劉瀟第九章細菌的生長(shēngzhǎng)繁殖與培養(yǎng)病原(bìngyuán)生物與免疫學高職高專護理(hùlǐ)第一頁，共四十六頁。2022/11/13學習(xuéxí)目標掌握(zhǎngwò)細菌生長繁殖的條件、繁殖方式及速度；熟悉細菌在培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象及意義；熟悉細菌的代謝產(chǎn)物及意義。第二頁，共四十六頁。細菌(xìjūn)是一大類具有獨立生命活動的單細胞微生物，能從外界環(huán)境中攝取營養(yǎng)物質，合成自身細胞成分并獲得能量，同時不斷排出廢物，完成新陳代謝，得以生長繁殖。細菌的生長繁殖與環(huán)境條件密切相關，條件適宜時，細菌的生長繁殖及代謝旺盛，改變條件時可使細菌生命活動受到抑制或使細菌死亡。前言(qiányán)第三頁，共四十六頁。占細胞(xìbāo)總重量80%蛋白質、糖類(tánɡlèi)、脂類、無機鹽等；15-20%肽聚糖、胞壁酸、磷壁酸、D型氨基酸、脂多糖二氨基(ānjī)庚二酸、吡啶二羧酸、2-酮基-3-脫氧辛酸水：固體成分：特有成分：第一節(jié)細菌的生長繁殖一、細菌的化學組成第四頁，共四十六頁。（一）營養(yǎng)物質水:參與營養(yǎng)的吸收與代謝。碳源:

co2、碳酸鹽、糖、脂肪氮源:

有機氮、無機氮、游離氮無機鹽:

K、Ca、Na、Mg、S、P、Fe等生長因子(growthfactor)：

某些細菌(xìjūn)生長所必需而又不能自身合成，必須由外界提供的有機化合物。種類：B族維生素——硫胺素、核黃素、生物素、泛酸某些必須氨基酸、嘌呤、嘧啶、膽堿Ⅴ因子、Ⅹ因子二、細菌生長繁殖(fánzhí)的條件第五頁，共四十六頁。（二）酸堿度（三）溫度(wēndù)

大多數(shù)病原菌：37℃（四）氣體

①O2：專性需氧菌：有氧條件，如結核分枝桿菌專性厭氧菌：無氧條件，如破傷風梭菌

兼性厭氧菌：有氧或無氧，多數(shù)致病菌屬于此類

二、細菌生長繁殖(fánzhí)的條件大多數(shù)病原菌：pH7.2～pH7.6霍亂弧菌:

pH8.4～pH9.2結核(jiéhé)分枝桿菌:

pH6.5～pH6.8

第六頁，共四十六頁。（一）細菌個體(gètǐ)的生長繁殖方式：無性(wúxìnɡ)二分裂速度：20～30分鐘/代

三、細菌生長(shēngzhǎng)繁殖的規(guī)律第七頁，共四十六頁。（二）細菌群體(qúntǐ)的生長繁殖細菌生長(shēngzhǎng)曲線小時(xiǎoshí)細菌數(shù)目的對數(shù)第八頁，共四十六頁。遲緩期(lagphase)

最初培養(yǎng)1-4小時，菌體不分裂，但菌體增大、代謝活躍

對數(shù)期(logarithmicphase)

一般持續(xù)6-8小時?；罹鷶?shù)目呈對數(shù)直線上升。

細菌(xìjūn)形態(tài)、染色、生理活性典型，對外界環(huán)境敏感

穩(wěn)定期(stationaryphase)

細菌繁殖數(shù)與死亡數(shù)接近。

細菌形態(tài)、染色、生理活性改變，產(chǎn)生外毒素、抗生素、芽孢

衰退期(declinephase)

