關于梅毒實驗室診斷第一頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日“性病”概念的演化性?。菏侵竿ㄟ^性接觸而發(fā)生傳播的一組傳染病。20世紀70年代以前——經典性病（venerealdiseases,VD）包括：梅毒、淋病、軟下疳等1975年，WHO——性傳播疾?。╯exuallytransmitteddiseases,STD）20世紀90年代以后——性傳播感染（sexuallytransmittedinfections,STI），包括：艾滋病、梅毒、淋病、CA、GH等。第二頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日歷史的回顧性病是一個歷史悠久的疾病，多數(shù)認為梅毒是1505年由印度傳入我國廣東嶺南。梅毒是一個曾經廣泛流行的性病，解放初期，估計的性病（主要是梅毒）患者約為1000萬。1954年之后，全國逐漸形成了一個“四級”皮膚性病防治體系。1964年，實現(xiàn)了全國梅毒基本消滅的目標。第三頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日性病死灰復燃上世紀70年代末，改革開放后，——性觀念的改變——性產業(yè)的出現(xiàn)——性生活方式的變化高危人群規(guī)模在不斷的增加，如：暗娼、男男性接觸者、流動人口等。——性病在我國死灰復燃，再度流行。第四頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日現(xiàn)況嚴重的公共衛(wèi)生問題和社會問題；臨床認知水平不夠，實驗室診斷水平參差不齊；實驗室檢測各流程存在不規(guī)范現(xiàn)象；新的實驗室診斷技術不斷出現(xiàn)而又缺乏了解；部分（如私人診所）醫(yī)療工作存在過度診療或診療不規(guī)范，延誤患者的最佳診療時機；無癥狀感染者成為維系性病流行的重要的傳染源。第五頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日如何就目前高發(fā)的性病，尤其是對梅毒進行有效監(jiān)測和控制？如何對高危人群及潛在易感人群進行篩查，主動發(fā)現(xiàn)無癥狀的性病感染者？如何確定感染的病原體種類？——需要完善的實驗室檢測工作，包括檢測能力建設和質量控制第六頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日性病防治工作的重點兩個系統(tǒng)疫情監(jiān)測系統(tǒng)

實驗室檢測系統(tǒng)-實驗室檢測能力和質量控制一個服務規(guī)范化醫(yī)療服務第七頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日第八頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日梅毒的定義梅毒是由密螺旋體之一的梅毒螺旋體引起的一種慢性全身感染性疾病。是傳統(tǒng)的性傳播疾病之一。第九頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日常用梅毒實驗室檢測方法病原學檢測血清學檢測第十頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日病原學檢查的原理螺旋體進入人體后，在皮下黏膜增殖并沿淋巴管至附近的淋巴結經過2~4周的潛伏在感染部位形成硬下疳。數(shù)天至1周后淋巴結腫大。再以后經血液傳播至全身，或孕婦的羊水中都有大量螺旋體的存在。因此，在梅毒病人的硬下疳、扁平濕疣等皮損以及梅毒病人腫大的淋巴結，梅毒孕婦的羊水，都可以采集標本來做此檢查第十一頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日梅毒病原學檢查的應用范圍

