水產(chǎn)動(dòng)物營養(yǎng)與

飼料科學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)水產(chǎn)動(dòng)物營養(yǎng)與

飼料科學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)1實(shí)驗(yàn)一魚蝦飼料的總消化率

及其蛋白質(zhì)消化率的測(cè)定

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

掌握用外源指示劑Cr2O3間接測(cè)量魚、蝦飼料消化率的基本方法。實(shí)驗(yàn)一魚蝦飼料的總消化率

及其蛋白質(zhì)消化率的測(cè)定2【實(shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】與飼料均勻混合的外源指示劑Cr2O3完全不被動(dòng)物吸收而隨糞便排出。根據(jù)指示劑及蛋白質(zhì)(或其他營養(yǎng)成分)在食物及糞便中的含量變化。飼料的總消化率和蛋白質(zhì)的消化率由如下兩式給出：飼料總消化率：D(％)=[1－B／B、]×100蛋白質(zhì)消化率：D、(％)=[1-(A、／A×B／B、)]×100A、A、分別為飼料和糞便中的粗蛋白含量。B、B、分別為飼料和糞便中的Cr2O3含量?！緦?shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】與飼料均勻混合的外源指示劑Cr2O3完3【實(shí)驗(yàn)用品】

1、實(shí)驗(yàn)魚可根據(jù)實(shí)際情況選擇實(shí)驗(yàn)魚的種類，但易于馴化、習(xí)慣實(shí)驗(yàn)環(huán)境的魚類(如：金魚、錦鯉、羅非魚等)較好。體重20～25g，每試驗(yàn)組10尾。2、水族箱每試驗(yàn)組配50～100L容積的水族箱2個(gè)，一個(gè)作投飼槽、一個(gè)作排泄槽。3、充氧設(shè)備每水族箱配微型充氣泵一臺(tái)。4、集糞工具每組配虹吸管1支、漏斗2個(gè)。5、小撈網(wǎng)1個(gè)。6、100目分樣篩1個(gè)?！緦?shí)驗(yàn)用品】1、實(shí)驗(yàn)魚可根據(jù)實(shí)際情況選擇實(shí)驗(yàn)魚的種類，但易4【實(shí)驗(yàn)操作步驟】1、試驗(yàn)飼料的制備試驗(yàn)飼料可直接用市售魚、蝦飼料，經(jīng)重新粉碎后使用。所有干性原料要經(jīng)粉碎，并通過100目篩?；瘜W(xué)純Cr2O3也要經(jīng)過100目篩。按每千克干飼料的1％準(zhǔn)確稱取Cr2O3，與少量的干性原料混合，分四次逐步擴(kuò)大到全部干性飼料組分，充分混合均勻，混合操作可在大白搪瓷盆進(jìn)行。因Cr2O3為綠色，所以從盆壁上是否留有團(tuán)狀綠色痕跡來判斷混合的均勻程度?；旌暇鶆虺潭葲Q定試驗(yàn)的成敗。平均每組制作200g飼料?！緦?shí)驗(yàn)操作步驟】1、試驗(yàn)飼料的制備52、投飼與糞便采集把試驗(yàn)魚置于投飼槽、充氣，用試驗(yàn)飼料暫養(yǎng)3天。每天清理糞便及殘餌，并適量換水。停食數(shù)小時(shí)后，再一次投足量試驗(yàn)飼料讓魚群飽食。然后用撈網(wǎng)把魚捕到條件完全相同的排泄槽開始觀察排糞，排糞后及時(shí)用虹吸管收取，經(jīng)過濾，收集烘干，保存分析用。虹吸過程盡量不要把條狀糞便弄破。為了獲得可靠的結(jié)果，通常要同時(shí)作三個(gè)重復(fù)組，或把排糞后的魚再移回投飼槽喂飽，再移到排泄槽，再收集糞便，如此重復(fù)兩次。但這里僅為了掌握基本方法、收集足夠供分析的糞便即可(約300mg干品)。2、投飼與糞便采集63、樣品分析（1）飼料中干物質(zhì)的測(cè)定。（2）飼料中灰分的測(cè)定。（3）飼料中粗蛋白質(zhì)的測(cè)定。（4）Cr2O3的濕式灰化定量法。3、樣品分析74、消化率的計(jì)算及不同實(shí)驗(yàn)組間的結(jié)果比較：根據(jù)凱氏定氮法測(cè)得的飼料及糞便的蛋白質(zhì)水平，以及以上獲得Cr2O3數(shù)據(jù)，用上述計(jì)算公式，便可算出飼料的總消化率及蛋白質(zhì)消化率。因?yàn)椴煌囼?yàn)組所用的試驗(yàn)飼料一樣，試驗(yàn)魚及試驗(yàn)條件相似，方法相同，所以其結(jié)果有很強(qiáng)的可比性。各試驗(yàn)組可將試驗(yàn)結(jié)果與其他組的結(jié)果進(jìn)行比較，并予討論。4、消化率的計(jì)算及不同實(shí)驗(yàn)組間的結(jié)果比較：8【作業(yè)與思考】

1、試驗(yàn)魚的暫養(yǎng)應(yīng)注意哪些方面？【作業(yè)與思考】9實(shí)驗(yàn)二飼料中干物質(zhì)的測(cè)定

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹繙y(cè)定飼料中干物質(zhì)質(zhì)量實(shí)驗(yàn)二飼料中干物質(zhì)的測(cè)定【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?0【實(shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】飼料中營養(yǎng)物質(zhì)，包括有機(jī)物質(zhì)和無機(jī)物質(zhì)均存在于飼料的干物質(zhì)中。飼料中干物質(zhì)含量的多少與飼料的營養(yǎng)價(jià)值及家畜的采食量均有密切關(guān)系。風(fēng)干飼料例如各種籽實(shí)飼料、油餅、糠麩、藁秕、青干草、魚粉、血粉等可以直接在100～105℃溫度下烘干，烘去飼料中蛋白質(zhì)、淀粉及細(xì)胞膜上的吸附水，得到風(fēng)干飼料的干物質(zhì)量百分比。含水分多的新鮮飼料如青飼料、青貯飼料、多汁飼料以及畜類和鮮肉等均可先測(cè)定初水分后制成半干樣本；再在100～105℃溫度下烘干，測(cè)得半干樣本中的干物質(zhì)量，而后計(jì)算新鮮飼料或鮮糞或肉中干物質(zhì)量百分比?！緦?shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】飼料中營養(yǎng)物質(zhì)，包括有機(jī)物質(zhì)和無機(jī)物質(zhì)11【實(shí)驗(yàn)用品】一、實(shí)驗(yàn)器材1、一個(gè)學(xué)生做2個(gè)測(cè)定所需儀器數(shù)量

?稱量瓶：鋁質(zhì)、帶蓋、容量為30毫升2個(gè)

?干燥器：30厘米直徑 1個(gè)

?坩堝鉗： 1把

?精密天平： 1架

?藥匙： 1個(gè)