死亡數(shù)超過活菌數(shù)。細菌變長、腫脹、畸形、自溶細菌生長(shēngzhǎng)曲線特點第九頁，共四十六頁。四、細菌的代謝(dàixiè)產(chǎn)物及意義（一）根據(jù)細菌具有不同的酶，對糖、蛋白質分解能力及分解后產(chǎn)生的產(chǎn)物不同用生化方法(fāngfǎ)來鑒定細菌稱：細菌的生化(shēnɡhuà)反應第十頁，共四十六頁。甲基紅試驗(shìyàn)（methylredtest，MR）機理(jīlǐ)：大腸桿菌(dàchánɡɡǎnjūn)產(chǎn)氣桿菌葡萄糖乳糖PH＜4.5PH＞5.4甲基紅指示劑呈紅色甲基紅指示劑呈桔黃色甲基紅試驗陽性甲基紅試驗陰性丙酮酸中性產(chǎn)物脫羧丙酮酸第十一頁，共四十六頁。

利用分解代謝的產(chǎn)物和能量，合成(héchéng)新的物質合成(héchéng)產(chǎn)物毒素和侵襲性酶熱原質(yuánzhì)色素抗生素細菌素維生素

（二）合成代謝產(chǎn)物及醫(yī)學意義（重點）第十二頁，共四十六頁。毒素和侵襲(qīnxí)性酶主要的致病物質，包括外毒素、內毒素、侵襲性酶熱原質

細菌合成的，使機體發(fā)熱的物質耐高溫，需蒸餾、吸附才可去除（二）合成代謝產(chǎn)物及醫(yī)學(yīxué)意義（重點）色素兩種：脂溶性、水溶性鑒定細菌(xìjūn)，如金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌第十三頁，共四十六頁?？股啬承┘毦?、真菌、放線菌產(chǎn)生的能抑制和殺滅其它他微生物和腫瘤細胞的物質(wùzhì)。如青霉素、鏈霉素等。功能：抗菌譜廣，廣泛用于治療細菌感染性疾病和腫瘤。維生素

營養(yǎng)機體，可供人體吸收利用。如大腸埃希菌合成的維生素B，K，供人體吸收利用。（二）合成代謝(dàixiè)產(chǎn)物及醫(yī)學意義（重點）第十四頁，共四十六頁。第二節(jié)細菌的人工(réngōng)培養(yǎng)一、培養(yǎng)基(culturemedium)人工(réngōng)配制適合于細菌生長繁殖的營養(yǎng)基質“滅菌(mièjūn)”第十五頁，共四十六頁。按照物理狀態(tài)(zhuàngtài)分類：液體(yètǐ)培養(yǎng)基固體(gùtǐ)培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基2-3%瓊脂0.3-0.5%瓊脂第十六頁，共四十六頁。二、細菌(xìjūn)在培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象（一）細菌在液體培養(yǎng)基中的生長(shēngzhǎng)現(xiàn)象（重點）沉淀(chéndiàn)生長混濁生長菌膜生長（大多數(shù)）（鏈狀菌）（專性需氧菌）第十七頁，共四十六頁。（二）細菌在固體(gùtǐ)培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象菌落(colony)：細菌在固體培養(yǎng)基上出現(xiàn)(chūxiàn)由單個細菌生長繁殖形成的肉眼可見的細菌集團意義：鑒別細菌、分離細菌菌苔(mossy)：多個菌落融合形成的細菌集團第十八頁，共四十六頁。三、人工培養(yǎng)(péiyǎng)細菌的實際意義1.感染性疾病(jíbìng)的診斷和防治標本(biāoběn)增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)純培養(yǎng)生化鑒定顯微鏡觀察染色初步診斷確定診斷診斷第十九頁，共四十六頁。標本(biāoběn)青慶紅鏈紅青鏈慶密聚劃線(huáxiàn)接種培養(yǎng)(péiyǎng)藥浸紙片最敏感藥物治療第二十頁，共四十六頁。2.細菌(xìjūn)的鑒定與研究例如(lìrú)：嗜肺軍團菌3.生物制品(shēnɡwùzhìpǐn)的制備結核桿菌（有毒）培養(yǎng)基（膽汁、甘油、馬鈴薯）卡介苗（BCG）接種13年230代第二十一頁，共四十六頁。第十章細菌的分布(fēnbù)與消毒滅菌劉瀟病原(bìngyuán)生物與免疫學高職高專護理(hùlǐ)第二十二頁，共四十六頁。學習(xuéxí)目標掌握正常菌群、條件(tiáojiàn)致病菌及菌群失調、消毒、滅菌、無菌操作的概念；掌握常見的消毒、滅菌、無菌操作的方法；了解細菌的分布及防護原則。第二十三頁，共四十六頁。

