第五章中藥制劑中各類化學(xué)成分分析第一節(jié)生物堿類成分分析alkaloids生物堿

*含氮有機(jī)化合物，堿性一、概述含生物堿制劑常選生物堿為檢測(cè)指標(biāo)*絕大部分存在于植物中，少部分存在動(dòng)物體內(nèi)*有些具有強(qiáng)烈的生理活性，不少還有毒性，臨床使用須十分慎重，對(duì)其質(zhì)量應(yīng)嚴(yán)格控制小檗堿（季銨堿）硫酸阿托品脂環(huán)胺pKb=4.35麻黃堿脂烴胺pKb=4.42pKb2=9.7pKb1=5.07奎寧喹啉類脂環(huán)胺pKb2=9.7pKb1=5.07嗎啡（兩性）鹽酸脂環(huán)胺pKb=6.13pKa=9.85利血平pKb1=7.93嘌呤類茶堿咖啡因（弱酸性）pKb=14.15（二）理化性質(zhì)1.物理性質(zhì)

（1）顏色多數(shù)無色如

利血平雖無色，但有熒光小檗堿藥根堿共軛體系長(zhǎng)、有助色團(tuán)的可呈色（2）形態(tài)多數(shù)為結(jié)晶型固體有些小分子的呈液態(tài)（菸堿、檳榔堿）麻黃堿具有揮發(fā)性咖啡因具有升華性2.溶解性難溶于水易溶于有機(jī)溶劑易溶于水難溶于有機(jī)溶劑季銨型生物堿易溶于水

液體生物堿或小分子生物堿既溶于水也溶于有機(jī)溶劑

含有酸性基團(tuán)或酯鍵的生物堿可溶于堿

沉淀劑沉淀顏色HgI2·2KIBiI3·KII2-KIH3PO4·12MoO3苦味酸白↓黃↓橙↓褐-暗褐↓藍(lán)↓（NH3·H2O）黃白黃↓4.顯色反應(yīng)常用顯色劑硫酸、硝酸、甲醛-硫酸、釩硫酸、鉬硫酸、氯酸鉀、三氯化鐵、香草醛、對(duì)二甲氨基苯甲醛分子結(jié)構(gòu)與堿性強(qiáng)弱的關(guān)系（1）氮原子上電子雜化方式的影響＞＞四氫異喹啉pKb4.5＞異喹啉pKb8.6腈＞誘導(dǎo)效應(yīng)

烷基、甲基、胺基供（斥）電子基團(tuán)堿性↑甲胺pKb3.4＞氨pKb4.25伯胺叔胺酰胺仲胺仲胺＞伯胺＞叔胺＞酰胺

吸電子基團(tuán)堿性↓

苯基、羰基、酯基、醚基、羥基、雙鍵、烷氧基、亞硝基、鹵素＞去甲麻黃堿pKb5.0苯異丙胺pKb4.2共軛效應(yīng)氮上未共用電子對(duì)*與供電子基團(tuán)共軛堿性↑胍pKb0.4＞＞*與苯環(huán)共軛堿性↓（3）立體結(jié)構(gòu)與堿性的關(guān)系空間障礙少，易接受質(zhì)子，堿性↑空間障礙多，難接受質(zhì)子，堿性↓利血平pKb1=7.936.紫外光譜特征*與結(jié)構(gòu)有關(guān)*與取代基有關(guān)*與溶劑的種類和pH有關(guān)7.旋光性多數(shù)具有旋光性

多數(shù)為左旋，一般左旋體的活性比右旋體強(qiáng)（l）鹽酸麻黃堿、硫酸奎寧、氫溴酸山莨菪堿（d）鹽酸偽麻黃堿、硫酸奎尼?。╠l）硫酸阿托品三、定性鑒別（一）理化鑒別制劑中某些干擾成分也可有假陽(yáng)性反應(yīng)蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)H+麻黃堿不與生物堿沉淀劑反應(yīng)→↓例馬錢子散ChP【鑒別】取本品1g，加濃氨試液數(shù)滴及氯仿10mL，浸泡數(shù)小時(shí)，濾過，取濾液1mL蒸干，殘?jiān)酉←}酸1mL使溶解，加碘化鉍鉀試液1~2滴，即生成黃棕色沉淀。（士的寧、馬錢子堿）馬錢子、地龍例罌粟堿ChP【鑒別】（2）取本品約10mg，加水10mL溶解后，加稀鹽酸3滴與鐵氰化鉀試液5滴，即生成淺黃色沉淀。例

