醫(yī)療衛(wèi)生機構醫(yī)院臨床體液檢驗的技術要求范圍本標準規(guī)定了腦脊液、漿膜腔積液、關節(jié)腔積液、糞便、精液和陰道分泌物等體液標本臨床檢驗的技術要求。本標準適用于開展上述類型體液標本檢測的臨床實驗室。腦脊液檢驗技術要求標本采集、轉運和貯存要求實驗室應與臨床共同討論并制訂腦脊液標本采集和處理的標準操作程序。臨床醫(yī)生應在申請單上注明腦脊液標本采集部位（如腰椎或腦室）的相關信息。腦脊液標本采集宜使用無菌試管（用于細胞學檢查的標本不宜使用玻璃材質的容器），若能采集足量標本，應將其分裝至3～4支試管，每管宜取1mL（真菌和結核分枝桿菌檢查需適當增加體積），無需使用抗凝劑。第1管用于化學和免疫學檢查（如蛋白質、葡萄糖等），第2管用于微生物學檢查，第3管用于細胞計數和分類計數。如懷疑有惡性腫瘤，宜采集第4管用于細胞病理學檢查。若第1管混有穿刺出血，不可用于對疾病診斷（如疑似多發(fā)性硬化癥患者）具有重要影響的蛋白質檢查。若無法采集足量標本，可不進行分裝，由醫(yī)生決定檢查項目；若需要進行微生物學檢查，宜優(yōu)先進行，再盡快進行其他檢查。腦脊液標本應在室溫條件下轉運，宜在1h內完成檢查。無法及時檢查的標本可短期貯存于2℃～8℃，長期貯存應置于低溫冷凍（-20℃以下）條件下。低溫冷凍貯存的標本只適于蛋白質和RNA分析。微生物學檢查標本在轉運前后均不可冷藏，懷疑腦膜炎奈瑟菌和流感嗜血桿菌感染的標本應保暖立即送檢或在患者床旁接種。理學檢查腦脊液理學檢查主要包括顏色和透明度等。實驗室應規(guī)定腦脊液理學檢查指標描述和報告的規(guī)范用語。化學和免疫學檢查腦脊液化學檢查主要包括葡萄糖、蛋白質、氯化物、酶學測定和蛋白電泳等，免疫學檢查主要包括免疫球蛋白、髓鞘堿性蛋白測定等。實驗室應注意各項目不同原理檢測方法間靈敏度和特異度的差異，選擇適宜的方法開展檢測。進行腦脊液葡萄糖、白蛋白和免疫球蛋白測定時，宜同時檢測血清中的相應物質，計算腦脊液/血清葡萄糖比值、腦脊液/血清白蛋白商（Qalb）、腦脊液/血清IgG商（QIgG）及IgG指數（即QIgG與Qalb比值）。細胞學檢查直接法細胞計數宜使用標注容積的血細胞定量計數板進行細胞計數，包括細胞總數、紅細胞數、有核細胞數和有核細胞分類計數。外觀正常的標本無需稀釋，渾濁和血性標本需進行1:10～1:200倍稀釋。進行紅細胞計數時可使用生理鹽水稀釋標本；進行有核細胞計數時，可使用3%冰醋酸對標本進行處理。細胞計數按以下程序進行：將標本充分混勻，可用旋轉式攪拌儀混勻2min～5min或手工顛倒混勻10～15次。分別吸取少量充分混勻的標本，沖入計數板左右兩側的計數池（應首先確保計數板干凈），靜置5min～10min。使用低倍鏡（10×）觀察細胞分布情況，細胞應均勻分布（每個XX格內細胞數量相差不宜超過10個）且無重疊，否則宜重新充池。在高倍鏡（40×）下選擇合適的區(qū)域盡快進行細胞計數。每個計數池細胞計數區(qū)域的確定原則是：若估計9個XX格中細胞數少于200個，則計數全部9個XX格；若估計9個XX格中細胞數大于200個，則計數4個四角XX格；若估計1個XX格中細胞數大于200個，則計數中央XX格內4個角和中央5個XX格。