針頭(zhēntóu)上的細菌模式圖抹布和砧板(zhēnbǎn)上的細菌模式圖細菌種類多，繁殖快，適應環(huán)境的能力強，是自然界中分布最廣泛的一群微小生物。了解細菌的分布對醫(yī)學生加強無菌觀念(guānniàn)，嚴格無菌操作，預防醫(yī)院感染等具有重要意義。

前言第二十四頁，共四十六頁。一、細菌(xìjūn)在自然界中的分布1.土壤(tǔrǎng)中的細菌土壤是細菌生存的天然場所（因為土壤中有水分、營養(yǎng)物質、空氣(kōngqì)、一定的PH環(huán)境和溫度）。自然界中，以土壤的含菌量（種類）最多，土壤素有“天然培養(yǎng)基”之稱。土壤中的細菌多數(shù)為非病原菌，它們在自然界的物質循環(huán)中起著重要的作用，是動植物與人類生存的必要條件之一。第一節(jié)細菌的分布第二十五頁，共四十六頁。使人致病的主要為球菌和芽胞桿菌，如炭疽桿菌、破傷風桿菌、氣性(qìxing)壞疽可長期存活。所以，當人體創(chuàng)傷處污染泥土時，要嚴防破傷風和氣性壞疽感染。土壤(tǔrǎng)中的病原菌從哪里來？土壤中僅有少數(shù)病原菌，它們(tāmen)來自人和動物體（糞、尿、痰、尸體等），多數(shù)病菌在土壤中很能容易死亡。第二十六頁，共四十六頁。2.水中的細菌(xìjūn)土壤、空氣、動植物尸體、人和動物的排瀉物、工業(yè)及生活污水。通過水體傳播(chuánbō)的病原微生物主要有沙門氏菌屬、志賀氏菌屬、霍亂弧菌等?？梢鹣到y(tǒng)傳染病，甚至爆發(fā)流行。因此，做好水的衛(wèi)生學檢查對預防疾病至關重要。一、細菌(xìjūn)在自然界中的分布第二十七頁，共四十六頁。3.空氣(kōngqì)中的細菌空氣中缺乏營養(yǎng)物質與水分，且受日光照射，細菌不易繁殖。但由于人群和各種動物的呼吸道及口腔中的細菌可隨唾液、飛沫散布到空氣中，極易造成疾病的傳播。細菌可隨塵埃漂浮在空氣中，尤其在人口密集的公共場所或醫(yī)院(yīyuàn)，空氣中細菌種類和數(shù)量顯著增多。一、細菌(xìjūn)在自然界中的分布第二十八頁，共四十六頁。常見的病原菌如金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、鏈球菌、結核分枝桿菌、白喉棒狀桿菌及腦膜炎奈瑟菌等，可引起傷口或呼吸道感染?？諝庵械姆侵虏【?，?？稍斐缮镏破贰⑺幬镏苿┘芭囵B(yǎng)基的污染。因此，醫(yī)院(yīyuàn)的手術室、病房、制劑室、實驗室等要經(jīng)常進行空氣消毒，并嚴格按照有關制度和無菌技術進行醫(yī)療操作，以防止疾病的傳播及醫(yī)院感染。你知道(zhīdào)嗎？第二十九頁，共四十六頁。正常人體的體表以及與外界相通的腔道（如口腔、鼻咽腔、腸道、泌尿生殖道等黏膜）表面存在著一定數(shù)量和不同種類的細菌，這些通常對人體無害甚至(shènzhì)有益的細菌，稱為正常菌群（normalflora）。二、人體(réntǐ)正常菌群及分布（一）正常(zhèngcháng)菌群第三十頁，共四十六頁。生物拮抗作用：即對病原菌的拮抗作用，如大腸菌素可抑制痢疾桿菌生長；唾液鏈球菌產(chǎn)生的H2O2抑制腦膜炎球菌生長。