千柏鼻炎片ChP【鑒別】（1）取本品15片，除去糖衣，研細(xì)，加酸性乙醇30mL，置水浴上加熱約20分鐘，濾過，取濾液20mL，，置水浴上揮去乙醇后，加稀鹽酸1mL，加水10mL，攪拌，濾過，取濾液各1mL，分別加入碘化汞鉀試液、碘化鉍鉀試液和硅鎢酸試液1~2滴，均生成沉淀。（麻黃）千里光、卷柏、決明子、麻黃、羌活、川芎、白芷例十全大補(bǔ)丸ChP【鑒別】（2）取本品，剪碎，加1%硫酸乙醇溶液50mL，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液加氨試液調(diào)節(jié)pH值至中性，蒸干，殘?jiān)恿蛩崛芤海?→50）10mL使溶解，濾過，濾液置分液漏斗中，加氨試液調(diào)節(jié)pH值約至10，加氯仿10mL振搖提取，分取氯仿層，蒸干，殘?jiān)恿蛩崛芤海?→50）10mL使溶解，濾過，取濾液加碘化鉍鉀試液，生成紅棕色沉淀；另取濾液，加碘化汞鉀試液，生成黃白色沉淀。（川芎嗪）例二鹽酸奎寧ChP【鑒別】（1）取本品約20mg，加水20mL溶解后，分取溶液10mL，滴加稀硫酸，即顯藍(lán)色熒光。例嗎啡的鑒別（Marquis反應(yīng)）紫堇色例鹽酸嗎啡ChP【鑒別】（1）取本品約1mg，加甲醛硫酸試液1滴，即顯紫堇色。例罌粟堿ChP【鑒別】（3）取本品5mg，加甲醛硫酸試液1mL，溶液應(yīng)無色或顯淡黃色，漸漸變成深玫瑰紅色，最后變成紫色。例阿片ChP【鑒別】（2）取本品約0.1g，加氯仿5mL與氨試液數(shù)滴，振搖10分鐘，分取氯仿液，置表面皿中，在水浴上蒸干，殘留物為灰白色結(jié)晶，加甲醛硫酸試液2滴，即顯深紅色。例附錄Ⅳ一般鑒別試驗(yàn)ChP托烷生物堿類取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色殘?jiān)?，放冷，加乙?～3滴濕潤(rùn)，加固體氫氧化鉀一小粒，即顯深紫色。例托烷生物堿類的鑒別（Vitaili反應(yīng)）硝基化醇制深紫色黃色例紅藥貼膏ChP【鑒別】（2）取本品約2g，加乙醚20mL、水10mL，振搖20分鐘，放置，分取乙醚層，濾過，……。另取乙醚液約10mL，置水浴上蒸干，殘?jiān)勇确?0mL后，加濃氨試液10mL，振搖10分鐘，分取氯仿液，置水浴上蒸干，殘?jiān)右掖贾茪溲趸浽囈?～2滴，顯紅色。（顛茄）三七、白芷、土鱉蟲、川芎、當(dāng)歸、紅花、冰片、樟腦、水楊酸甲酯、薄荷腦、顛茄流浸膏、硫酸軟骨素OH-藍(lán)紫色藍(lán)色水層醚層紫紅例鹽酸麻黃堿ChP【鑒別】（1）雙縮脲反應(yīng)例鹽酸麻黃堿ChP【鑒別】（1）取本品約10mg，加水1mL溶解后，加硫酸銅試液2滴與20%氫氧化鈉溶液1mL，即顯藍(lán)紫色；加乙醚1mL，振搖后，放置，乙醚層即顯紫紅色，水層變成藍(lán)色。