?小毛刷： 1把2、公用儀器

?鼓風(fēng)烘箱：100～105℃ 1臺(tái)【實(shí)驗(yàn)用品】一、實(shí)驗(yàn)器材12二、試劑

硅膠 500克凡士林 10克以上均為干燥器用二、試劑13【實(shí)驗(yàn)操作步驟】1、用普通天平稱出200～300克剛采集的樣品(實(shí)驗(yàn)魚的糞便)，放入60～70℃烘箱中，5～6個(gè)小時(shí)后取出。磨碎，制得半干樣本。2、將洗凈的稱量瓶放在100～105℃的鼓風(fēng)烘箱內(nèi)，開蓋烘1小時(shí)。用坩堝鉗取出稱量瓶，并移入干燥器中冷卻約30分鐘后，稱重(稱量瓶放入烘箱時(shí)須啟蓋，冷卻和稱重時(shí)須嚴(yán)蓋)。3、在稱量瓶中稱取2克風(fēng)干樣本(實(shí)驗(yàn)飼料)和半干樣本。將稱量瓶和樣本放入100～105℃烘箱內(nèi)，將瓶蓋揭開少許?！緦?shí)驗(yàn)操作步驟】1、用普通天平稱出200～300克剛采集的樣144、樣本在烘箱內(nèi)烘5～6小時(shí)后緊蓋瓶蓋，移入干燥器中，冷卻30分鐘，進(jìn)行第一次稱重。5、按照上述方法，繼續(xù)將稱量瓶放入烘箱內(nèi)，烘1小時(shí)后進(jìn)行第二次稱重，直至前后兩次稱重的差數(shù)在0.002克。6、干物質(zhì)計(jì)算值采用數(shù)次稱重的最低值。7、稱量瓶中的干物質(zhì)保留作測(cè)定粗蛋白。4、樣本在烘箱內(nèi)烘5～6小時(shí)后緊蓋瓶蓋，移入干燥器中，冷卻15【結(jié)果計(jì)算與方法】1、風(fēng)干樣本(或半干樣本)中105℃干物質(zhì)％

式中：W1=稱量瓶重(克)W2=稱量瓶重(克)+風(fēng)干樣本重(克)W=W2-W1=風(fēng)干樣本重(克)W3=稱量瓶重(克)+105℃干物質(zhì)重(克)【結(jié)果計(jì)算與方法】1、風(fēng)干樣本(或半干樣本)中105℃干物質(zhì)16【注意事項(xiàng)】本試驗(yàn)所用鼓風(fēng)烘箱測(cè)定飼料樣本中干物質(zhì)的方法，并不是絕對(duì)正確的。有以下幾個(gè)可能，會(huì)引起測(cè)定結(jié)果的誤錯(cuò)。1、加熱時(shí)樣本中揮發(fā)性物質(zhì)可能與樣本中水分一起損失，例如，青貯料中的揮發(fā)性脂肪酸。2、樣本中有些物質(zhì)如脂肪，在加熱時(shí)可能在空氣中氧化，使樣本重量不但不減少，反而會(huì)增加。在這種情況下，測(cè)定樣本中干物質(zhì)需在真空烘箱或裝有二氧化碳的特殊烘箱中進(jìn)行。3、有些飼料，在105℃時(shí)可能發(fā)生某些化學(xué)變化。例如，含糖分高的糖漿。這類飼料應(yīng)在較低溫度和減壓條件下進(jìn)行干燥。【注意事項(xiàng)】本試驗(yàn)所用鼓風(fēng)烘箱測(cè)定飼料樣本中干物質(zhì)的方法，并17【作業(yè)與思考】1、某種飼料半干樣本105℃干物質(zhì)百分比為90％，該飼料空氣干燥干物質(zhì)為30％，計(jì)算該種新鮮飼料的干物質(zhì)百分比?！咀鳂I(yè)與思考】18實(shí)驗(yàn)三粗蛋白質(zhì)的測(cè)定

(凱氏定氮法)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?、掌握飼料中粗蛋白質(zhì)測(cè)定方法。2、測(cè)定各種樣本的粗蛋白質(zhì)含量。實(shí)驗(yàn)三粗蛋白質(zhì)的測(cè)定

(凱氏定19【實(shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】

飼料中含氮物質(zhì)包括純蛋白質(zhì)和氨化物(氨化物有氨基酸、酰胺、硝酸鹽及銨鹽等)，兩者總稱為粗蛋白質(zhì)。凱氏定氮法的基本原理是用濃硫酸分解樣本中蛋白質(zhì)與氨化物，使它們含氨物都轉(zhuǎn)變成氨氣，氨氣被濃硫酸吸收變?yōu)榱蛩徜@。硫酸銨在濃堿的作用下放出氨氣。通過蒸餾，氨氣隨汽水順著冷凝管流入硼酸溶液，與之結(jié)合成為四硼酸銨，后者用鹽酸或硫酸標(biāo)準(zhǔn)液滴定，即可測(cè)定放出的氨氮量。根據(jù)氮量，乘以特定系數(shù)，一般為6.25，即可得出樣本中粗蛋白質(zhì)含量。上述過程中的化學(xué)反應(yīng)如下：【實(shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】飼料中含氮物質(zhì)包括純20●2CH3CHNH2COOH+13H2S04

→(NH4)2S04+6C02

↑+12S02↑+16H2O●(NH4)2S04+2NaOH→2NH3+2H20+Na2S04●4H3B03+NH3

→NH4HB407+5H20

●NH4HB407+HCI+5H20→NH4CI+4H3B03●2CH3CHNH2COOH+13H2S04→(21【實(shí)驗(yàn)用品】一、實(shí)驗(yàn)器材1、一個(gè)學(xué)生做2個(gè)測(cè)定，所需儀器數(shù)量◆凱氏燒瓶100毫升 2個(gè)◆分析天平 1架◆玻璃珠 6粒◆量筒 50毫升 1個(gè)◆漏斗 4~6厘米直徑2個(gè)◆容量瓶 100毫升 2個(gè)◆三角瓶 150毫升 2~6個(gè)◆滴定管 1支◆移液管 10或5毫升1支【實(shí)驗(yàn)用品】一、實(shí)驗(yàn)器材222、公用儀器數(shù)量◆量筒 5毫升 2個(gè)◆量筒 10或20毫升各1個(gè)◆半微量凱氏蒸餾器 1套◆電爐 1000瓦 1個(gè)◆蒸氣發(fā)生瓶3000毫升、平底短頸1個(gè)◆定時(shí)鐘 1個(gè)◆毒氣柜 1架2、公用儀器數(shù)量23二、試劑一個(gè)學(xué)生做2個(gè)測(cè)定所需藥品數(shù)量◆粉末硫酸鉀-硫酸銅混合物(3：1研磨混勻) 0.5克◆硫酸(比重1．84，無氮) 24毫升◆硼酸溶液2％ 20毫升◆氫氧化鈉溶液30％ 40毫升◆甲基紅一甲烯藍(lán)混合指示劑 1毫升(取200毫升0．1％甲基紅乙醇溶液與50毫升1％甲烯藍(lán)乙醇溶混勻。此混合指示劑在堿性溶液呈綠色，在酸性溶液紫紅色)標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液(0.01摩爾／升。) 600毫升二、試劑一個(gè)學(xué)生做2個(gè)測(cè)定所需藥品數(shù)量24【實(shí)驗(yàn)操作步驟】1、凱氏定氮儀的構(gòu)造和安裝

