氟美松對急性肝損傷大鼠肝細胞FasFas配體表達和細胞凋亡的影響周高速張振書王凡林漢軍朱潔【關(guān)鍵詞】氟美松EffetsfdexaethasnenFas/FasligandexpressinandapptsisfhepatytesinratsithLPSinduedauteliverinjury【Abstrat】AI:TinvestigatethehangesfexpressinfhepatytesapptsisandFas/Fasligand(FasL)inlipplysaharide(LPS)induedauteliverinjuryinratsandtheeffetsftreatentbydexaethasneandtevaluatetheptentialrleandehanisinthepathgenesisfauteliverinjury.ETHDS:ExpressinfFas/FasLprtEinandRNAasdetetedusingiunhistheistryandinsituhybridizatin,respetively.ApptsisasdeterinedbyterinalUTPnikendlabelling(TUNEL)inratsduringeveryphasefauteliverinjury.RESULTS:ExpressinfFas/FasLprteinandRNAasupregulatedandrrelatediththeinreasedapptsisinhepatytesfratsithlipplysaharide(LPS)induedauteliverinjury(P0.05).TheadinistratinfdexaethasnesuppressedapptsisasellasexpressinfFas/FasLprteinandRNA(P0.05).NLUSIN:DysregulatinfapptsisandativatinfFas/FasLsysteayplayakeyrleinthepathgenesisfLPSinduedauteliverinjuryinrats,hihrsenstheearlystageauteliverinjury.TheprtetiveeffetsfdexaethasneaybstruttheativatinfFas/FasLsysteandapptsisfhepatytesinratsithLPSinduedauteliverinjuryandthusalleviateliverdaage.【Keyrds】dexaethasne;LPS;liverinjury;Fas/FasL;apptsis【摘要】目的:不雅察內(nèi)毒素急性肝損傷后肝細胞凋亡和Fas/Fas配體〔FasL〕表達的變革，以及氟美松對其影響，探究急性肝損傷早期作用機制.要領(lǐng):接納免疫組化和原位雜交技能檢測各時相點肝細胞Fas/FasL卵白和RNA的表達；應(yīng)用原位末了標識表記標幟技能對各時相點肝細胞凋亡舉行檢測.效果:內(nèi)毒素急性肝損傷各時相點大鼠肝細胞Fas/FasL卵白和RNA的表達較比擬組顯著上調(diào)〔P0.05〕，且與肝細胞凋亡的增長一樣等；氟美松可顯著減輕炎癥反響，按捺脂多糖〔LPS〕誘導(dǎo)的肝細胞凋亡，并使肝細胞Fas/FasL卵白和RNA的表達顯著下調(diào)〔P0.05〕.結(jié)論:肝細胞凋亡和Fas/FasL體系活化大概到場內(nèi)毒素急性肝損傷早期的發(fā)病機制，并且加重早期肝損傷；氟美松可按捺Fas/FasL體系活化，阻斷和調(diào)控凋亡，從而減輕肝構(gòu)造損傷.