TLC法是ChP中藥制劑常用的鑒別方法，大多用硅膠為吸附劑1.TLC法（二）色譜法鑒別

硅膠是弱酸性吸附劑，會(huì)吸附生物堿，用中性展開劑時(shí)，Rf

小，并會(huì)產(chǎn)生斑點(diǎn)拖尾現(xiàn)象

防止斑點(diǎn)拖尾的措施C.改用其他吸附劑（如堿性氧化鋁）B.用硅膠鋪板時(shí)加堿液（如氫氧化鈉）A.展開劑中加入堿性試劑（如氨水、二乙胺、吡啶）苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨126331例萬氏牛黃清心丸【鑒別】ChP為黃色熒光斑點(diǎn)例九分散的鑒別(馬錢子、麻黃、乳香、沒藥)游離、提取成鹽、提取游離、提取溶解供試液士的寧對(duì)照品鹽酸麻黃堿對(duì)照品馬錢子堿對(duì)照品硅膠G（0.2mol/LNaOH)氯仿-乙醇-環(huán)己烷(3:1:1)稀碘化鉍鉀試液茚三酮試液顯色觀察2.PC法（ChP應(yīng)用不多）固定相常用新華濾紙顯色方法熒光生物堿沉淀劑（不宜用H2SO4）例小活絡(luò)丸【鑒別】提取溶解供試液0.5ml氯仿提取游離對(duì)照液用烏頭堿、烏頭原堿分別配制正丁醇-醋酸乙酯-無水乙醇10102碘化鉍鉀橘紅色（烏頭堿）3.HPLC法以tR為定性參數(shù)，對(duì)照品對(duì)照一般與含量測(cè)定同時(shí)進(jìn)行

中藥制劑成份復(fù)雜，為延長(zhǎng)色譜柱使用壽命，可在色譜柱前加保護(hù)柱（預(yù)柱）四、含量測(cè)定

生物堿的定量方法，大多是根據(jù)它含有的N原子或雙鍵或分子中官能團(tuán)的理化性質(zhì)而設(shè)計(jì)的?？紤]中藥制劑的復(fù)雜性，可采用的方法有化學(xué)方法重量法容量法儀器方法光譜法色譜法（一）化學(xué)方法適用于生物堿含量高、處方藥味少、內(nèi)含成分簡(jiǎn)單的制劑準(zhǔn)確度高、精密度好靈敏度低、專屬性差1.容量法滴定法（1）酸堿滴定法A.酸堿滴定法（水溶液）堿性較弱生物堿堿性較強(qiáng)生物堿B.非水堿量法A.水溶液中滴定生物堿類藥物提取例顛茄酊ChP【含量測(cè)定】精密量取本品100mL，置蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸發(fā)至約10mL，如有沉淀析出，可加乙醇適量使溶解，移至分液漏斗中，蒸發(fā)皿用0.1mol/L硫酸溶液10mL分次洗滌，洗液并入分液漏斗中，用氯仿分次振搖，每次10mL，至氯仿層無色，合并氯仿液，用0.1mol/L硫酸溶液10mL振搖洗滌，洗液并入酸液中，加過量濃氨溶液使呈堿性，迅速用氯仿分次振搖提取，至生物堿提盡。如發(fā)生乳化現(xiàn)象，可加乙醇數(shù)滴，每次得到的氯仿液均用同一水10mL洗滌，棄去洗液，合并氯仿液，蒸干，加乙醇3mL，蒸干，并在80℃干燥2小時(shí)，殘?jiān)勇确?mL，必要時(shí)，微熱使溶解，精密加硫酸滴定液（0.01025mol/L）20mL，置水浴上加熱，除去氯仿，放冷，加甲基紅指示液1~2滴，用氫氧化鈉滴定液（0.02001mol/L）滴定，消耗9.31mL。每1mL硫酸滴定液（0.01mol/L）相當(dāng)于5.788mg的莨菪堿（C17H23NO3）。B.非水堿量法原理：弱堿性藥物堿性非常弱在水溶液中滴定突躍不明顯，不能在水中直接滴定，但在非水酸溶液中堿性相對(duì)增強(qiáng)，使滴定順利進(jìn)行可滴定。B.非水堿量法溶劑冰醋酸、冰醋酸+醋酐、醋酐滴定液高氯酸液（0.1mol/L）指示終點(diǎn)方法

電位法指示劑法結(jié)晶紫需加醋酸汞以消除干擾難解離在冰醋酸中酸性較強(qiáng)氫鹵酸對(duì)非水堿量法有干擾計(jì)算咖啡因ChP【含量測(cè)定】精密稱取本品0.1423g，加醋酐-冰醋酸（5:1）的混合液25mL，微熱使溶解，放冷，加結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1036mol/L）滴定，至溶液顯黃色，消耗高氯酸滴定液（0.1036mol/L）7.09mL；并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，空白試驗(yàn)消耗高氯酸滴定液（0.1036mol/L）0.03mL。每1mL高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于19.42mg的C8H10N4O2。