凱氏定氮儀由蒸汽發(fā)生器、反應(yīng)管及冷凝器三部分組成。蒸氣發(fā)生器包括電爐及一個(gè)1.2升的燒瓶。蒸氣發(fā)生器借橡皮管與反應(yīng)管相連，反應(yīng)管上端有一個(gè)玻璃杯，樣品和堿液可由此加入到反應(yīng)室，反應(yīng)室中心有一長(zhǎng)玻璃管，其上端通過反應(yīng)室外層與蒸氣發(fā)生器相連，下端靠近反應(yīng)室的底部。反應(yīng)室外層下端有一開口，上有一皮管夾，由此可放出冷凝水及反應(yīng)廢液。反應(yīng)產(chǎn)生的氨可通過反應(yīng)室上端細(xì)管及冷凝器通到吸收瓶中，反應(yīng)管及冷凝管之間借磨口連接，防止漏氣。安裝儀器時(shí)，先將冷凝管垂直地固定在鐵架臺(tái)上，冷凝管下端不要距離實(shí)驗(yàn)臺(tái)太近，以免放不下吸收瓶。反應(yīng)管固定在另一鐵架，蒸氣發(fā)生器放在電爐上，安裝完畢不得輕易移動(dòng)?！緦?shí)驗(yàn)操作步驟】1、凱氏定氮儀的構(gòu)造和安裝252、消化(1)稱取飼料樣本0.5克兩份，糞便樣本0.5克兩份，將稱樣紙卷成筒狀，小心無損地將樣本放入100毫升洗凈烘干的凱氏燒瓶中。另取2個(gè)凱氏燒瓶作為對(duì)照，測(cè)定試劑中可能含有的微量物質(zhì)。(2)分別加入硫酸鉀．硫酸銅混合物0.2克，濃硫酸5毫升。再加玻璃珠2粒，以防消化時(shí)液體濺失。(3)在凱氏瓶上加一個(gè)小漏斗，將凱氏燒瓶放在消化架的電爐上加熱。開始加熱時(shí)，先用小火，以免瓶?jī)?nèi)產(chǎn)生大量泡沫，溢出瓶口。等泡沫停止產(chǎn)生后，再加強(qiáng)火力。消化時(shí)經(jīng)常轉(zhuǎn)動(dòng)燒瓶，使全部樣本浸入硫酸內(nèi)。如有黑泡濺在瓶壁，應(yīng)待燒瓶冷卻后加少量蒸餾水沖洗之，再繼續(xù)加熱消化。如有黑炭粒不能全部消化，則待燒瓶冷卻后，補(bǔ)加少量濃硫酸，繼續(xù)加熱，直至瓶?jī)?nèi)溶液澄清呈透明淡綠色為止，消化才告完畢。一般飼料消化需3～4小時(shí)，消化過程中產(chǎn)生SO2，有刺鼻味，故需在毒氣柜中進(jìn)行。(4)燒瓶冷卻后加蒸餾水10毫升，搖勻，然后將燒瓶中溶液無損地移入50毫升容量瓶?jī)?nèi)，用蒸餾水沖洗凱氏燒瓶數(shù)次，洗液亦注入容量瓶中，并以蒸餾水稀釋至刻度，混勻備用。2、消化263、蒸餾(1)蒸餾器的洗滌：蒸氣發(fā)生器中盛有幾滴硫酸酸化的蒸餾水，關(guān)閉皮管夾，將蒸餾發(fā)生器的水燒開，讓蒸氣通過整個(gè)儀器。15分鐘后，在冷凝器下端放一個(gè)盛有5毫升2％硼酸溶液和1.2滴指示液的錐形瓶。冷凝管下端應(yīng)完全浸沒在液體中，繼續(xù)蒸餾1.2分鐘，錐形瓶?jī)?nèi)的溶液如不變色則證明蒸餾器內(nèi)部已洗滌干凈。移開錐形瓶通氣1分鐘，用水沖洗冷凝管口，然后用手涅緊橡皮管，由于反應(yīng)外層蒸氣冷縮，壓力減低，反應(yīng)室凝結(jié)的水可自動(dòng)吸出進(jìn)入，打開皮夾將廢水排出。(2)取50毫升錐形瓶數(shù)個(gè)，各加入5毫升2％硼酸溶液和混合指示劑2滴，置于蒸餾裝置的冷凝管下，使管口浸入硼酸溶液內(nèi)。3、蒸餾27(3)煮沸蒸氣發(fā)生瓶中蒸餾水。用移液管取10毫升消化液，細(xì)心地由凱氏蒸餾裝置上的小玻杯注入反應(yīng)室，將小玻杯棒狀玻璃塞塞緊，使之不漏氣。取10毫升30％的氫氧化鈉溶液注入小玻杯，小心地輕輕提起棒狀玻塞，使氫氧化鈉溶液流入反應(yīng)室，立刻將玻塞蓋緊，加水于小玻杯，使少許水流入反應(yīng)室以洗滌堿液，部分水留于小玻杯，以防漏氣。夾緊外套管出口的橡皮管，開始蒸餾。蒸氣吹入反應(yīng)室，用定時(shí)鐘定時(shí)，使氨氣通過冷凝管流入錐形瓶的硼酸溶液中，此時(shí)錐形瓶中的溶液由紫色變成綠色，蒸餾3-5分鐘，移動(dòng)錐形瓶，使硼酸液面離開冷凝管，繼續(xù)蒸餾1分鐘，并用少許蒸溜水沖洗管口外壁。將錐形瓶移開蒸餾裝置，準(zhǔn)備滴定。(3)煮沸蒸氣發(fā)生瓶中蒸餾水。用移液管取10毫升消化液，細(xì)心28(4)蒸餾完畢后，在小玻杯中加滿蒸餾水，將玻棒提起流入反應(yīng)室中，隨手夾緊橡皮管以斷氣源，于是反應(yīng)室中的殘液自動(dòng)吸入反應(yīng)室外層，如此沖洗4次后將外套管下端出口的橡皮管打開，使反應(yīng)室外層的殘液排出。待殘液排完后，夾緊橡皮管。(5)待樣品和空白消化液蒸餾完畢后，同時(shí)進(jìn)行滴定。(4)蒸餾完畢后，在小玻杯中加滿蒸餾水，將玻棒提起流入反應(yīng)室294、滴定先將微量滴定管準(zhǔn)備妥當(dāng)，用0.01NHCl標(biāo)準(zhǔn)液滴定。瓶中溶液由綠色變成淡紫色為滴定終點(diǎn)。4、滴定30【結(jié)果計(jì)算與方法】

樣本中粗蛋白質(zhì)(N×6.25)含量％

=(V3-V0)×N×0.014克×6.25×(V1/V2)×(100/W)

