色結(jié)果也可以看出，APES治療組梗死范圍較模型組減少，中、高劑量組的梗死范圍較小劑量組明顯的減少。有文獻(xiàn)報道1718，局灶性缺血再灌注4872h時損傷程度到達(dá)頂峰。本實(shí)