2.重量法*提取生物堿→蒸干→稱重*生物堿+沉淀劑→干燥→稱重沉淀劑重量法提取重量法例昆明山海棠片ChP【含量測(cè)定】取本品60片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于25片），置200mL錐形瓶中，加適量硅藻土（每取本品1g，加硅藻土0.2g），混勻，加乙醇70mL，加熱回流40分鐘，放冷，濾過，濾渣中再加乙醇50mL，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，合并濾液，置水浴上蒸干，殘?jiān)欲}酸溶液（1→100）30mL，置水浴上攪拌使溶解，放冷，濾過，殘?jiān)儆名}酸溶液（1→200）同法提取3次（20mL、15mL、15mL），合并濾液于分液漏斗中，加氨試液使溶液呈堿性，用乙醚振搖提取4次（40mL、30mL、25mL、20mL），合并乙醚液，用水振搖洗滌2次，每次10mL，乙醚液用濾紙濾過，醚液置于已稱定重量的蒸發(fā)皿中，在低溫水浴上蒸去乙醚，殘?jiān)屑尤肷僭S無水乙醇，蒸干，在100℃干燥至恒重，稱定重量，計(jì)算，即得。本品每片含總生物堿不得少于1.0mg。例苦參片中苦參總堿的含量測(cè)定△提取游離溶解→100mL恒重40.0mL過濾苦參總堿的含量計(jì)算（二）分光光度法1.直接測(cè)定法適用于藥味較少、干擾不大的制劑2.比色法（1）酸性染料比色法（2）苦味酸鹽比色法（3）雷氏鹽比色法（4）異羥肟酸鐵比色法（1）酸性染料比色法+A.原理A有機(jī)溶劑離子對(duì)水相中反應(yīng)離子對(duì)BH+·In-被有機(jī)溶劑提取，使有機(jī)相呈色。剩余的酸性染料留于水相比色法測(cè)定有機(jī)溶劑提取B.討論pH↓H++In-→HIn*沒有足夠的In

-與BH+結(jié)合pH↑BH+→B＋H+*沒有足夠的H+與B結(jié)合*B進(jìn)入有機(jī)相a.水相的最適pH值優(yōu)點(diǎn)*與離子對(duì)形成氫鍵，提取率高*不與水相混溶*A樣大二氯甲烷、二氯乙烯、苯、甲苯、四氯化碳b.有機(jī)溶劑常用氯仿例安胃片延胡索中總生物堿的含量測(cè)定pH4.5提取標(biāo)準(zhǔn)曲線法干擾*使有機(jī)相混濁，A↑*帶入水相染料，A↑排除*加脫水劑（無水Na2SO4）*用濾紙過濾c.水分的影響要求：1.與有機(jī)堿定量結(jié)合； 2.所成離子對(duì)于有機(jī)溶劑中溶解度大，且有較高的吸收度；3.染料不溶或難溶于有機(jī)溶劑。常用：

溴麝香草酚藍(lán)(BTB)、溴甲酚綠(BCG)、溴甲酚紫(BCP)、溴酚藍(lán)(BPB)和甲基橙d.酸性染料的選擇苦味酸（三硝基苯酚）（2）苦味酸鹽法buffer等量拌勻甲醇提取揮干溶解、定容溶解鹽酸小檗堿對(duì)照品法例萬氏牛黃清心丸中黃連總堿的含量測(cè)定（3）雷氏鹽比色法A.原理生物堿在一定pH溶液中能成為BH+，可與雷氏鹽的陰離子

[Cr(NH3)2(SCN)4]-結(jié)合成為單鹽或雙鹽沉淀，只要測(cè)得雷氏鹽的吸收度，即可計(jì)算生物堿的含量硫氰化鉻銨NH4[Cr(NH3)2(SCN)4]·H2OB.測(cè)定方法直接法H+(定量過量)剩余法H+生物堿雷氏鹽剩余的雷氏鹽例產(chǎn)婦康顆粒中益母草總生物堿含量測(cè)定定容超聲蒸干成鹽、溶解攪拌H+(定量過量)過濾鹽酸水蘇堿對(duì)照品對(duì)照法（測(cè)定剩余雷氏鹽）（4）異羥肟酸鐵比色法Fe3+/3紅色水解A例附子注射液中酯型生物堿含量測(cè)定烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)曲線法A525nm游離提取蒸干溶解定容OH-（三）色譜法1.TLCS法例九分散中士的寧的含量測(cè)定點(diǎn)樣掃描λS=254nmλR=325nm游離提取成鹽游離提取揮干CHCl3士的寧對(duì)照品對(duì)照法2.HPLC法中藥制劑采用HPLC法測(cè)定含量，大部分為RP-HPLC法RP-HPLC法應(yīng)用于生物堿分析固定相硅膠-C4或C8或C18流動(dòng)相甲醇:水或乙腈:水應(yīng)注意固定相Si-OH的復(fù)蓋率復(fù)蓋率越高，分離效果越好通常硅膠上Si-OH數(shù)量約為6~8/nm2。在硅膠上直接鍵合烷基，平均鍵合量4/nm2，C4可得到最佳復(fù)蓋，而C18只有2/nm2復(fù)蓋率小，易引起拖尾，解決方法（1）改進(jìn)流動(dòng)相A.加抑制劑（三乙胺）掩蔽Si-OH基C.加電解質(zhì)緩沖液

