.1重組DNA技術(shù)的基本工具基因工程：是指按照人們的愿望，通過轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。（又叫重組DNA技術(shù)）一.重組DNA技術(shù)的基本工具1.“分子手術(shù)刀”—限制性內(nèi)切核酸酶（限制酶）來源：原核生物等作用：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。多數(shù)限制酶識(shí)別和切割的部位具有回文序列為6個(gè)核苷酸.少數(shù)識(shí)別的序列為4.5或8個(gè)核苷酸。結(jié)果：切割產(chǎn)生的DNA片段的兩種形式黏性末端圖三 平末端p712.“分子縫合針”—DNA連接酶種類：E.coliDNA連接酶（從大腸桿菌中獲得）：只能連接互補(bǔ)的黏性末端 T4DNA連接酶（從T4噬菌體獲得）：縫合互補(bǔ)的黏性末端和平末端（效率低）作用：都是將雙鏈DNA片段“縫合”起來，恢復(fù)被限制酶切開了的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵.即連接雙鏈DNA的缺口，而不能連接單鏈DNA。DNA聚合酶：是以一條DNA鏈為模板，將單個(gè)核苷酸通過磷酸二酯鍵形成一條于模板鏈互補(bǔ)的DNA鏈。（DNA連接酶不需要模板）DNA解旋酶：使互補(bǔ)雙鏈DNA之間的堿基對的氫鍵斷裂。DNA酶：是DNA水解酶，使DNA分子水解成脫氧核苷酸。3.“分子運(yùn)輸車”—基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體作為載體必須的四個(gè)條件a.能夠自我復(fù)制——將外源基因一同復(fù)制b.具有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)——供外源DNA片段插入c.具有特殊的標(biāo)記基因——供重組DNA的鑒定和選擇d.能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存（友好借居）即無毒害P6-圖五種類質(zhì)粒：一種裸露的結(jié)構(gòu)簡單.獨(dú)立于細(xì)菌擬核DNA之外，能夠自我復(fù)制的很小的雙鏈環(huán)狀DNA分子。噬菌體動(dòng)植物病毒注：一般來說，天然載體往往不能滿足人類的所有需求。因此，根據(jù)不同的目的和需求，對天然的載體進(jìn)行人工改造。探究實(shí)踐：DNA的粗提取與鑒定原理：a.DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精——可初步分離DNA與蛋白質(zhì) b.DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/L的NaCl溶液c.在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色——鑒定DNA目的要求：1.了解DNA的物理和化學(xué)性質(zhì)，理解DNA粗提取和鑒定的原理。2.學(xué)會(huì)DNA粗提取的方法以及用二苯胺試劑對DNA進(jìn)行鑒定。材料用具：材料：新鮮的洋蔥.研磨液.體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精.2mol/LNaCl溶液.二苯胺試劑和蒸餾水。方法步驟：研磨細(xì)胞稱取30g洋蔥.切碎研缽+10ml研磨液過濾濾液4℃冰箱幾分鐘取上清液（也可離心）析出DNA絲狀物上清液中加入體積相等的.預(yù)冷的酒精溶液（95%）靜止2-3min白色絲狀物就是粗提取的DNA用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌2mol/LNaCl溶液卷起絲狀物濾紙吸去上面的水分（或離心.棄上清液，留沉淀物晾干）2mol/LNaCl溶液鑒定DNA21）2115ml5ml將絲狀物溶于2號試管的NaCl中各加4ml二苯胺試劑混勻沸水加熱5min，冷卻后比較顏色變化（1號試管不變色，2號試管變藍(lán)色）簡答1.推測限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么？限制酶是原核生物中的一種防御工具，用來切割侵入細(xì)胞的外源DNA，以保證自身的安全。2.為什么限制酶不切割細(xì)菌本身的DNA分子？a.細(xì)胞自身的DNA分子沒有該限制酶的識(shí)別序列b.甲基化酶對細(xì)胞自身DNA分子進(jìn)行了修飾，使限制酶不能將其切開。拓展分析1.基因工程操作導(dǎo)致的基因重組與有性生殖中的基因重組的主要區(qū)別是什么？（1）有性生殖中的基因重組是隨機(jī)的，并且只能在同一物種間進(jìn)行。（2）基因工程可以在不同物種間進(jìn)行重組，并且方向性強(qiáng)，可以定向地改變生物的性狀。2.不同生物的DNA分子能拼接起來的原因是什么？（1）DNA分子的基本組成單位都是四種脫氧核苷酸。（2）雙鏈DNA分子的空間結(jié)構(gòu)都是規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)。（3）所以生物的DNA堿基對均遵循嚴(yán)格的“堿基互