及標本采集適用范圍

病人出現(xiàn)的硬下疳、扁平濕疣、腫大的腹股溝淋巴結穿刺液、羊水穿刺液等。標本采集：略第十二頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日梅毒病原學檢查的方法1、暗視野顯微鏡檢查法2、鍍銀染色檢測法3、剛果紅負染色法第十三頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日暗視野檢查法儀器器材1、暗視野顯微鏡2、無菌紗布3、不銹鋼刮刀4、滅菌棉拭子5、滅菌生理鹽水6、載玻片、蓋玻片第十四頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日暗視野檢查法標本收集1、皮膚黏膜組織液2、淋巴液3、羊水第十五頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日暗視野檢查法檢測流程1、制片2、暗視野顯微鏡的使用及觀察第十六頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日暗視野檢查法結果判讀發(fā)現(xiàn)有纖細、白色、有折光的螺旋狀微生物，具有旋轉、蛇行及伸縮等特征性的運動方式，可判斷為梅毒螺旋體報告暗視野顯微鏡下發(fā)現(xiàn)有上述特征的螺旋體報告“發(fā)現(xiàn)蒼白螺旋體”第十七頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日暗視野檢查法臨床意義1、檢測陽性，在臨床上可確證梅毒；2、如未能發(fā)現(xiàn)梅毒螺旋體，不能排除診斷；3、無論暗視野顯微鏡檢查的結果如何，都應進一步進行血清學檢測。第十八頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日鍍銀染色檢查檢測原理梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染成棕黑色，可以從普通高倍顯微鏡下觀察到梅毒螺旋體。第十九頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日鍍銀染色檢查儀器器材1、普通顯微鏡2、加拿大樹膠3、羅吉固定液4、鞣酸媒染劑5、Fontana銀溶液6、無水乙醇7、無菌紗布等取材用品第二十頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日鍍銀染色檢查操作流程1、涂片干燥：自然干燥，不可用火固定；2、固定：2-3分鐘3、洗滌：無水乙醇4、媒染：微加熱、30秒5、銀染：水洗、微加熱、30秒6、鏡檢：水洗待干、封片鏡檢第二十一頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日鍍銀染色檢查結果判讀在顯微鏡下觀察到染成棕褐色的螺旋體狀生物，可判斷為梅毒螺旋體。報告見到染成棕褐色梅毒螺旋體報告陽性結果，否則報告陰性結果。第二十二頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日剛果紅負染色法原理：剛果紅是一種酸堿指示劑在涂有標本的玻片上剛果紅將玻片染色，而螺旋體、細菌、細胞、真菌等生物體形成占位而不著色。再用鹽酸蒸氣將剛果紅的紅色熏成藍色方便觀察。第二十三頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日剛果紅負染色法器材及試劑：1、普通顯微鏡2、1%的剛果紅水溶液、3、濃鹽酸。第二十四頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日剛果紅負染色法結果判讀：