【關(guān)鍵詞】氟美松；內(nèi)毒素；肝損傷；Fas/Fas配體；凋亡0弁言急性肝損傷常與膿毒癥和熏染相干，內(nèi)毒素急性肝損傷模子是模擬熏染性肝損傷病因的一種模子，臨床上較常見，內(nèi)毒素的重要毒性身分是脂多糖〔lipplysaharide,LPS〕，內(nèi)毒素結(jié)合卵白即脂多糖結(jié)合卵白重要由肝細胞合成并排泄，LPS可通過直接和間接效應(yīng)導(dǎo)致肝臟和滿身臟器的損傷［1-3］.我們通過不雅察氟美松對內(nèi)毒素急性肝損傷大鼠肝細胞Fas/Fas配體〔Fas/Fasligand,FasL〕表達及細胞凋亡的影響，探究其在滿身炎癥反響及急性肝損傷中的作用機制及意義.1質(zhì)料和要領(lǐng)1.2要領(lǐng)肝細胞凋亡原位檢測接納TUNEL法，按B公司試劑盒提供要領(lǐng)稍加革新.免疫組化Fas/FasL檢測接納SP法，兔抗Fas多克隆抗體，兔抗FasL多克隆抗體購自美國SantaruzBitehnlgy公司.Fas/FasLRNA原位雜交檢測：Fas/FasL寡核苷酸探針由中國科學(xué)院上海生物工程研究中心合成，序列如下：Fas5′TGTTTAGGATTTAAGGTTGGAGATT3′,FasL5′TTATAGAAAGAGGA3′，按試劑盒提供要領(lǐng)舉行標識表記標幟，標識表記標幟后探針質(zhì)量及特異性按B公司提供要領(lǐng)舉行檢測，均切合要求.效果斷定尺度：①肝細胞凋亡：陽性細胞為核呈棕黃色顯色，陰性細胞為核無棕黃色顯色，盤算5個高倍視野〔×400〕下的凋亡的細胞數(shù)，凋亡指數(shù)以凋亡細胞/100個細胞表現(xiàn);②Fas/FasL卵白質(zhì)表達斷定：陰性細胞的胞質(zhì)或(和)胞膜均無棕黃色染色，陽性細胞的胞質(zhì)或(和)胞膜棕黃色染色，陽性程度分為4級：0級為低倍鏡視野陽性細胞偶見，1級為陽性細胞小于1/3，2級為陽性細胞為1/3~2/3，3級為陽性細胞大于2/3；③Fas/FasLRNA原位雜交效果斷定；陽性細胞的胞質(zhì)或胞核呈紫藍色染色，陰性細胞無紫藍色染色，分級程度同②.統(tǒng)計學(xué)處置懲罰：凋亡指數(shù)以x±s表現(xiàn)，組內(nèi)各時相點比力用t查驗，同一時相點組間比力用方差闡發(fā)，接納SPSS10.0處置懲罰.2效果2.1肝細胞凋亡Fas/FasL卵白表達免疫組化效果提示，氟美松治療組Fas/FasL卵白質(zhì)表達的顯著削弱(Tab1)，與比擬組表達程度相近.表1急性肝損傷大鼠Fas/FasL卵白的表達(略)2.2肝細胞Fas/FasLRNA的表達原位雜交效果表白，氟美松冶療組6h時相點的Fas/FasLRNA表達程度顯著低于急性肝損傷組6h時相點(Tab2).2.3肝細胞凋亡的檢測與急性肝損傷組比擬，氟美松治療組大鼠肝細胞凋亡顯著淘汰(Tab3).表2急性肝損傷大鼠6hFas/FasLRNA的表達(略)表3急性肝損傷大鼠肝細胞凋亡指數(shù)(略)3討論我們接納尾靜脈注射LPS要領(lǐng)復(fù)制肝損傷，谷氨酰轉(zhuǎn)氨酶呈上升趨勢，病理不雅察肝細胞腫脹，肝構(gòu)造布局紊亂，肝竇擴張、充血或消散，中心靜脈區(qū)充血，部門肝構(gòu)造點狀壞死，說明以LPS5g?kg-1尾靜脈注射可造成肝構(gòu)造急性損傷［2,3］.我們接納電鏡和TUNEL法對急性肝損傷大鼠肝構(gòu)造細胞凋亡舉行檢測，效果創(chuàng)造大鼠注射LPS1h以后即可見肝細胞及竇狀腺內(nèi)皮細胞有凋亡改變，標識表記標幟的陽性細胞呈散在的點狀漫衍或小灶狀漫衍，并隨時間延伸凋亡呈上升趨勢，而比擬組未見上述細胞凋亡改變，提示肝細胞凋亡是肝損傷的早期征象，細胞凋亡存在急性肝損傷病程中，細胞凋亡大概到場急性肝損傷早期竇狀腺內(nèi)皮細胞和肝細胞受損，加重肝構(gòu)造損害，肝細胞凋亡與壞死同時存在大概是導(dǎo)致肝成效減退的重要緣故原由之一［4-6］.邇來研究以為，F(xiàn)as/FasL體系成效失調(diào)是一些疾病的緊張發(fā)病機制之一［7-10］.