式中：W=樣本重(克)V1=消化液稀釋容量(毫升)V2=稀釋液蒸餾用量(毫升)V3=滴定樣本餾出液的0.0100NHCI耗量(毫升)V0=滴定試劑空白餾出液的0.0100NHCl耗量(毫升)N=HCI當(dāng)量濃度說明：①系數(shù)6.25是按照每100克粗蛋白質(zhì)含有16克氮計(jì)算而得。②系數(shù)0.014即1毫升1NHCl液相當(dāng)于0.014克氮。③每次測(cè)定樣本時(shí)必須同時(shí)作試劑空白試驗(yàn)?！窘Y(jié)果計(jì)算與方法】樣本中粗蛋白質(zhì)(N×6.25)含量％31【注意事項(xiàng)】1、現(xiàn)時(shí)測(cè)定飼料的粗蛋白質(zhì)含量，多趨向于采用凱氏半微量定氮法，其原因是稱取樣本量不多，耗用試劑量較少，用于樣本消化和蒸餾的時(shí)間較短。本方法適合于畜體、畜產(chǎn)品、糞、尿中粗蛋白質(zhì)的測(cè)定。2、凱氏大量定氮法亦在某些情況下被采用，其原理與凱氏半微量定氮法相同。前法備有凱氏蒸餾架，凱氏燒瓶(常用250毫升或500毫升)中樣本消化完畢后，即可加入200毫升蒸餾水，直接裝置在凱氏蒸餾架上全部蒸餾，不須將凱氏瓶中消化液轉(zhuǎn)移入容量瓶?jī)?nèi)，而后再吸取部分沖淡液進(jìn)行蒸餾等手續(xù)。這是凱氏大量定氮法的優(yōu)越性。這個(gè)方法適用于測(cè)定鮮肉、鮮糞與羊毛中粗蛋白質(zhì)?！咀⒁馐马?xiàng)】1、現(xiàn)時(shí)測(cè)定飼料的粗蛋白質(zhì)含量，多趨向于采用凱氏323、硫酸銅為還原催化劑，其反應(yīng)原理如下：2CuS04＋C＋H2S04→Cu2S04＋S02↑＋C02↑

有機(jī)物質(zhì)Cu2S04+2H2S04

→2CuS04+2H20+S02↑3、硫酸銅為還原催化劑，其反應(yīng)原理如下：33【作業(yè)與思考】1公斤飼料中含有25克粗蛋白質(zhì)，則1公斤飼料中含有多少克氮?【作業(yè)與思考】34實(shí)驗(yàn)四Cr203(三氧化二鎘)定量法【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

掌握Cr2O3指示劑的測(cè)定方法。實(shí)驗(yàn)四Cr203(三氧化二鎘)定量法【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?5【實(shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】在一定量的樣本中，加入濃硝酸，經(jīng)硝化產(chǎn)生白色固形物，加入過氯酸氧化后，形成褐色化合物，其顏色的深淺與Cr2O3的濃度成正比，于波長(zhǎng)350nm處測(cè)量光密度?！緦?shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】在一定量的樣本中，加入濃36【實(shí)驗(yàn)用品】一、實(shí)驗(yàn)器材

一個(gè)學(xué)生作兩個(gè)測(cè)定，所需用量：

◆分光光度計(jì) 一臺(tái)

◆比色管 10支

◆比色架 1個(gè)

◆電爐 1個(gè)

◆凱氏燒瓶 4個(gè)

◆硝酸(比重1．42) 20毫升二、試劑

◆過氯酸(70％) 12毫升

◆Cr2O3 20毫克【實(shí)驗(yàn)用品】一、實(shí)驗(yàn)器材37【實(shí)驗(yàn)操作步驟】

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定。精確稱量5mg分析純Cr2O3，置于100ml凱氏燒瓶中，加濃硝酸5ml，加熱氧化約20min，當(dāng)溶液中產(chǎn)生白色固形物時(shí)，停止加熱。冷卻后，徐徐注3ml過氯酸，加熱使溶液從綠色經(jīng)黃色而急變?yōu)楹稚?，再繼續(xù)加熱l0min，冷卻后以蒸餾水定容至l0ml,作為母液。每毫升含Cr2O3為0.5mg。從母液中分別吸取和0.9ml于10m1容量瓶中，用蒸餾水分別定容至l0ml，便得到相當(dāng)于100m1溶液中含Cr2O3為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0和4.5mg的濃度系列溶液，進(jìn)行分光測(cè)定。2、樣品測(cè)定。精確稱量樣品80mg(含Cr2O31~3mg)置于l00ml凱氏燒瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法進(jìn)行硝化，然后以蒸餾水定容至l00ml，進(jìn)行分光測(cè)定?！緦?shí)驗(yàn)操作步驟】1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定。38

【計(jì)算】

（1）根據(jù)濃度和光密度值的關(guān)系制作標(biāo)準(zhǔn)曲線或建立回歸分析方法。（2）根據(jù)樣品的光密度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上或用回歸方程獲得樣品中Cr2O3含量。【計(jì)算】39實(shí)驗(yàn)五飼料中粗灰分

(礦物質(zhì))的測(cè)定【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?、掌握飼料中粗灰分(礦物質(zhì))測(cè)定方法。2、測(cè)定各種樣本的粗灰分(礦物質(zhì))量。實(shí)驗(yàn)五飼料中粗灰分

(礦物質(zhì))40【實(shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】飼料中的灰分，即飼料中的礦物質(zhì)或稱無機(jī)鹽，主要為鉀、鈉、鈣、鎂、硫、硅、磷、鐵及其它微量元素。測(cè)定方法是，將飼料樣本中有機(jī)物質(zhì)的主要元素如氮、氫、氧、碳等在高溫下(400～600℃)燒灼后被氧化而逸失，所剩殘?jiān)偡Q為“粗灰分”。粗灰分包括飼料中所含各種礦物質(zhì)元素的氧化物和少量雜質(zhì)，如粘土、砂石……等，純灰分則不含雜質(zhì)。雜質(zhì)無營養(yǎng)價(jià)值?！緦?shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】飼料中的灰分，即飼料中的礦物質(zhì)或稱無機(jī)41【實(shí)驗(yàn)用品】一、實(shí)驗(yàn)器材1、一個(gè)學(xué)生作2個(gè)測(cè)定所需儀器數(shù)量分析天平 1架坩堝(帶蓋) 瓷質(zhì)、容量30毫升 2套坩堝鉗 短柄 1把干燥器 30厘米直徑 1個(gè)2、公用儀器數(shù)量茂福爐 帶高溫溫度計(jì)1具電熱板 1具坩堝鉗 長(zhǎng)柄 1把【實(shí)驗(yàn)用品】一、實(shí)驗(yàn)器材42二、試劑1、一個(gè)學(xué)員做2個(gè)測(cè)定所需藥品量氯化鈣 工業(yè)用 500克凡士林 普通 10克2、公用藥品名稱及需要量0.5％氯化鐵墨水溶液(稱0.5克氯化鐵FeCl3.H20溶于100毫升藍(lán)墨水中，為坩堝上編號(hào)用)20毫升。二、試劑1、一個(gè)學(xué)員做2個(gè)測(cè)定所需藥品量43【實(shí)驗(yàn)操作步驟】