在藍黑色背景中發(fā)現(xiàn)白色纖細的螺旋狀微生物螺距數(shù)量為平均6~14個，可判斷為“蒼白螺旋體”報告

發(fā)現(xiàn)上述特征螺旋體結構微生物，可報告“發(fā)現(xiàn)蒼白螺旋體”第二十五頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日第二十六頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日第二十七頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日第二十八頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日第二十九頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日梅毒血清學檢測分類（1）非梅毒螺旋體抗原血清學試驗 （非特異性梅毒抗體）（2）梅毒螺旋體抗原血清學試驗 （特異性梅毒抗體）第三十頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日非梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理梅毒螺旋體一旦感染人體，在3-4周產生抗類脂質抗原的IgM和IgG的混合抗體（也叫反應素）。未經治療的病人，其血清內的反應素可長期存在。經正規(guī)治療后，反應素可以逐漸減少至轉陰。第三十一頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日非梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理反應素與心磷脂形成抗原抗體反應，卵磷脂可加強心磷脂的抗原性，膽固醇可增強抗原的敏感性。心磷脂、卵磷脂及膽固醇都是醇溶性脂類、遇水形成膠體溶液，膽固醇遇水形成結晶。第三十二頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日非梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理示意圖第三十三頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日非梅毒螺旋體抗原血清學試驗方法包括：（1）快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)（2）甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST)（3）性病研究實驗室試驗（VDRL）所用抗原基本成分是：心磷脂、卵磷脂和膽固醇第三十四頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日VDRL試驗——抗原組成及特點抗原組成：0.03%心磷脂、0.21%卵磷脂、0.90%膽固醇抗原需新鮮配制，不能保存待檢血清需滅活需要在顯微鏡下觀察結果目前主要用于腦脊液檢查，特異性較高是診斷神經梅毒的重要依據(jù)，但檢測陰性不能排除神經梅毒第三十五頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日VDRL試驗—儀器材料1、水平旋轉儀、顯微鏡2、試劑盒：VDRL抗原原液、VDRL緩沖液、抗原滴管及針頭、帶直徑為14mm漆圈的玻璃反應板、VDRL試驗結果判讀用參照涂片3、30ml平底玻璃小瓶、生理鹽水第三十六頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日VDRL試驗—標本采集1、血清：新鮮血清或凍存血清；2、腦脊液：采用腰穿術獲得一般來說，送檢VDRL試驗的腦脊液應采集兩份，一份作腦脊液常規(guī)（白細胞≧10*106/L、蛋白含量＞500mg/L）測定，檢測結果與另一份用作VDRL試驗的腦脊液樣本同時送實驗室。第三十七頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日VDRL試驗—操作步驟1、VDRL抗原配制；2、VDRL玻片定性試驗（1）滅活：血清標本56℃滅活30分鐘；（2）吸樣：吸取0.05ml血清放入反應板圈中，并涂布于整個圈內；（3）加抗原：用標準針頭加入1滴抗原；（4）反應：置水平旋轉儀上旋轉4min，180±5次/min，立即置低倍顯微鏡下觀察。第三十八頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日VDRL試驗—操作步驟3、VDRL定量試驗（1）加稀釋液：在圈內加入0.05ml生理鹽水；（2）樣本稀釋：吸取0.05ml樣本與第一個圈內生理鹽水混合，混勻后，吸取0.05ml加至第二個圈，做系列稀釋，并將稀釋樣本涂布于整個圈內（3）同定性試驗的（3）、（4）。第三十九頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日VDRL試驗—結果判讀凝集反應強度分級：3+——4+：鏡下見中等大小或大的絮狀物，液體清亮；2+：絮狀物較小，液體較清亮；1+：絮狀物較小，均勻分布，液體渾濁；±：抗原復合物顆粒稍粗；：抗原顆粒均勻、細小。定性試驗：鏡下可見1+——4+的絮狀凝集物為陽性，不產生凝集為陰性；定量試驗：鏡下可見絮狀凝集物的樣本最高稀釋倍數(shù)為其滴度。第四十頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日VDRL試驗—臨床意義腦脊液VDRL試驗是神經梅毒的標準試驗，陽性結果可診斷為神經梅毒，但陰性結果不能排除診斷，存在假陰性。第四十一頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日RPR試驗在VDRL試劑成分的基礎上，加入黑色活性碳顆粒，作為凝集的指示物；與待檢血清（漿）中的反應素結合，形成肉眼可見的黑色絮狀物。用白色硬紙片代替玻片；血清不需要滅活；不需要顯微鏡觀察結果可作定性和定量試驗第四十二頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TRUST試驗原理和成分以及操作與RPR試驗相同用紅色的甲苯胺紅替代了活性碳顆粒，在與待檢血清（血漿）中的反應素結合，形成肉眼可見的紅色絮狀物第四十三頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)樣本類型：血清、血漿、腦脊液樣本保存：短期（1周）內進行檢測的可存放于2-8℃；保存一周以上的應置于-20℃以下冰箱保存；長期保存應置于-70℃以下冰箱中保存。第四十四頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)樣本運送：