具體操作示例：若標本無稀釋或l:10稀釋，則計數9個XX格；若標本l:20稀釋，則計數4個四角XX格；若標本l:100稀釋，則計數中央XX格；若標本l:200稀釋，則計數中央XX格內4個角和中央5個XX格。計數壓線細胞時，應遵循“數上不數下，數左不數右”的原則。紅細胞計數和有核細胞計數宜在同一計數池中完成，取兩個計數池計數結果的均值進行報告。細胞計數時，應注意鑒別紅細胞或淋巴細胞與新型隱球菌。細胞離心法細胞分類計數宜使用細胞離心法制備涂片進行有核細胞分類計數和細胞學檢查。為了增強細胞對玻片的粘附性，可在滴加標本前先向標本室中加入1滴22%白蛋白溶液。若涂片制備在標本采集4h后才完成，結果報告時宜注明“分類計數結果可能不準確”。應對涂片進行瑞氏染色，染色前涂片須保持干燥。細胞類型不能確定時，應將其歸入“非典型”細胞，并在報告時加以描述。懷疑惡性腫瘤時，應對全片進行檢查，發(fā)現可疑惡性細胞應及時通知臨床送細胞病理學檢查。儀器法細胞計數儀器法細胞計數的具體要求見附錄A。病原學檢查涂片檢查將腦脊液標本離心取沉淀物（離心時宜使用細胞甩片機）進行涂片，經革蘭染色查找肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、葡萄球菌和鏈球菌等，亞甲藍染色查找腦膜炎奈瑟菌，抗酸染色查找結核分枝桿菌，墨汁染色查找隱球菌。對于懷疑結核性腦膜炎的患者標本，宜靜置12h～24h后取標本表面形成的薄膜進行涂片染色，可提高結核分枝桿菌的檢出率。對于懷疑寄生蟲感染的患者，應注意查找吸蟲卵、阿米巴滋養(yǎng)體和絳蟲囊尾蚴等。病原體培養(yǎng)根據臨床表現和醫(yī)囑選擇合適的培養(yǎng)基進行普通細菌、結核分枝桿菌或真菌培養(yǎng)，臨床懷疑腦膿腫時應進行厭氧菌培養(yǎng)。所有進行培養(yǎng)的腦脊液應同時進行病原菌的涂片檢查?？乖瓩z測可檢測腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、隱球菌等病原菌抗原，檢測結果宜與涂片檢查和病原培養(yǎng)結果一起解釋，腦脊液隱球菌抗XX性有確診意義；其他抗XX性是重要診斷提示，宜結合病史、臨床表現、腦脊液其他檢查（細胞學、涂片和培養(yǎng)、化學等）綜合判斷”。核酸檢測必要時，實驗室可采用PCR等分子生物學方法檢測結核分枝桿菌、腦膜炎奈瑟菌等病原菌核酸。漿膜腔積液檢驗技術要求標本采集、轉運和貯存要求漿膜腔積液包括胸水、腹水、心包腔積液等，實驗室應與臨床共同制訂標本采集和處理的標準操作程序，并向臨床提供正確的標本采集容器和抗凝劑（必要時）。不同檢查項目的標本采集要求見表1。漿膜腔積液標本采集要求檢查項目可接受的抗凝劑條件推薦標本量（mL）細胞計數和分類計數EDTA5～8總蛋白、乳酸脫氫酶、葡萄糖、淀粉酶、甘油三酯和膽固醇測定等無抗凝劑或肝素8～10革蘭染色涂片、細菌培養(yǎng)SPS、無抗凝劑、無滅菌或抑菌作用抗凝劑8～10抗酸染色涂片、抗酸桿菌培養(yǎng)SPS、無抗凝劑、無滅菌或抑菌作用抗凝劑15～50巴氏染色涂片、細胞塊檢查無抗凝劑、肝素、EDTA5～50EDTA，乙二胺四乙酸；SPS，多聚茴香腦磺酸鈉標本應在室溫條件下盡快送檢。