本組原位雜交效果表現(xiàn)，比擬組FasRNA僅見薄弱表達，而FasLRNA未見表達，注射LPS后FasRNA,FasLRNA表達顯著增長.免疫組化效果創(chuàng)造，F(xiàn)as在內(nèi)毒素急性肝損傷大鼠肝構(gòu)造表達顯著增長，且呈布滿性，F(xiàn)asL抗原表達也有必然程度上調(diào)，兩者均以中心靜脈及炎性浸潤四周的肝細胞顯著，且肝損傷時肝構(gòu)造Fas/FasL表達增長與肝細胞凋亡的增長一樣等.以上效果提示細胞凋亡及相干基因表達非常大概到場內(nèi)毒素急性肝損傷的發(fā)病機制.邇來研究表白，糖皮質(zhì)激素對LPS誘導(dǎo)大鼠急性肝損作有顯著防護作用，與按捺腫瘤壞死因子、白細胞介素1β及白細胞介素8等炎性細胞因子表達有關(guān).研究效果表白，氟美松可按捺肝臟炎癥反響及肝細胞、內(nèi)皮細胞凋亡［11-13］.證明了糖皮質(zhì)激素可調(diào)控肝構(gòu)造細胞凋亡.本效果表現(xiàn)，大鼠在賜與LPS同時予以氟美松可顯著按捺肝臟炎癥反響.氟美松在病程早期〔8h〕可顯著按捺LPS誘導(dǎo)的肝細胞凋亡，并顯著下調(diào)Fas/FasLRNA及卵白質(zhì)的表達，氟美松按捺急性肝損傷早期肝細胞凋亡，庇護肝構(gòu)造的機制大概與以下因素有關(guān)：①按捺炎性介質(zhì)的開釋，減輕肝構(gòu)造損傷；②按捺肝細胞凋亡及Fas/FasL體系的活化.本效果表白，氟美松治療組大鼠肝構(gòu)造Fas/FasL表達較內(nèi)毒素急性肝損傷組明顯低落，靠近完全按捺，而肝構(gòu)造損傷和靶細胞凋亡也顯著減輕，說明氟美松可通過按捺Fas/FasL體系活化而阻斷和調(diào)控肝構(gòu)造靶細胞凋亡.【參考文獻】［1］urhisaG,KbagashiY,KaasakiT,NakauraS,NakauraH.Invlveentfplateletativatingfatrinhepatiapptsisandnersisinhrniethanlfedratsgivenendtxin［J］.Liver,2002;22(5):394-403.［2］JaeshkeH,GresGJ,ederbauAI,HinsnJA,PessayreD,LeastersJJ.ehanissfhepattxiity［J］.TxilSi,2002;65(2):166-176.［3］JirillE,aavD,agrneT,PiigallE,AatilL,LebA,Kalis,GuenshEier.TherleftheliverintherespnsetLPS:Experientalandlinialfindings［J］.JEndtxinRes,2002;8(5):319-327.［4］illisS,KlassenL,TuaDJ,ThieleG.alndialdehydeaetaldehydehaptenatedprteinindueselldeathbyindutinfnersisandapptsisiniuneell［J］.IntIunpharal,2002;2(4):519-535.［5］BantelH,Shulzesthffk.Apptsisinhepatitisvirusinfetin［J］.ellDeathDiffer,2022;(Suppl1):s48-s58.［6］PapakyriaknP,Tzardi,ValatasV,KanavarsP,KarydiE,NtasG,Xidakis,KurualisE.Apptsisandapptsisrelatedprteinsinhrniviralliverdisease［J］.Apptsis,2002;7(2):133-141.［7］DughtyL,larkRS,KaplanSS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