應按照生物安全要求進行包裝和運送。（1）第一層容器（如試管）（2）第二層容器（3）第三層容器第四十五頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)樣本接收：（1）檢查標本管有無破損和溢漏；（2）核對標本與送檢單；（3）檢查標本的狀況;（4）如標本不能接收，怎么處理？（5）樣本交接應在接收單上雙方簽字確認注意：應把每一份樣本當作強陽性樣本來處置和對待?。〉谒氖?，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)儀器：水平旋轉儀（要求？）試劑盒：（1）含有活性碳的抗原懸液；（2）一個標定的9號針頭（0.9mm）；（3）壓印有18mm直徑圓圈的封塑環(huán)狀卡片；（4）內部對照；為了保證試驗結果的可靠性，以及每批試劑間的可比性，應制備外部對照血清（5）50ul量程移液器和吸頭（6）0.9%無菌生理鹽水第四十七頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)定性試驗（1）試劑準備：復室溫30分鐘（2）加標本：樣本量50ul；（3）加抗原：抗原量（60±1滴/ml，約17ul/滴）（4）反應：反應時間8min（5）讀取結果第四十八頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)定量試驗抗原1滴抗原1滴抗原1滴抗原1滴抗原1滴50ul標本1:1（全血）50ul標本50ulN.S1:250ulN.S1:450ulN.S1:850ulN.S1:16吸取50ul吸取50ul吸取50ul棄掉50ul標本稀釋順序涂布順序第四十九頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)結果判讀判讀凝集反應強度分級：3+-4+：圓圈內出現(xiàn)中到大的黑色絮狀物，液體清亮；2+：圓圈內出現(xiàn)小到中的黑色絮狀物，液體較清亮；1+：圓圈內出現(xiàn)小的黑色絮狀物，液體渾濁；-：圓圈內僅見碳顆粒集于中央一點或均勻分散。第五十頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日第五十一頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)結果報告（1）定性試驗：出現(xiàn)1+-4+強度的凝集反應報告陽性（+）不產生凝集反應報告陰性（-）（2）定量試驗：出現(xiàn)凝集反應的血清最高稀釋倍數(shù)為抗體滴度，結果報告滴度為1：X。也可將每個稀釋度的反應強度依次報告，如1:1（全血）（4+）、1:2（3+）、1:4（2+）、1:8（1+）、1:16（-）。有利于療效觀察第五十二頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)質量控制（1）內部對照：試劑盒含有的陽性質控血清，用于檢查該盒試劑的有效性。新開試劑，以及每天工作開始前或每批試驗開始前，應常規(guī)進行內部對照質控。（2）外部對照：可采取自留陽性標本用作外部對照。新開試劑或更換試劑批次，應同時進行外部對照試驗，用于檢查每批試驗結果的重復性和可比性。第五十三頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)質量控制（3）移液器質量控制：強檢和定期校準；（4）旋轉儀質量控制：檢查轉速；（5）人員的質量控制：有經驗人員的指導下開展工作、雙人核對結果；（6）操作的質量控制：反復操作、正確操作。第五十四頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)臨床意義（1）產生的抗類脂質抗體，未經治療可長期存在；（2）經適當治療后，抗體可以逐漸減少至轉為陰性；（3）定性試驗結果可用于現(xiàn)癥梅毒診斷；（4）定量試驗結果可用于療效觀察及判愈。第五十五頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)梅毒血清反應假陽性

即非梅毒患者的梅毒血清反應呈陽性的現(xiàn)象。（1）技術性假陽性反應由于標本保存不當（如細菌污染或溶血）、試劑質量差或過期、或試驗操作錯誤等所造成。（2）生物學假陽性反應非梅毒螺旋體抗原血清學試驗采用的抗原為脂類混合物，所檢測的抗心磷脂抗體亦可見于其他多種疾病，如自身免疫性疾病、懷孕的婦女，麻風病人。第五十六頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日

王千秋教授等檢測了10546份血清樣本，RPR假陽性率為0.21%（15/7002）。假陽性中：

10例為有高危性行為的常規(guī)檢查者

2例孕婦皮肌炎、尖銳濕疣、龜頭破潰各1例第五十七頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)梅毒血清反應假陽性的處理（1）技術性假陽性反應：實驗前檢查試劑的有效性、重復操作排除人為操作錯誤等；（2）生物學假陽性反應：應做TPPA(TPHA)等試驗進行排除

單一RPR（非特異性抗體血清試驗）結果陽性，不能作為梅毒的確定性診斷試驗結果，需用梅毒螺旋體抗原血清試驗進行確證。第五十八頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)前帶現(xiàn)象指非梅毒螺旋體抗原血清學試驗中，有時血清中存在高濃度的反應素導致抗原抗體濃度不匹配，出現(xiàn)弱陽性、不典型或陰性反應的結果，而臨床上又像早期梅毒（一期和二期），此時將血清稀釋后再進行試驗，可出現(xiàn)陽性結果的現(xiàn)象。