1、將帶蓋的瓷坩堝洗凈烘干后，用鋼筆蘸氯化鐵溶液在坩堝蓋上編寫號(hào)碼(號(hào)碼一律刻在坩堝和坩堝蓋的廠牌旁，便于尋找)。2、將帶蓋坩堝放入茂福爐內(nèi)，在600℃溫度下燒灼30分鐘(坩堝蓋打開一部分)，待爐溫降至低于200℃，坩堝移入干燥器中，冷卻1小時(shí)后稱重。3、在已知重量的坩堝內(nèi)，稱取風(fēng)干或半干樣本2克。4、將盛樣本的坩堝放在電熱板上，用小火慢慢炭化樣本中的有機(jī)物質(zhì)。此時(shí)可將坩堝蓋打開一部分，便于氣體流通。如果炭化時(shí)火力太大，則可能由于物質(zhì)進(jìn)行劇烈干餾而使部分樣本顆粒被逸出的氣體帶走(這點(diǎn)非常重要，須特別注意)?！緦?shí)驗(yàn)操作步驟】1、將帶蓋的瓷坩堝洗凈烘干后，用鋼筆蘸氯化445、待樣本炭化至無煙，再將坩堝移入茂福爐中，在600℃溫度下燒灼。坩堝蓋打開少許，直至樣本全部呈白色為止(約需2～4小時(shí))。坩堝中灰分如呈灰白色，則灰中仍含有炭質(zhì)的象征，須再加熱。如呈紅色，則灰中含有鐵；如呈藍(lán)色則含有錳，不必繼續(xù)燒灼。6、燒灼完畢，待爐溫降至低于200℃，將坩堝移入干燥器內(nèi)冷卻。30分鐘后，稱坩堝和灰分重。7、再將坩堝放入茂福爐中經(jīng)短時(shí)的燒灼(約15分鐘)，又將坩堝移入干燥器內(nèi)冷卻，再稱重，直至前后兩次稱重差數(shù)在0.001克。5、待樣本炭化至無煙，再將坩堝移入茂福爐中，在600℃溫度下45【注意事項(xiàng)】

1、取坩堝時(shí)須用坩堝鉗。2、坩堝加高溫后，坩堝鉗需燒熱后才能夾取?！咀⒁馐马?xiàng)】46【結(jié)果與計(jì)算方法】樣本中粗灰分含量％=灰分重(克)／樣本重(克)×100=×100×100式中：W=樣本重(克) Wl=坩堝(帶蓋)重(克)W2：坩堝(帶蓋)重+樣本重(克)W3：坩堝(帶蓋)重+灰分重第一次重(克)=第二次重(克)=【結(jié)果與計(jì)算方法】樣本中粗灰分含量％=灰分重(克)／樣本重(47【作業(yè)與思考】1、坩堝加高熱后，坩堝鉗亦需燒熱后才可夾取，理由何在?2、如何計(jì)算飼料中的有機(jī)物質(zhì)含量％?注：本方法可用于畜體、畜產(chǎn)品、糞、尿中粗灰分的測(cè)定【作業(yè)與思考】48水產(chǎn)動(dòng)物營養(yǎng)與

飼料科學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)水產(chǎn)動(dòng)物營養(yǎng)與

飼料科學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)49實(shí)驗(yàn)一魚蝦飼料的總消化率

及其蛋白質(zhì)消化率的測(cè)定

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

掌握用外源指示劑Cr2O3間接測(cè)量魚、蝦飼料消化率的基本方法。實(shí)驗(yàn)一魚蝦飼料的總消化率

及其蛋白質(zhì)消化率的測(cè)定50【實(shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】與飼料均勻混合的外源指示劑Cr2O3完全不被動(dòng)物吸收而隨糞便排出。根據(jù)指示劑及蛋白質(zhì)(或其他營養(yǎng)成分)在食物及糞便中的含量變化。飼料的總消化率和蛋白質(zhì)的消化率由如下兩式給出：飼料總消化率：D(％)=[1－B／B、]×100蛋白質(zhì)消化率：D、(％)=[1-(A、／A×B／B、)]×100A、A、分別為飼料和糞便中的粗蛋白含量。B、B、分別為飼料和糞便中的Cr2O3含量?！緦?shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】與飼料均勻混合的外源指示劑Cr2O3完51【實(shí)驗(yàn)用品】

1、實(shí)驗(yàn)魚可根據(jù)實(shí)際情況選擇實(shí)驗(yàn)魚的種類，但易于馴化、習(xí)慣實(shí)驗(yàn)環(huán)境的魚類(如：金魚、錦鯉、羅非魚等)較好。體重20～25g，每試驗(yàn)組10尾。2、水族箱每試驗(yàn)組配50～100L容積的水族箱2個(gè)，一個(gè)作投飼槽、一個(gè)作排泄槽。3、充氧設(shè)備每水族箱配微型充氣泵一臺(tái)。4、集糞工具每組配虹吸管1支、漏斗2個(gè)。5、小撈網(wǎng)1個(gè)。6、100目分樣篩1個(gè)?！緦?shí)驗(yàn)用品】1、實(shí)驗(yàn)魚可根據(jù)實(shí)際情況選擇實(shí)驗(yàn)魚的種類，但易52【實(shí)驗(yàn)操作步驟】1、試驗(yàn)飼料的制備試驗(yàn)飼料可直接用市售魚、蝦飼料，經(jīng)重新粉碎后使用。所有干性原料要經(jīng)粉碎，并通過100目篩。化學(xué)純Cr2O3也要經(jīng)過100目篩。按每千克干飼料的1％準(zhǔn)確稱取Cr2O3，與少量的干性原料混合，分四次逐步擴(kuò)大到全部干性飼料組分，充分混合均勻，混合操作可在大白搪瓷盆進(jìn)行。因Cr2O3為綠色，所以從盆壁上是否留有團(tuán)狀綠色痕跡來判斷混合的均勻程度?；旌暇鶆虺潭葲Q定試驗(yàn)的成敗。平均每組制作200g飼料。【實(shí)驗(yàn)操作步驟】1、試驗(yàn)飼料的制備532、投飼與糞便采集把試驗(yàn)魚置于投飼槽、充氣，用試驗(yàn)飼料暫養(yǎng)3天。每天清理糞便及殘餌，并適量換水。停食數(shù)小時(shí)后，再一次投足量試驗(yàn)飼料讓魚群飽食。然后用撈網(wǎng)把魚捕到條件完全相同的排泄槽開始觀察排糞，排糞后及時(shí)用虹吸管收取，經(jīng)過濾，收集烘干，保存分析用。虹吸過程盡量不要把條狀糞便弄破。為了獲得可靠的結(jié)果，通常要同時(shí)作三個(gè)重復(fù)組，或把排糞后的魚再移回投飼槽喂飽，再移到排泄槽，再收集糞便，如此重復(fù)兩次。但這里僅為了掌握基本方法、收集足夠供分析的糞便即可(約300mg干品)。2、投飼與糞便采集543、樣品分析（1）飼料中干物質(zhì)的測(cè)定。（2）飼料中灰分的測(cè)定。（3）飼料中粗蛋白質(zhì)的測(cè)定。（4）Cr2O3的濕式灰化定量法。3、樣品分析554、消化率的計(jì)算及不同實(shí)驗(yàn)組間的結(jié)果比較：根據(jù)凱氏定氮法測(cè)得的飼料及糞便的蛋白質(zhì)水平，以及以上獲得Cr2O3數(shù)據(jù)，用上述計(jì)算公式，便可算出飼料的總消化率及蛋白質(zhì)消化率。因?yàn)椴煌囼?yàn)組所用的試驗(yàn)飼料一樣，試驗(yàn)魚及試驗(yàn)條件相似，方法相同，所以其結(jié)果有很強(qiáng)的可比性。各試驗(yàn)組可將試驗(yàn)結(jié)果與其他組的結(jié)果進(jìn)行比較，并予討論。4、消化率的計(jì)算及不同實(shí)驗(yàn)組間的結(jié)果比較：56【作業(yè)與思考】

