1、幾種常見的動物源性飼料中揮發(fā)性鹽基氮的測定國家飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心（武漢）揮發(fā)性鹽基氮 total volatile basic nitrogen 物質(zhì)，簡稱 TVBN。它是指肉蛋白質(zhì)在微生物的作用下發(fā)生分解產(chǎn)生氨、胺類堿性含氮物質(zhì)，這類物質(zhì)易和有機酸形成鹽，具有揮發(fā)性，稱這類物質(zhì)為揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)。肉中揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)含量的多少可以反應(yīng)肉品質(zhì)新鮮程度。 TVBN值：100克肉中所含揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)的毫克數(shù)。該值是肉品新鮮度指標(biāo)。國家標(biāo)準規(guī)定：一級鮮肉15mg/100g,二級鮮肉15-25mg/100g,腐敗肉25mg/100g。 揮發(fā)性鹽基氮作為食品和水產(chǎn)品質(zhì)量的重要指標(biāo)，在近幾年才被應(yīng)用作

2、為動物源性飼料產(chǎn)品的一個重要指標(biāo)，主要反映動物源性飼料的新鮮度。 本試驗通過參考 GB/T5009.44-2003肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準的分析方法，結(jié)合動物源性飼料產(chǎn)品的實際情況，建立一種適用于動物源性飼料產(chǎn)品中揮發(fā)性鹽基氮含量測定的簡便方法。 1、原理 動物源性飼料產(chǎn)品富含蛋白質(zhì)，由于微生物的作用易發(fā)生腐敗，使蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生氨及胺類等堿性含氮物質(zhì)，稱為揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)。此類物質(zhì)具有揮發(fā)性，用凱氏定氮法在堿性環(huán)境中將揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)蒸餾出來后，用硼酸接收，再用標(biāo)準鹽酸滴定，計算含量即為 TVBN值。 2、 儀器與試劑 2.1 儀器 實驗室用樣品粉碎機：刀片式高速粉碎機；分析天平：感量 0.0001

3、g；半微量凱氏蒸餾裝置：水蒸汽蒸餾式；振蕩機；離心機；勻漿機；微量滴定管：最小分度0.01 mL。 2.2 溶液的配制 2.2.1 c=0.01molL鹽酸標(biāo)準溶液（無水碳酸鈉標(biāo)定）：吸取分析純鹽酸1mL，用蒸餾水定容至1000mL，標(biāo)定。 2.2.2 2%硼酸溶液：分析純硼酸2g溶于100mL水配成2%溶液。 2.2.3 混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，陰涼處保存期三個月以內(nèi)。 2.2.4 1%氧化鎂溶液：分析純氧化鎂1.0g溶于100mL蒸餾水振蕩成混懸液。 2.2.5 防泡劑:不含氮、主成分為有機硅的固態(tài)或液態(tài)試劑。 3、 測定步驟 3.1

4、 試樣的處理 按飼料采樣方法制備試樣 , 要求粉碎細度能一次性達95%以上過CQ16(相當(dāng)于40目)篩，粉碎樣品充分混合后（篩上、篩下的全部篩分范圍樣品）裝入磨口瓶中備用,在粉碎樣品時，磨膛不能發(fā)熱。 稱取 10g試樣(精確到0.0001g)于250mL具塞錐形瓶中，加蒸餾水100mL，振蕩搖勻30min。魚粉和蠶蛹粉等原料采用過濾，濾液為樣液；而血漿蛋白粉、血球蛋白粉、魚溶漿等不易過濾的原料采用離心，在離心機上于1 500g(大約3000r/min)離心10min，上液為試樣液。 3.2 蒸餾 取 20mL2%的硼酸溶液于150mL錐形瓶中，加混合指示劑2滴，使半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入

5、此溶液。蒸餾裝置的蒸汽發(fā)生器的水中應(yīng)加甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，且保持此溶液為橙紅色，否則補加硫酸。準確移取 10mL樣液注入蒸餾裝置的反應(yīng)室中，用少量蒸餾水沖洗進樣入口，再加入10mL1.0%的氧化鎂溶液，不起泡的動物源性飼料不加防泡劑，而易起泡的動物源性飼料產(chǎn)品，例如血漿、血球、血粉等必須滴加1g固體（或0.5ml液體）防暴劑，在入口處加水封好，防止漏氣，蒸餾4min，使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。 蒸餾。吸收氨后的吸收液立即用 0.01mol/L鹽酸標(biāo)準液滴定，溶液由藍綠色變?yōu)榛壹t色為終點，同時進行試劑空白測定。 結(jié)果的計算 揮發(fā)性鹽

6、基氮（ TVBN）含量以（mg/100g）表示。 = (V1-V2)*C*14/(M*0.1)*100式中 : :樣品揮發(fā)性鹽基氮的含量mg/100g； V 1 滴定試樣時所需鹽酸標(biāo)準溶液體積， mL； V 2 滴定空白時所需鹽酸標(biāo)準溶液體積， mL； C鹽酸標(biāo)準溶液濃度，mol/L； m：試樣重量，g； 14：與1.00mL鹽酸標(biāo)準滴定溶液c(HCl)=1.000mol/L相當(dāng)?shù)牡馁|(zhì)量，mg。 4、結(jié)果與討論 4.1 不同試樣制備方式對檢測結(jié)果的影響 4.1.1 不同粉碎粒度試樣對測試結(jié)果的影響 分別取未粉碎的魚粉試樣，粉碎至 40目、60目的魚粉試樣，按3的分析測試步驟進行分析，每種處理