第五十九頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)血清固定

指經抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗在一定時期內不陰轉。早期的血清固定常與治療不足或不規(guī)則治療、復發(fā)、再感染或有神經系統(tǒng)梅毒等因素有關。病期不明的潛伏梅毒患者血清固定發(fā)生率顯著增高，應加強對潛伏梅毒的篩查和及時治療。第六十頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)RPR用于腦脊液的檢測，近年來也有不少研究。有作者在對154例各期梅毒患者及90例非梅毒神經系統(tǒng)疾病患者的腦脊液進行試驗并作統(tǒng)計分析：

RPR腦脊液敏感性為99.1%、特異性為77.8%VDRL腦脊液敏感性為98.6%、特異性為70.4

結論：RPR可以代替VDRL用于神經梅毒的診斷。但是？第六十一頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR)注意事項1、使用無菌生理鹽水；標本無嚴重脂血、溶血和細菌污染2、正確操作，移液器吸頭保證在血清/血漿液面以下但不能接觸反應紙板；防止產生氣泡；3、每批次標本數(shù)量不宜過多，防止干燥或血清水分揮發(fā)，4、實驗前應檢查水平旋轉儀轉速，常規(guī)進行質量控制；5、稀釋后攤開液面是順序應從低濃度向高濃度進行；6、反應完畢應及時觀察結果。第六十二頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗原血清學試驗試驗原理：

以梅毒螺旋體特異蛋白為抗原，檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗呈陽性，則患者幾乎終生陽性。第六十三頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗原血清學試驗試驗方法：（1）梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA）（2）梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）（3）梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）（4）梅毒免疫層析法—梅毒快速檢測（RT）（5）熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）（6）化學發(fā)光免疫分析法（CLIA）（7）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB）第六十四頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TPPA/TPHA

感染梅毒螺旋體后2-4周內，機體會產生特異的梅毒螺旋體抗體。TPPA具有較高的敏感性和特異性。是目前WHO公認的梅毒抗原血清學試驗的金標準。第六十五頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TPPA試驗原理圖第六十六頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TPPA試驗儀器耗材（1）試劑盒“A”溶解液：用于溶解致敏顆?！癈”和非致敏顆粒“D”“B”血清稀釋液：用于血清標本的稀釋“C”凍干的致敏顆?！癉”凍干的非致敏顆粒“E”陽性質控血清：為含梅毒抗體的兔血清制品，最終滴度1:320，（2）微量振蕩器（3）移液器及吸頭（4）保濕盒第六十七頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TPPA試驗檢驗流程（1）試劑準備：試驗前復溫30分鐘（2）加稀釋液（B液）（3）標本稀釋（4）加致敏、未致敏顆粒（5）混合：微量振蕩器震蕩30秒（6）反應：置濕盒，15-30℃至少2小時（7）觀察凝集反應強度第六十八頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TPPA試驗檢驗流程稀釋液100ul標本25ul1:5稀釋液25ul1:10稀釋液25ul1:20稀釋液25ul1:40吸取25ul吸取25ul吸取25ul棄掉25ul未致敏粒子致敏粒子℃第六十九頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TPPA試驗結果判讀首先觀察未致敏粒子反應孔是否出現(xiàn)凝集（第3孔）如出現(xiàn)凝集，則為無效試驗。如無凝集，則根據(jù)致敏粒子反應孔標本與致敏粒子是否產生1+-4+凝集反應，判斷結果。第七十頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TPPA凝集反應分級4+：粒子光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊；3+：粒子光滑覆蓋大部分孔底；2+：粒子光滑聚集覆蓋孔底，周圍有一細胞環(huán)；1+：粒子光滑聚集覆蓋孔子，周圍有一明顯細胞環(huán)；±：粒子沉集孔底，中央形成一小點；—：粒子緊密沉積孔底中央。第七十一頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日第七十二頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TPPA結果報告未致敏粒子反應孔不出現(xiàn)凝集，致敏粒子反應孔出現(xiàn)凝集反應報告陽性（+）；未致敏粒子與致敏粒子反應孔均未出現(xiàn)凝集反應報告陰性（-）第七十三頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TPPA重吸收試驗如標本與非致敏和致敏顆粒均產生凝集者，標本需作重吸收試驗：（1）加0.95ml非致敏顆粒溶液于小試管內；（2）加入0.05ml血清充分混勻，置室溫吸收30分鐘以上；（3）2000r/min離心5分鐘，吸取上清液0.05ml加入第3孔；（4）第4孔加血清稀釋液25ul；（5）孔3吸取25ul至孔4，混勻后棄去25ul；（6）分別加致敏與未致敏顆粒（試驗方法同上）第七十四頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TPPA臨床意義1、特異性高（98%），陽性可確證為現(xiàn)癥或既往感染。2、終生陽性，不能作為療效觀察的指標。3、不能區(qū)分現(xiàn)癥或既往感染。

