MTTMTT實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法，由于細(xì)胞與細(xì)胞數(shù)呈正相關(guān)，因此也常常用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況。MTT全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)。是一種黃顏色的。MTT比色法，是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活實(shí)驗(yàn)步驟普通MTT法實(shí)驗(yàn)步驟：到96孔板，每孔體積200μl。3-5MTT溶液（5mg/mlPBS配制，pH=7.4)10μl.4h，孔加100μlDMSO，振蕩10min，使結(jié)晶物充分融解。藥物MTT法實(shí)驗(yàn)步驟貼壁細(xì)胞：100002、5%CO2，37℃孵育，至細(xì)胞單層鋪滿孔底（96孔平底板）,加入濃度梯度的藥物,上午）加藥.5-7個(gè)梯度,100μl,3-5個(gè)復(fù)孔.5個(gè)，否則難以反應(yīng)真實(shí)情況MTT聯(lián)免疫檢測(cè)儀OD490nm處測(cè)量各孔的吸光值。懸浮細(xì)胞：培養(yǎng)基30μl；②加ActinomycinD（性）10μl用培養(yǎng)液稀釋(液100mg/ml，需預(yù)μl加入到96孔板（邊緣孔用無(wú)菌水填充。每板設(shè)對(duì)照（加100μl1640）%MTT10minOD570nm（630nm校準(zhǔn)）測(cè)量各溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜3復(fù)孔。注意事項(xiàng)：選擇適當(dāng)?shù)眉?xì)胞接種濃度和培養(yǎng)時(shí)間MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)呈的線性關(guān)系。否則細(xì)胞數(shù)太多敏感性降低，太適用的。對(duì)于體積大，增殖快的細(xì)胞，比如腫瘤細(xì)胞，在96孔板中不能接種太多數(shù)目的設(shè)置調(diào)零孔設(shè)置空白孔100μl、10μlMTT、100μl吸光度范圍MTT實(shí)驗(yàn)吸光度最后要在0-0.7之間，超出這個(gè)范圍就不是直線關(guān)系。水分保持9632PBS填充,32孔中水分蒸發(fā)很快，藥物易被濃縮，對(duì)實(shí)驗(yàn)影響大。同時(shí)加入PBS液填充后，可以一定程度上保持中間孔的水分。如果96孔板中加入了具有氧化還原性的藥物，比如谷胱甘肽、VitE、VitC，那建議你用PBS將細(xì)胞洗洗，否則這些藥物會(huì)將MTT還原成棕褐色沉淀，這種效果可能是你不需要的。吸收值分析培養(yǎng)過(guò)程中換液100μl104～550h以上，如果營(yíng)48h應(yīng)該換液一次。避免干 判斷污染MTTMTT前可以加DMSO前要把液體吸分鐘，然后吸掉上清(如果是懸浮細(xì)胞，則此法,懸浮細(xì)胞要離心2500rpm×10min.且其做MTT最好用圓