1、試驗(yàn)魚的暫養(yǎng)應(yīng)注意哪些方面？【作業(yè)與思考】57實(shí)驗(yàn)二飼料中干物質(zhì)的測(cè)定

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹繙y(cè)定飼料中干物質(zhì)質(zhì)量實(shí)驗(yàn)二飼料中干物質(zhì)的測(cè)定【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?8【實(shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】飼料中營養(yǎng)物質(zhì)，包括有機(jī)物質(zhì)和無機(jī)物質(zhì)均存在于飼料的干物質(zhì)中。飼料中干物質(zhì)含量的多少與飼料的營養(yǎng)價(jià)值及家畜的采食量均有密切關(guān)系。風(fēng)干飼料例如各種籽實(shí)飼料、油餅、糠麩、藁秕、青干草、魚粉、血粉等可以直接在100～105℃溫度下烘干，烘去飼料中蛋白質(zhì)、淀粉及細(xì)胞膜上的吸附水，得到風(fēng)干飼料的干物質(zhì)量百分比。含水分多的新鮮飼料如青飼料、青貯飼料、多汁飼料以及畜類和鮮肉等均可先測(cè)定初水分后制成半干樣本；再在100～105℃溫度下烘干，測(cè)得半干樣本中的干物質(zhì)量，而后計(jì)算新鮮飼料或鮮糞或肉中干物質(zhì)量百分比?！緦?shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】飼料中營養(yǎng)物質(zhì)，包括有機(jī)物質(zhì)和無機(jī)物質(zhì)59【實(shí)驗(yàn)用品】一、實(shí)驗(yàn)器材1、一個(gè)學(xué)生做2個(gè)測(cè)定所需儀器數(shù)量

?稱量瓶：鋁質(zhì)、帶蓋、容量為30毫升2個(gè)

?干燥器：30厘米直徑 1個(gè)

?坩堝鉗： 1把

?精密天平： 1架

?藥匙： 1個(gè)

?小毛刷： 1把2、公用儀器

?鼓風(fēng)烘箱：100～105℃ 1臺(tái)【實(shí)驗(yàn)用品】一、實(shí)驗(yàn)器材60二、試劑

硅膠 500克凡士林 10克以上均為干燥器用二、試劑61【實(shí)驗(yàn)操作步驟】1、用普通天平稱出200～300克剛采集的樣品(實(shí)驗(yàn)魚的糞便)，放入60～70℃烘箱中，5～6個(gè)小時(shí)后取出。磨碎，制得半干樣本。2、將洗凈的稱量瓶放在100～105℃的鼓風(fēng)烘箱內(nèi)，開蓋烘1小時(shí)。用坩堝鉗取出稱量瓶，并移入干燥器中冷卻約30分鐘后，稱重(稱量瓶放入烘箱時(shí)須啟蓋，冷卻和稱重時(shí)須嚴(yán)蓋)。3、在稱量瓶中稱取2克風(fēng)干樣本(實(shí)驗(yàn)飼料)和半干樣本。將稱量瓶和樣本放入100～105℃烘箱內(nèi)，將瓶蓋揭開少許?！緦?shí)驗(yàn)操作步驟】1、用普通天平稱出200～300克剛采集的樣624、樣本在烘箱內(nèi)烘5～6小時(shí)后緊蓋瓶蓋，移入干燥器中，冷卻30分鐘，進(jìn)行第一次稱重。5、按照上述方法，繼續(xù)將稱量瓶放入烘箱內(nèi)，烘1小時(shí)后進(jìn)行第二次稱重，直至前后兩次稱重的差數(shù)在0.002克。6、干物質(zhì)計(jì)算值采用數(shù)次稱重的最低值。7、稱量瓶中的干物質(zhì)保留作測(cè)定粗蛋白。4、樣本在烘箱內(nèi)烘5～6小時(shí)后緊蓋瓶蓋，移入干燥器中，冷卻63【結(jié)果計(jì)算與方法】1、風(fēng)干樣本(或半干樣本)中105℃干物質(zhì)％

式中：W1=稱量瓶重(克)W2=稱量瓶重(克)+風(fēng)干樣本重(克)W=W2-W1=風(fēng)干樣本重(克)W3=稱量瓶重(克)+105℃干物質(zhì)重(克)【結(jié)果計(jì)算與方法】1、風(fēng)干樣本(或半干樣本)中105℃干物質(zhì)64【注意事項(xiàng)】本試驗(yàn)所用鼓風(fēng)烘箱測(cè)定飼料樣本中干物質(zhì)的方法，并不是絕對(duì)正確的。有以下幾個(gè)可能，會(huì)引起測(cè)定結(jié)果的誤錯(cuò)。1、加熱時(shí)樣本中揮發(fā)性物質(zhì)可能與樣本中水分一起損失，例如，青貯料中的揮發(fā)性脂肪酸。2、樣本中有些物質(zhì)如脂肪，在加熱時(shí)可能在空氣中氧化，使樣本重量不但不減少，反而會(huì)增加。在這種情況下，測(cè)定樣本中干物質(zhì)需在真空烘箱或裝有二氧化碳的特殊烘箱中進(jìn)行。3、有些飼料，在105℃時(shí)可能發(fā)生某些化學(xué)變化。例如，含糖分高的糖漿。這類飼料應(yīng)在較低溫度和減壓條件下進(jìn)行干燥?！咀⒁馐马?xiàng)】本試驗(yàn)所用鼓風(fēng)烘箱測(cè)定飼料樣本中干物質(zhì)的方法，并65【作業(yè)與思考】1、某種飼料半干樣本105℃干物質(zhì)百分比為90％，該飼料空氣干燥干物質(zhì)為30％，計(jì)算該種新鮮飼料的干物質(zhì)百分比。【作業(yè)與思考】66實(shí)驗(yàn)三粗蛋白質(zhì)的測(cè)定

(凱氏定氮法)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?、掌握飼料中粗蛋白質(zhì)測(cè)定方法。2、測(cè)定各種樣本的粗蛋白質(zhì)含量。實(shí)驗(yàn)三粗蛋白質(zhì)的測(cè)定