第七十五頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA）是用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上梅毒血清和酶標記的單克隆羊抗人免疫球蛋白抗體或酶標記的梅毒螺旋體基因重組抗原，形成抗原抗體復合物與酶標記物結合，用酶標儀判定陽性反應?？捎糜诖髽颖镜难鍣z測。

第七十六頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TP-ELISA（雙抗原夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗）試驗原理：是用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上待檢血清或血漿和酶標記的梅毒螺旋體基因重組抗原，形成抗原抗體復合物與酶標記物結合，用酶標儀判定陽性反應。

第七十七頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TP-ELISA（雙抗原夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗）檢測流程：與其他ELISA檢測方法相同，按試劑盒說明書進行對照的設置及檢測。結果判讀及報告：

1、根據(jù)陽性、陰性對照的OD值是否在規(guī)定的數(shù)值范圍內以判斷試驗的有效性，并根據(jù)陽性、陰性OD值設定閾值（cut-off);2、標本OD值大于或等于cut-off值報告陽性，否則報告陰性。

第七十八頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TP-ELISA（雙抗原夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗）

臨床意義：

1、同TPPA，可用于非梅毒螺旋體血清試驗陽性標本的確證試驗；

2、可用于大樣本篩查檢測，但陽性標本需進一步進行非梅毒螺旋體血清試驗復檢，確證是否為梅毒現(xiàn)癥感染者；

3、如對結果存在疑問，可用TPPA或其他方法進行重復檢測。

第七十九頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日關于TP重組抗原

目前已重組的TP抗原20多種，包括：TP15KD、4D、TP24、G17等。G17的反應性比較高，目前的檢測試劑盒趨向于將2種或2種以上重組抗原聯(lián)合使用，綜合其特性，從而獲得更高的特異性和敏感性。第八十頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗體快速免疫層析檢測法（TP-RT）檢測原理：以硝酸纖維素膜為載體，將重組的梅毒螺旋體抗原固定在膜上，待檢標本與標記的梅毒螺旋體特異性抗原結合并沿著固相載體遷移，陽性結果在膜上抗原部位形成重組抗原-特異性抗體-標記的特異性抗原復合物，顯示出有色條帶，可直接判讀結果。

第八十一頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TP-RT檢測流程：全血和血清/血漿標本檢測步驟不一樣，但基本流程為：

1、加樣

2、加緩沖液

3、反應

4、判讀結果第八十二頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TP-RT臨床意義：1、同TPPA、ELISA。可采用全血檢測，適合于單樣本快速篩查；2、簡單、快速，如結果存在疑問，可用TPPA或其他方法進行重復試驗。第八十三頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日TP-RT注意事項：1、如出現(xiàn)無效結果，應再次仔細閱讀說明書，并用新的試條重新測試，如問題仍然存在，應停止使用該批號產品；2、注意試劑盒的儲存條件，以及反應的溫度條件；3、按試劑盒說明書，反應時間應足夠、加樣量也要準確。第八十四頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗原血清學試驗第八十五頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日梅毒螺旋體熒光抗體吸收試驗（FTA-ABS）