細胞計數和分類計數的標本若無法及時檢測，應置于2℃～8℃條件，但保存時間不宜超過48h。對于pH檢測，標本應置于冰上運送至實驗室。理學檢查漿膜腔積液理學檢查主要包括顏色和透明度等。實驗室應規(guī)定漿膜腔積液理學檢查指標描述和報告的規(guī)范用語?；瘜W和免疫學檢查漿膜腔積液化學檢查主要包括蛋白質、乳酸、葡萄糖和酶學測定等；免疫學檢查主要包括腫瘤標志物、免疫球蛋白測定等。葡萄糖測定應在標本采集后1h內完成，無法及時檢測的標本應用氟化鈉抗凝管采集；其他化學檢查宜在2h內完成；宜同時檢測血清標本中的相應物質并進行比較。嚴重化膿標本不宜進行pH檢測。細胞學檢查漿膜腔積液細胞學檢查主要包括細胞計數和分類計數等。細胞數量過多、渾濁或血性標本宜用生理鹽水進行稀釋；有凝塊的標本不能用于細胞計數和分類計數，但可用于細胞病理學檢查，需先輕輕攪動凝塊釋出細胞并進行洗滌處理。細胞計數方法可參考2.4.1.3。細胞分類計數宜采用細胞離心法制備涂片，應先洗滌細胞，以提高涂片中的細胞數量并保持細胞形態(tài)。涂片自然干燥、經瑞氏染色后進行細胞分類計數，發(fā)現可疑惡性細胞時，應及時通知臨床送細胞病理學檢查；發(fā)現結晶時，應在報告中注明。病原學檢查懷疑感染時，所有標本應進行革蘭染色涂片和培養(yǎng)。懷疑厭氧菌感染，則加做厭氧菌培養(yǎng)；腹水、肝膿腫穿刺液宜常規(guī)進行厭氧菌培養(yǎng)。懷疑寄生蟲感染時，應將標本離心后取沉渣進行瑞氏染色涂片檢查，查找有無微絲蚴、包蟲棘球蚴頭節(jié)和小鉤、阿米巴滋養(yǎng)體等。關節(jié)腔積液檢驗技術要求標本采集、轉運和貯存要求實驗室應與臨床共同制訂關節(jié)腔積液標本采集和處理的標準操作程序，并向臨床提供正確的標本采集容器和抗凝劑（必要時）。采集多管標本時，第1管應使用無抗凝劑試管，宜采集1mL～3mL，并觀察是否凝固，離心取上清液做化學和免疫學檢查（如葡萄糖、白蛋白和脂類、類風濕因子和補體測定等）；第2管應使用肝素鈉（25U/mL）或EDTA液體抗凝，用于細胞計數、分類計數和結晶鑒定時宜采集1mL～3mL，用于細胞病理學檢查時宜采集5mL以上，禁用肝素鋰、草酸鹽或EDTA粉末抗凝；第3管應使用肝素鈉抗凝、多聚茴香腦磺酸鈉或無抗凝劑試管，宜采集3mL以上，用于微生物學檢查。當標本量較少難以完成所有檢查時，應及時與臨床進行溝通，不宜拒收標本。標本應在室溫條件下盡快送檢。標本置于4℃可貯存48h，但隨著放置時間的XX，多數細胞發(fā)生溶解，僅能用于結晶檢查。理學檢查關節(jié)腔積液理學檢查主要包括顏色、透明度、黏稠度及凝塊形成試驗等，每管標本均應進行顏色和透明度檢查。宜采用拉絲試驗進行黏稠度檢查。實驗室應規(guī)定關節(jié)腔積液理學檢查指標描述和報告的規(guī)范用語。化學和免疫學檢查關節(jié)腔積液化學檢查主要包括葡萄糖、尿酸、乳酸、脂類和蛋白質測定等，免疫學檢查主要包括自身抗體、類風濕因子和抗原抗體檢測等；進行化學和免疫學檢查時宜同時檢測血清標本中的相應物質并進行比較。葡萄糖測定應在1h內完成，無法及時檢測的標本應使用氟化鈉抗凝管采集。