營養(yǎng)作用：大腸桿菌及乳鏈球菌能合成VitB1、B12、泛酸、葉酸及VitC、K等，供機體(jītǐ)利用；雙岐桿菌產(chǎn)酸造成酸性環(huán)境可促進對VitD、Ca、Fe的吸收。免疫作用：微生物具有免疫原性、促分裂和佐劑的作用，可剌激機體免疫系統(tǒng)發(fā)育和成熟。正常菌群的生理(shēnglǐ)意義第三十一頁，共四十六頁。正常菌群與人體間的平衡狀態(tài)，在某種特定條件下被打破(dǎpò)，使原來不致病的正常菌群也能引起疾病，這些能引起疾病的微生物稱為條件致病菌或機會致病菌。

（二）條件(tiáojiàn)致病菌二、人體(réntǐ)正常菌群及分布第三十二頁，共四十六頁。①機體免疫機能低下：如大面積燒傷，過度疲勞，受涼，長期(chángqī)患消耗性疾病。②正常菌群寄居部位發(fā)生變遷：如外傷，手術，留置導尿管等使大腸桿菌進入腹腔、泌尿道或血液等。③不適當?shù)目咕厮幬镏委煂е戮菏д{：如長期或濫用抗菌素治療。條件(tiáojiàn)致病菌致病的特定條件(tiáojiàn)

第三十三頁，共四十六頁。菌群失調：指機體、菌群、環(huán)境三者之間的動態(tài)平衡發(fā)生改變，導至體內正常菌群中各種細菌的數(shù)量和比例發(fā)生大幅度的變化，生態(tài)體系表現(xiàn)出的不平衡狀態(tài)(zhuàngtài)。菌群失調癥：指嚴重的菌群失調使機體發(fā)生功能紊亂表現(xiàn)出明顯臨床癥狀者。菌群失調癥又叫菌群交替癥（二次感染）。菌群失調經(jīng)常發(fā)生而菌群失調癥則少見。患二重感染的機體抵抗力很弱，細菌對抗菌素藥物不敏感，治療難度大，應嚴加預防，避免發(fā)生。菌群失調及菌群失調癥第三十四頁，共四十六頁。

消毒（disinfection）：殺死物體上病原微生物的方法，但不一定殺死細菌芽胞。滅菌（sterilization）：殺死物體上包括芽胞在內的所有病原性和非病原性微生物的方法。防腐（antisepsis）：防止或抑制細菌生長繁殖(fánzhí)的方法，細菌一般不死亡。

無菌（asepsis）：不含活菌的意思。防止微生物進入機體或物體的操作方法，稱為無菌操作或無菌技術。進行微生物實驗、外科手術及醫(yī)療技術操作等過程，均需進行嚴格的無菌操作。