(凱氏定67【實(shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】

飼料中含氮物質(zhì)包括純蛋白質(zhì)和氨化物(氨化物有氨基酸、酰胺、硝酸鹽及銨鹽等)，兩者總稱為粗蛋白質(zhì)。凱氏定氮法的基本原理是用濃硫酸分解樣本中蛋白質(zhì)與氨化物，使它們含氨物都轉(zhuǎn)變成氨氣，氨氣被濃硫酸吸收變?yōu)榱蛩徜@。硫酸銨在濃堿的作用下放出氨氣。通過蒸餾，氨氣隨汽水順著冷凝管流入硼酸溶液，與之結(jié)合成為四硼酸銨，后者用鹽酸或硫酸標(biāo)準(zhǔn)液滴定，即可測(cè)定放出的氨氮量。根據(jù)氮量，乘以特定系數(shù)，一般為6.25，即可得出樣本中粗蛋白質(zhì)含量。上述過程中的化學(xué)反應(yīng)如下：【實(shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】飼料中含氮物質(zhì)包括純68●2CH3CHNH2COOH+13H2S04

→(NH4)2S04+6C02

↑+12S02↑+16H2O●(NH4)2S04+2NaOH→2NH3+2H20+Na2S04●4H3B03+NH3

→NH4HB407+5H20

●NH4HB407+HCI+5H20→NH4CI+4H3B03●2CH3CHNH2COOH+13H2S04→(69【實(shí)驗(yàn)用品】一、實(shí)驗(yàn)器材1、一個(gè)學(xué)生做2個(gè)測(cè)定，所需儀器數(shù)量◆凱氏燒瓶100毫升 2個(gè)◆分析天平 1架◆玻璃珠 6粒◆量筒 50毫升 1個(gè)◆漏斗 4~6厘米直徑2個(gè)◆容量瓶 100毫升 2個(gè)◆三角瓶 150毫升 2~6個(gè)◆滴定管 1支◆移液管 10或5毫升1支【實(shí)驗(yàn)用品】一、實(shí)驗(yàn)器材702、公用儀器數(shù)量◆量筒 5毫升 2個(gè)◆量筒 10或20毫升各1個(gè)◆半微量凱氏蒸餾器 1套◆電爐 1000瓦 1個(gè)◆蒸氣發(fā)生瓶3000毫升、平底短頸1個(gè)◆定時(shí)鐘 1個(gè)◆毒氣柜 1架2、公用儀器數(shù)量71二、試劑一個(gè)學(xué)生做2個(gè)測(cè)定所需藥品數(shù)量◆粉末硫酸鉀-硫酸銅混合物(3：1研磨混勻) 0.5克◆硫酸(比重1．84，無氮) 24毫升◆硼酸溶液2％ 20毫升◆氫氧化鈉溶液30％ 40毫升◆甲基紅一甲烯藍(lán)混合指示劑 1毫升(取200毫升0．1％甲基紅乙醇溶液與50毫升1％甲烯藍(lán)乙醇溶混勻。此混合指示劑在堿性溶液呈綠色，在酸性溶液紫紅色)標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液(0.01摩爾／升。) 600毫升二、試劑一個(gè)學(xué)生做2個(gè)測(cè)定所需藥品數(shù)量72【實(shí)驗(yàn)操作步驟】1、凱氏定氮儀的構(gòu)造和安裝

凱氏定氮儀由蒸汽發(fā)生器、反應(yīng)管及冷凝器三部分組成。蒸氣發(fā)生器包括電爐及一個(gè)1.2升的燒瓶。蒸氣發(fā)生器借橡皮管與反應(yīng)管相連，反應(yīng)管上端有一個(gè)玻璃杯，樣品和堿液可由此加入到反應(yīng)室，反應(yīng)室中心有一長(zhǎng)玻璃管，其上端通過反應(yīng)室外層與蒸氣發(fā)生器相連，下端靠近反應(yīng)室的底部。反應(yīng)室外層下端有一開口，上有一皮管夾，由此可放出冷凝水及反應(yīng)廢液。反應(yīng)產(chǎn)生的氨可通過反應(yīng)室上端細(xì)管及冷凝器通到吸收瓶中，反應(yīng)管及冷凝管之間借磨口連接，防止漏氣。安裝儀器時(shí)，先將冷凝管垂直地固定在鐵架臺(tái)上，冷凝管下端不要距離實(shí)驗(yàn)臺(tái)太近，以免放不下吸收瓶。反應(yīng)管固定在另一鐵架，蒸氣發(fā)生器放在電爐上，安裝完畢不得輕易移動(dòng)?！緦?shí)驗(yàn)操作步驟】1、凱氏定氮儀的構(gòu)造和安裝732、消化(1)稱取飼料樣本0.5克兩份，糞便樣本0.5克兩份，將稱樣紙卷成筒狀，小心無損地將樣本放入100毫升洗凈烘干的凱氏燒瓶中。另取2個(gè)凱氏燒瓶作為對(duì)照，測(cè)定試劑中可能含有的微量物質(zhì)。(2)分別加入硫酸鉀．硫酸銅混合物0.2克，濃硫酸5毫升。再加玻璃珠2粒，以防消化時(shí)液體濺失。(3)在凱氏瓶上加一個(gè)小漏斗，將凱氏燒瓶放在消化架的電爐上加熱。開始加熱時(shí)，先用小火，以免瓶?jī)?nèi)產(chǎn)生大量泡沫，溢出瓶口。等泡沫停止產(chǎn)生后，再加強(qiáng)火力。消化時(shí)經(jīng)常轉(zhuǎn)動(dòng)燒瓶，使全部樣本浸入硫酸內(nèi)。如有黑泡濺在瓶壁，應(yīng)待燒瓶冷卻后加少量蒸餾水沖洗之，再繼續(xù)加熱消化。如有黑炭粒不能全部消化，則待燒瓶冷卻后，補(bǔ)加少量濃硫酸，繼續(xù)加熱，直至瓶?jī)?nèi)溶液澄清呈透明淡綠色為止，消化才告完畢。一般飼料消化需3～4小時(shí)，消化過程中產(chǎn)生SO2，有刺鼻味，故需在毒氣柜中進(jìn)行。(4)燒瓶冷卻后加蒸餾水10毫升，搖勻，然后將燒瓶中溶液無損地移入50毫升容量瓶?jī)?nèi)，用蒸餾水沖洗凱氏燒瓶數(shù)次，洗液亦注入容量瓶中，并以蒸餾水稀釋至刻度，混勻備用。2、消化743、蒸餾(1)蒸餾器的洗滌：蒸氣發(fā)生器中盛有幾滴硫酸酸化的蒸餾水，關(guān)閉皮管夾，將蒸餾發(fā)生器的水燒開，讓蒸氣通過整個(gè)儀器。15分鐘后，在冷凝器下端放一個(gè)盛有5毫升2％硼酸溶液和1.2滴指示液的錐形瓶。冷凝管下端應(yīng)完全浸沒在液體中，繼續(xù)蒸餾1.2分鐘，錐形瓶?jī)?nèi)的溶液如不變色則證明蒸餾器內(nèi)部已洗滌干凈。移開錐形瓶通氣1分鐘，用水沖洗冷凝管口，然后用手涅緊橡皮管，由于反應(yīng)外層蒸氣冷縮，壓力減低，反應(yīng)室凝結(jié)的水可自動(dòng)吸出進(jìn)入，打開皮夾將廢水排出。(2)取50毫升錐形瓶數(shù)個(gè)，各加入5毫升2％硼酸溶液和混合指示劑2滴，置于蒸餾裝置的冷凝管下，使管口浸入硼酸溶液內(nèi)。3、蒸餾75(3)煮沸蒸氣發(fā)生瓶中蒸餾水。用移液管取10毫升消化液，細(xì)心地由凱氏蒸餾裝置上的小玻杯注入反應(yīng)室，將小玻杯棒狀玻璃塞塞緊，使之不漏氣。取10毫升30％的氫氧化鈉溶液注入小玻杯，小心地輕輕提起棒狀玻塞，使氫氧化鈉溶液流入反應(yīng)室，立刻將玻塞蓋緊，加水于小玻杯，使少許水流入反應(yīng)室以洗滌堿液，部分水留于小玻杯，以防漏氣。夾緊外套管出口的橡皮管，開始蒸餾。蒸氣吹入反應(yīng)室，用定時(shí)鐘定時(shí)，使氨氣通過冷凝管流入錐形瓶的硼酸溶液中，此時(shí)錐形瓶中的溶液由紫色變成綠色，蒸餾3-5分鐘，移動(dòng)錐形瓶，使硼酸液面離開冷凝管，繼續(xù)蒸餾1分鐘，并用少許蒸溜水沖洗管口外壁。將錐形瓶移開蒸餾裝置，準(zhǔn)備滴定。(3)煮沸蒸氣發(fā)生瓶中蒸餾水。用移液管取10毫升消化液，細(xì)心76(4)蒸餾完畢后，在小玻杯中加滿蒸餾水，將玻棒提起流入反應(yīng)室中，隨手夾緊橡皮管以斷氣源，于是反應(yīng)室中的殘液自動(dòng)吸入反應(yīng)室外層，如此沖洗4次后將外套管下端出口的橡皮管打開，使反應(yīng)室外層的殘液排出。待殘液排完后，夾緊橡皮管。(5)待樣品和空白消化液蒸餾完畢后，同時(shí)進(jìn)行滴定。(4)蒸餾完畢后，在小玻杯中加滿蒸餾水，將玻棒提起流入反應(yīng)室774、滴定先將微量滴定管準(zhǔn)備妥當(dāng)，用0.01NHCl標(biāo)準(zhǔn)液滴定。瓶中溶液由綠色變成淡紫色為滴定終點(diǎn)。4、滴定78【結(jié)果計(jì)算與方法】