細胞學和結晶檢查標本處理4.4.1.1關節(jié)腔積液較為粘稠，宜使用生理鹽水或透明質酸酶緩沖液對標本進行處理，如每毫升關節(jié)腔積液加透明質酸酶400單位，置于37℃孵育10min。4.4.1.2細胞數量過多、渾濁或血性標本宜用生理鹽水進行稀釋；進行有核細胞計數時，可使用低滲性鹽水（0.3%）破壞紅細胞，但不可使用乙酸，以免形成黏蛋白凝塊影響鏡檢。涂片檢查宜使用細胞離心法制備濕片和染色涂片（涂片自然干燥后用甲醇固定至少5min，進行瑞氏染色），進行細胞學和結晶檢查。宜使用光學顯微鏡的暗視野或偏振光顯微鏡進行結晶檢查（如尿酸鹽結晶、焦磷酸鈣結晶），應注意區(qū)分塵粒、劃痕、碎片與病理性結晶。細胞計數細胞計數方法同腦脊液細胞計數，宜在標本采集后1h內完成。關節(jié)腔積液標本較難混勻，可用旋轉式攪拌儀混勻5min～10min。病原學檢查應作為關節(jié)腔積液常規(guī)檢查項目，將標本離心后取沉淀進行革蘭染色涂片檢查，查找有無致病菌。必要時，根據臨床表現選擇合適的培養(yǎng)基進行細菌或真菌培養(yǎng)。糞便檢驗技術要求標本采集、轉運和貯存要求實驗室應向患者提供標本采集說明（口頭或書面）和符合要求的標本采集容器。應使用一次性、有蓋、可密封、潔凈、不滲漏、不易破損、開口和容量適宜的容器。用于細菌培養(yǎng)檢查的標本應使用無菌容器，且有明顯標識。應盡可能選取附著黏液、膿液、血液的新鮮異常糞便（宜多個部位留取，蠶豆大?。?，并避免尿液和異物（如衛(wèi)生紙、花露水、強力清潔劑、除臭劑等）污染。采集后的標本宜在1h內（夏季）或2h內（冬季）送檢。糞便隱血試驗宜連續(xù)3天每天送檢標本（適用時），每次采集糞便2個部位的標本送檢（置于同一標本容器中），不可使用直腸指檢標本。進行細菌檢查的標本應在發(fā)病初期和使用抗生素前采集，腹瀉患者標本應在急性期（3天內）采集。進行厭氧菌培養(yǎng)的標本應盡快送檢，必要時在床旁接種。查原蟲滋養(yǎng)體的標本應留取含膿血的稀軟糞便；查蟯蟲卵的標本應在子夜或早晨排便前用肛拭子在肛周皺襞處采集；查血吸蟲毛蚴應至少采集30g糞便；查寄生蟲體及蟲卵并計數應收集24h糞便。理學檢查糞便理學檢查至少包括糞便顏色和性狀等。實驗室應規(guī)定糞便理學檢查指標描述和報告的規(guī)范用語?；瘜W和免疫學檢查糞便隱血試驗糞便隱血試驗檢測方法有化學法和免疫法，不同方法的靈敏度和特異性存在差異，實驗室在選用新方法前應明確其分析性能。當一種方法的檢測結果與臨床不符時，宜采用另一種方法進行驗證。應按試劑說明書要求的比例使用稀釋液或生理鹽水對標本進行稀釋。當明顯柏油樣標本的檢測結果呈陰性時，應調整稀釋倍數后再次進行檢測。使用試帶進行糞便隱血試驗，試帶應在密閉、防潮的條件下保存，在有效期內使用。檢測臨床標本前應至少進行陰性和弱陽性水平的室內質控并保證結果在控。應按說明書規(guī)定的時間和標準進行結果判斷。其他檢查包括糞膽素、糞膽原和脂肪測定、病原體的免疫學檢查（如艱難梭菌抗原、病毒抗體檢測）等。細胞學和病原學檢查涂片檢查應使用潔凈的載玻片和新鮮生理鹽水制備標本涂片，涂片應厚薄適宜，以能透視紙上字跡為宜，加蓋玻片。