第二節(jié)消毒(xiāodú)滅菌第三十五頁，共四十六頁。

熱力滅菌法分干熱滅菌和濕熱滅菌兩大類。在同一溫度下，后者效力比前者為大，這是因為：（1）濕熱的穿透力比干熱大；

（2）濕熱中細菌菌體蛋白較易凝固；（3）濕熱的蒸汽有潛熱存在。水由氣態(tài)(qìtài)變?yōu)橐簯B(tài)時釋放出的潛熱，可迅速提高被滅菌物體的溫度。一、物理消毒滅菌(mièjūn)法（重點）（一）熱力(rèlì)滅菌法第三十六頁，共四十六頁。1、濕熱(shīrè)滅菌法高壓蒸氣滅菌法：一種最常用、最有效的滅菌方法(fāngfǎ)。利用密閉的容器加熱產(chǎn)生的蒸汽滅菌，通常103.4kPa（1.05kg/cm2）的蒸汽壓力下，容器內溫度可達121.3℃，維持15～30分鐘，即可達到滅菌的目的。凡耐高溫、耐潮濕的物品，如手術器械、敷料和一般培養(yǎng)基等，均可用此法滅菌。煮沸法：水溫100℃經(jīng)5分鐘可殺死細菌繁殖體，常用于食具、刀剪、注射器等的消毒，細菌芽胞需煮沸1～2小時才被殺滅。水中加入2%碳酸氫鈉，可使沸點達105℃，既可促進殺滅芽胞，又能防止金屬器械生銹。（一）熱力(rèlì)滅菌法第三十七頁，共四十六頁。第三十八頁，共四十六頁。流通蒸氣法：利用蒸籠或阿諾蒸鍋進行消毒。流通蒸汽法溫度不超過100℃，經(jīng)15～30分鐘可殺死細菌繁殖體；把流通蒸汽加熱的物品放置(fàngzhì)37℃溫箱過夜，促使芽胞發(fā)育成繁殖體，次日再經(jīng)流通蒸汽加熱，如此重復3次，可達到滅菌的目的，稱為間歇滅菌法，常用于不耐高溫的材料如培養(yǎng)基的滅菌。巴氏消毒法：用較低溫度殺滅液體中病原菌或特定微生物，而不影響其營養(yǎng)成分及香味的消毒法，常用于牛奶、酒類的消毒。1、濕熱(shīrè)滅菌法（一）熱力(rèlì)滅菌法第三十九頁，共四十六頁。焚燒：直接點燃或在焚燒爐內焚燒，是一種徹底的滅菌方法，但僅適用于廢棄物品或尸體等。燒灼：直接用火焰滅菌，適用于微生物學實驗室的接種環(huán)、試管口、瓶口等的滅菌（圖3-2）。干烤：用烤箱滅菌。一般加熱至160℃～170℃經(jīng)2小時。適用于高溫下不變質、不蒸發(fā)(zhēngfā)的物品，如玻璃器皿、瓷器等。2、干熱(ɡànrè)滅菌法（一）熱力(rèlì)滅菌法第四十頁，共四十六頁。紫外線：紫外線的殺菌作用與其波長有關，通常紫外線波長為240～280nm時具有殺菌作用，其中(qízhōng)以260nm最強，這與細菌DNA吸收光譜范圍相一致。紫外線殺菌機理主要是作用于細菌DNA，干擾細菌DNA的復制與轉錄，導致細菌的死亡或變異。紫外線穿透力差，故只適用于空氣及不耐熱物品的表面消毒。電離輻射：高速電子、X射線和γ射線等在足夠劑量時，對各種細菌均有致死作用。其機制在于產(chǎn)生游離基，破壞細菌DNA。電離輻射常用于大量一次性醫(yī)用塑料制品的消毒。（二）紫外線與射線(shèxiàn)滅菌法第四十一頁，共四十六頁。濾過除菌：用物理阻留的方法(fāngfǎ)將液體或空氣中的細菌除去，以達到無菌的目的。所用的器具是濾菌器。主要用于一些不耐高溫滅菌的血清、細菌毒素、抗生素，以及空氣等的除菌。濾菌器的種類很多，目前常用的有濾膜濾菌器、石棉濾菌器（亦稱Seitz濾菌器）、玻璃濾菌器等。（三）濾過(lǜɡuò)除菌第四十二頁，共四十六頁?；瘜W消毒劑對細菌和人體細胞都有毒性作用，主要用于人體體表、醫(yī)療器械和周圍環(huán)境的消毒。常用消毒劑的作用機制：1.使菌體蛋白質變性(biànx