改變流動(dòng)相離子強(qiáng)度，穩(wěn)定pH及促進(jìn)離子對(duì)相互作用B.加季銨鹽（溴化四甲基胺）例舒風(fēng)定痛丸中士的寧含量測(cè)定流動(dòng)相正己烷-二氯甲烷-無水甲醇-三乙胺47.547.550.4D.加離子對(duì)試劑當(dāng)生物堿在酸性條件下以陽(yáng)離子存在時(shí)，離子對(duì)試劑的陰離子與之形成中性離子對(duì)，掩蔽了生物堿的堿性基團(tuán)，使其不與Si-OH作用用過離子對(duì)試劑的柱要盡快清洗（辛烷磺酸鈉或十二烷基磺酸鈉）例燒傷止痛膏中小檗堿含量測(cè)定流動(dòng)相乙腈-0.045mol/LKH2PO4（pH5.0）4357含0.013mol/L十二烷基硫酸鈉（2）改進(jìn)固定相B.封尾技術(shù)鍵合后用三甲基氯硅烷作封尾處理，減少殘余羥基，增加單體覆蓋率A.選擇碳鏈較短鍵合相硅膠填料

如C4或

C83.GC法（1）適用于揮發(fā)性的、遇熱穩(wěn)定的生物堿類（3）一些生物堿鹽在約325℃急速加熱下即游離，故分離測(cè)得的均為游離生物堿（2）提取、純化時(shí)應(yīng)避免加熱96：136.用非水溶液滴定法測(cè)定鹽酸嗎啡含量時(shí)，應(yīng)使用的試劑A.5％醋酸汞冰醋酸液B.鹽酸C.冰醋酸D.二甲基甲酰胺E.高氯酸01：136.用非水溶液滴定法測(cè)定鹽酸嗎啡的含量，以下敘述中正確的有A.用中性乙醇作溶劑B.用冰醋酸作溶劑C.滴定前加入一定量醋酸汞試液D.用高氯酸滴定液滴定E.用結(jié)晶紫指示終點(diǎn)1.使生物堿堿性減小的吸電子基團(tuán)有

A.羥基B.羰基C.烷基D.甲基E.苯基2.常用的生物堿沉淀試劑有

A.碘化鉍鉀B.雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）C.碘-碘化鉀D.碘化汞鉀E.苦味酸（三硝基苯酚）3.不與生物堿沉淀劑發(fā)生沉淀反應(yīng)的是

A.小檗堿B.麻黃堿C.苦參堿D.黃連堿E.氧化苦參堿4.具有揮發(fā)性的生物堿是

A.苦參堿B.莨菪堿C.麻黃堿D.小檗堿E.烏頭堿5.就生物堿分子中N原子未共用電子對(duì)雜化方式而論，其堿性順序?yàn)?/p>

A.sp3＞sp2＞spB.sp＞sp2＞sp3C.sp2＞sp＞sp3

D.sp2＞sp3＞spE.sp3＞sp＞sp26.酸件染料比色法中，水相的pH值偏低，則

A.能形成離子對(duì)B.有機(jī)溶劑提取能完全

C.酸性染料以陰離子形式存在D.生物堿以游離狀態(tài)存在

E.酸性染料以分子形式存在7.提取重量法測(cè)定生物堿含量原理是

A.生物堿鹽易溶于水，生物堿易溶于有機(jī)溶劑

B.可與酸性染料形成離子對(duì)C.可與生物堿沉淀劑形成沉淀

D.可與顯色試劑發(fā)生呈色反應(yīng)E.堿性較強(qiáng)8.酸性染料比色法測(cè)定生物堿類藥物，有機(jī)溶劑萃取的有色物是

A.離子對(duì)和指示劑的混合物B.生物堿鹽

C.指示劑D.離子對(duì)E.游離生物堿9.HPLC法中，為克服游離硅醇基對(duì)測(cè)定生物堿類藥物的影響，可采取下列措施

A.流動(dòng)相中加入硅醇基抑制劑B.流動(dòng)相中加