必要時進行染色（如白細胞檢查時宜使用亞甲藍染色）。應按“城垛”式順序，先用低倍鏡觀察全片，再用高倍鏡觀察10個以上視野，查找各種細胞、寄生蟲卵、真菌、細菌和原蟲等病理成分。查見寄生蟲卵時，應描述蟲卵的形態(tài)特征。遇到可疑蟲卵或罕見蟲卵時應請上級檢驗人員復核，或送至技術水平更高的實驗室進行確認。使用集卵法（適用于各種蟲卵）、飽和鹽水漂浮法（適用于檢出鉤蟲卵）、離心沉淀法或自然沉淀法處理標本可提高寄生蟲卵的檢出率。結果報告應報告有無病理成分，如各種細胞、寄生蟲及蟲卵、真菌和原蟲等，細胞以“最低數～最高數/HP”進行報告。病原體培養(yǎng)根據臨床表現，針對懷疑感染病原菌的種類選擇相應的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行糞便微生物學檢查。糞便自動化檢查在儀器用于臨床標本檢測前，實驗室應對其性能進行驗證，包括（但不限于）精密度（適用時）、與手工方法檢查結果的可比性（符合率）、有形成分檢出率等。實驗室應制訂手工復檢的規(guī)則并進行驗證。精液檢驗技術要求標本采集、轉運和貯存要求實驗室應向患者提供精液標本采集說明和符合要求的標本采集容器。標本采集應使用干凈、對精子無毒性、廣口的玻璃或塑料容器，進行微生物培養(yǎng)的標本應保持無菌。標本采集后應記錄采集方法、采集時間、標本完整性及禁欲時間等信息。標本采集后應在室溫條件下立即送檢。標本采集后1h內，評估精液液化狀況和外觀、測量精液體積，制備濕片并進行精子活力和精子存活率檢查，制備精液涂片（用于評估精子形態(tài)），稀釋精液并進行精子計數，進行混合抗球蛋白反應試驗等檢查（需要時），離心處理精液（用于化學檢查）；采集后3h內，進行微生物學檢查；采集后4h內，完成精液涂片固定、染色和精子形態(tài)檢查，進行精液化學檢查。6.1.5對于無法液化的精液標本，可采用機械混勻（如加入適量磷酸鹽緩沖液，使用移液器輕輕反復吹打）或酶消化（如淀粉酶、菠蘿蛋白酶）的方法進行處理。理學檢查精液理學檢查主要包括精液體積、外觀、液化時間和粘稠度等。精液體積測量宜使用稱重法（可假設精液密度為1g/mL），也可通過帶刻度的容器直接讀取。精液標本接收后應立即觀察其是否凝固，然后置于室溫或37℃條件下觀察標本從凝固到完全液化所需時間。粘稠度可通過拉絲試驗進行判斷，如采用玻棒法或滴管法。化學檢查精液化學分析宜包括酸性磷酸酶、鋅、果糖、α-葡糖苷酶、乳酸脫氫酶同工酶X和精子頂體酶測定等。實驗室宜選擇1個檢查項目來評價附屬性腺（前列腺、精囊腺、尿道球腺）和附睪的功能。顯微鏡檢查精液顯微鏡檢查宜包括精子活力、精子存活率、精子計數、精子形態(tài)、生精細胞及其他細胞檢查等。精子活力檢查可使用普通光學顯微鏡觀察染色或未染色的精液標本，宜使用相差顯微鏡檢查新鮮、未染色的標本。先在低倍鏡下觀察黏液絲、精子凝集、非精子細胞（如上皮細胞、白細胞、未成熟精子細胞、斷裂精子頭部或尾部）等成分，在高倍鏡下進行精子活力評估（至少計數200個精子，分別計算前向運動、非前向運動和不活動精子的百分比）。精子存活率檢查可采用伊紅染色、伊紅-苯胺黑染色法或低滲腫脹試驗進行，應在精液標本收到后立即檢查，宜在30min內完成，任何情況下不可超過1h。