樣本中粗蛋白質(zhì)(N×6.25)含量％

=(V3-V0)×N×0.014克×6.25×(V1/V2)×(100/W)

式中：W=樣本重(克)V1=消化液稀釋容量(毫升)V2=稀釋液蒸餾用量(毫升)V3=滴定樣本餾出液的0.0100NHCI耗量(毫升)V0=滴定試劑空白餾出液的0.0100NHCl耗量(毫升)N=HCI當(dāng)量濃度說明：①系數(shù)6.25是按照每100克粗蛋白質(zhì)含有16克氮計(jì)算而得。②系數(shù)0.014即1毫升1NHCl液相當(dāng)于0.014克氮。③每次測(cè)定樣本時(shí)必須同時(shí)作試劑空白試驗(yàn)?！窘Y(jié)果計(jì)算與方法】樣本中粗蛋白質(zhì)(N×6.25)含量％79【注意事項(xiàng)】1、現(xiàn)時(shí)測(cè)定飼料的粗蛋白質(zhì)含量，多趨向于采用凱氏半微量定氮法，其原因是稱取樣本量不多，耗用試劑量較少，用于樣本消化和蒸餾的時(shí)間較短。本方法適合于畜體、畜產(chǎn)品、糞、尿中粗蛋白質(zhì)的測(cè)定。2、凱氏大量定氮法亦在某些情況下被采用，其原理與凱氏半微量定氮法相同。前法備有凱氏蒸餾架，凱氏燒瓶(常用250毫升或500毫升)中樣本消化完畢后，即可加入200毫升蒸餾水，直接裝置在凱氏蒸餾架上全部蒸餾，不須將凱氏瓶中消化液轉(zhuǎn)移入容量瓶?jī)?nèi)，而后再吸取部分沖淡液進(jìn)行蒸餾等手續(xù)。這是凱氏大量定氮法的優(yōu)越性。這個(gè)方法適用于測(cè)定鮮肉、鮮糞與羊毛中粗蛋白質(zhì)。【注意事項(xiàng)】1、現(xiàn)時(shí)測(cè)定飼料的粗蛋白質(zhì)含量，多趨向于采用凱氏803、硫酸銅為還原催化劑，其反應(yīng)原理如下：2CuS04＋C＋H2S04→Cu2S04＋S02↑＋C02↑

有機(jī)物質(zhì)Cu2S04+2H2S04

→2CuS04+2H20+S02↑3、硫酸銅為還原催化劑，其反應(yīng)原理如下：81【作業(yè)與思考】1公斤飼料中含有25克粗蛋白質(zhì)，則1公斤飼料中含有多少克氮?【作業(yè)與思考】82實(shí)驗(yàn)四Cr203(三氧化二鎘)定量法【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

掌握Cr2O3指示劑的測(cè)定方法。實(shí)驗(yàn)四Cr203(三氧化二鎘)定量法【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?3【實(shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】在一定量的樣本中，加入濃硝酸，經(jīng)硝化產(chǎn)生白色固形物，加入過氯酸氧化后，形成褐色化合物，其顏色的深淺與Cr2O3的濃度成正比，于波長(zhǎng)350nm處測(cè)量光密度?！緦?shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)知識(shí)】在一定量的樣本中，加入濃84【實(shí)驗(yàn)用品】一、實(shí)驗(yàn)器材

一個(gè)學(xué)生作兩個(gè)測(cè)定，所需用量：

◆分光光度計(jì) 一臺(tái)

◆比色管 10支

◆比色架 1個(gè)

◆電爐 1個(gè)

◆凱氏燒瓶 4個(gè)

◆硝酸(比重1．42) 20毫升二、試劑

◆過氯酸(70％) 12毫升

◆Cr2O3 20毫克【實(shí)驗(yàn)用品】一、實(shí)驗(yàn)器材85【實(shí)驗(yàn)操作步驟】

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定。精確稱量5mg分析純Cr2O3，置于100ml凱氏燒瓶中，加濃硝酸5ml，加熱氧化約20min，當(dāng)溶液中產(chǎn)生白色固形物時(shí)，停止加熱。冷卻后，徐徐注3ml過氯酸，加熱使溶液從綠色經(jīng)黃色而急變?yōu)楹稚?，再繼續(xù)加熱l0min，冷卻后以蒸餾水定容至l0ml,作為母液。每毫升含Cr2O3為0.5