7、情況測試5次，測試結(jié)果見表1。表 1 不同粉碎粒度、不同試樣處理方式對測定結(jié)果的影響 項目振蕩 30 min處理 高速勻漿機 10min處理 未粉碎 40目 60目 未粉碎 40目 60目 揮發(fā)性鹽基 氮 ,mg/100g 150.1 148.3 152.4 147.5 153.4 215.7 221.4 217.9 218.5 220.1 225.3 219.8 220.8 223.4 221.3 215.4 214.8 217.5 216.8 219.7 220.3 219.8 220.8 217.5 222.6 224.5 221.3 223.2 222.6 219.9 平均值， mg/

8、100g 150.3 217.7 223.5 216.8 220.2 222.3 根據(jù)單因子方差分析，在（ a0.05）,未粉碎處理的樣品與粉碎至40目和60目樣品存在顯著差異；而粉碎至40目和60目樣品處理差異不顯著。 4.1.2 不同試樣處理方式對測試結(jié)果的影響 分別取未粉碎和已粉碎 40目、60目魚粉試樣用高速勻漿機勻漿10分鐘，按3的分析測試步驟進行分析，測試結(jié)果見下表1。 根據(jù)單因子方差分析，在（ a0.05）,三種處理方式差異不顯著。 4.2本方法的重復(fù)性 分別取魚粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、血粉、膨化血粉等樣品，每個樣品測定 6次，計算其標(biāo)準偏差及變異系數(shù)，結(jié)果見表2。 表 2

9、不同試樣揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量測定的重復(fù)性 測定值， mg/100g 平均值 mg/100g 標(biāo)準偏差 變異系數(shù)(%) 魚粉 215.7,221.4,217.9,218.5,220.1 217.7 2.175 1.00 血球蛋白粉 1# 17.5,18.3,16.9,17.7,18.5 17.78 0.642 3.61 血球蛋白粉 2# 101.5,103.7,104.8,102.4,105.2 103.5 1.567 1.51 血漿蛋白粉 1# 15.2,13.9,14.6,15.6,16.1 15.08 0.858 5.69 血粉 554.7,537.1,547.0,558.3,57

10、1.3 553.68 12.771 2.31 膨化血粉 2215.2,2240.5,2198.7,2207.3,2168.9 2206.12 26.011 1.18 4.3 本方法的回收率 在以上 魚粉、血球蛋白粉 中，按一定濃度的（ NH 4 ） 2 SO 4 溶液，按本方法進行測試，每個梯度重復(fù)測定五次，結(jié)果見表 3 。 4.4 本方法與 GB/T5009.44-2003 肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準的分析方法半微量定氮法的比較。 4.4.1 本方法與 GB/T5009.44-2003 肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準的分析方法適用范圍的比較。 本 方法適用所有的動物源性飼料產(chǎn)品的揮發(fā)性鹽基氮（ TVBN）含量的

11、測定； GB/T5009.44-2003 肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準的分析方法半微量定氮法適用與魚粉、肉粉等不起泡的產(chǎn)品 TVBN 測定；微量擴散法適用低含量所有產(chǎn)品的 TVBN 測定，但測定時間較長，方法較半微量定氮法煩瑣。 4.4.2 本方法與 GB/T5009.44-2003 肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準的分析方法測定結(jié)果的比較。 分別取魚粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、血粉、膨化血粉等樣品，根據(jù)各方法的適用范圍采用相應(yīng)的方法測定揮發(fā)性鹽基氮（ TVBN）含量，測定結(jié)果見表5。 5、結(jié)論 本試驗建立了動物源性飼料產(chǎn)品中揮發(fā)性鹽基氮的含量的測定方法，該法建立動物源性飼料產(chǎn)品樣品處理、采用半微量蒸餾法直接測定氮含

12、量，普通飼料企業(yè)常規(guī)質(zhì)量檢測條件下可以滿足，具有提取效率高、易于操作等特點。通過研究表明：樣品經(jīng)粉碎處理，平均回收率可達98%以上。該法針對幾種常見的動物源性飼料揮發(fā)性鹽基氮的含量測定設(shè)計，與國標(biāo)法相比具有處理簡便、回收率高的特點，同時具有重現(xiàn)性好、精密度高、操作簡便、省時等優(yōu)點。 表 3 方法的回收率（ n=5 ） 加入量 測得均值 平均回收率（ % ） 魚粉 50.0 267.3 99.20 100.0 315.9 98.20 血球蛋白粉 2# 50.0 153.6 100.20 100.0 203.3 99.80 表 4 本方法與 GB/T5009.44-2003 肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準的分析方法適用范圍的比較 方法 適用范圍 不適用范圍 本方法 魚粉、肉粉、血粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、膨化血粉等 無 GB/T5009.44-2003 半微量定氮法 魚粉、肉粉等不起泡產(chǎn)品 血粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、膨化血粉等 微量擴散法 魚粉、肉粉、血粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉 膨化血粉等高 TVBN含量產(chǎn)品 表 5 本方法與 GB/T5009.44-2003 肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準的分析方法測定結(jié)果的比較 單位： mg/100g 本方法 (n=5) GB/T5009.44-2003 半微量定氮法 (n=2) 微量擴散法