進行精子計數時，應將精液充入血細胞計數板，根據精子數量選擇合適的計數區(qū)域在10min～15min內計數200個精子，計算每毫升精液中精子數量（精子濃度）和全部標本的精子總數（精子濃度×精液量）。進行精子形態(tài)檢查時，取1滴液化且混勻的精液制備涂片，進行自然干燥、固定（將涂片浸入95%的乙醇中至少15min）和染色（巴氏染色、Shorr染色或Diff-Quik染色），在低倍鏡下觀察涂片，在油鏡下計數200個精子，計算不同形態(tài)類型精子百分比。特殊需要時，將標本染色后在油鏡下觀察精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞、精子細胞及精子的比例，有助于評估生精功能是否存在異常。計算機輔助精液分析（CASA）實驗室使用CASA系統(tǒng)應遵循廠商推薦的要求。實驗室應定期核查儀器檢測結果的重復性和可靠性。CASA系統(tǒng)對檢測精子濃度有一定局限性，在（20~50）×109/L的范圍內檢測結果較為可靠。精子濃度過高時，應將標本進行適當稀釋。精液檢查參考區(qū)間實驗室宜在驗證的基礎上采用世界衛(wèi)生組織最新版關于“人類精液檢查與處理實驗室手冊”提供的精液檢查主要參數（精液體積、精子存活率、精子總數、精子濃度、精子活力、精子前向運動、精子形態(tài)）的參考區(qū)間下限（第5百分位數及其95%可信區(qū)間）。陰道分泌物檢驗技術要求標本采集、轉運和貯存要求實驗室應與臨床共同討論并制訂陰道分泌物標本采集和處理的標準操作程序。標本采集宜使用1個或多個滅菌拭子（頭部包有聚酯棉球）或滅菌圈（棉球對淋病奈瑟菌有影響，木質器材對沙眼衣原體有影響）。應根據檢查目的采集不同部位的標本，如細菌性陰道炎檢查時應采集陰道側壁分泌物，滴蟲性陰道炎檢查時應采集后穹隆分泌物。標本應在室溫條件下盡快送檢。冷藏標本不利于淋病奈瑟菌復蘇和影響陰道毛滴蟲滋養(yǎng)體動力識別，但可用于沙眼衣原體或病毒（如單純皰疹病毒）檢查。化學檢查陰道分泌物化學檢查宜包括過氧化氫、白細胞酯酶、唾液酸苷酶、β-葡萄糖醛酸苷酶、乙酰氨基糖苷酶和凝固酶檢測等。細胞學和病原學檢查應在顯微鏡下對陰道分泌物涂片中的細胞、細菌、真菌和寄生蟲等有形成分進行檢查，可采用生理鹽水直接涂片法，使用涂片染色法（瑞氏染色或革蘭染色）可提高檢出率。宜根據白細胞、上皮細胞、乳酸桿菌和雜菌數量多少進行陰道分泌物涂片清潔度判斷并報告，判斷標準見表2。亦可對菌群密集度、菌群多樣性和優(yōu)勢菌群（正常情況下應為革蘭陽性大桿菌，即乳酸桿菌）進行評估和報告。陰道分泌物涂片清潔度判斷標準清潔度白細胞（個/HP）上皮細胞桿菌球菌I度0～5滿視野多無II度5～151/2視野中少III度15～30少量少多IV度＞30無或少量無大量應注意查找有無陰道毛滴蟲、致病性細菌（如陰道加德納菌、彎曲弧菌、淋病奈瑟菌）和真菌（菌絲、孢子和芽生孢子）等。查見線索細胞是診斷細菌性陰道炎的重要指標，當同時查見菌絲、孢子和芽生孢子時，應考慮真菌性陰道炎；僅孢子陽性時，應結合乙酰氨基糖苷酶試驗和臨床做出診斷。必要時，實驗室宜根據乳酸桿菌、加德納菌/普雷沃菌和動彎桿菌的數量