檢測原理：以梅毒螺旋體作為抗原，與經吸收劑吸收的梅毒血清抗體反應形成抗原抗體復合物，再加入熒光素（FITC）標記的抗人免疫球蛋白，形成帶有熒光的抗原抗體復合物，在熒光顯微鏡下螺旋體顯出綠色熒光。

第八十六頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日FTA-ABS臨床意義：

FTA-ABS是梅毒螺旋體抗原血清試驗的“金標準”，其臨床意義同TPPA試驗。腦脊液的FTA-ABS試驗陰性可排除神經梅毒，但特異性不高，存在假陽性。操作繁瑣、費時，需要高質量熒光顯微鏡和技術熟練的操作人員，一般不作為常規(guī)臨床實驗室檢測方法。第八十七頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗體化學發(fā)光免疫分析法（CLIA)

檢測原理：利用雙抗原夾心法化學發(fā)光免疫分析原理，采用多種梅毒螺旋體特異抗原包被固相發(fā)光微孔板，用辣根過氧化物酶標記相同蛋白抗原作為標記抗原，與樣本中梅毒螺旋體抗體形成雙抗原夾心復合物后，加入化學發(fā)光底物，測定其發(fā)光值（RLU），根據(jù)cut-off值判斷結果第八十八頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日CLIA儀器耗材

1、化學發(fā)光免疫分析儀；

2、微孔洗板機（全自動系統(tǒng)無需單獨配置）；

3、微量振蕩器（全自動系統(tǒng)無需單獨配置）；

4、恒溫箱：37±1

℃（全自動系統(tǒng)無需單獨配置）；

5、移液器、計時器；

6、新鮮制備的蒸餾水或去離子水；第八十九頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日CLIA結果判讀及報告

根據(jù)化學發(fā)光免疫分析儀測量的發(fā)光值（RLU）自動判讀結果。標本RLU值大于或等于cut-off值，報告陽性；標本RLU值小于cut-off值，報告陰性。CLIA的臨床意義同TPPA\ELISA

2008年有文獻報道，以TPPA作為金標準，其敏感性：94.23%

特異性：98%第九十頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日梅毒IgM抗體檢測

細菌、病毒感染后的早期體液免疫應答反應，結果是IgM抗體的產生，在梅毒螺旋體的感染中也不例外。

IgM抗體出現(xiàn)在感染的潛伏期、早期梅毒患者及晚期病人。

IgM抗體不能通過胎盤屏障及完整無損的血腦屏障，因此：若在新生兒血中檢測到TP-IgM抗體是產前感染的診斷依據(jù)；若在完整無損的血腦屏障的腦脊液中出現(xiàn)，則提示患有活動性神經梅毒。

第九十一頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日梅毒IgM抗體檢測

可采用抗IgM單克隆抗體的酶標法、蛋白印跡法等進行檢測。目前測定IgM抗體的方法的敏感性不高，但檢查到IgM抗體則有助于以下病例的臨床診斷：先天梅毒、早期一期梅毒、晚期梅毒、非梅毒螺旋體抗原血清試驗的抗體陽轉前的早期感染病人的判愈試驗以及有梅毒史或其他螺旋體感染史病人的再感染。第九十二頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日

龔匡隆教授等就現(xiàn)用梅毒血清試驗臨床應用價值進行了評估治療前的敏感度

RPRTPPATP-IgMELISA一期梅毒（硬下疳）83.3%91.7%91.7%二期梅毒100%100%100%早期潛伏梅毒88.9%100%88.9%正規(guī)治療12月后的敏感度

RPRTP-IgMELISA一期梅毒（硬下疳）--二期梅毒64.5%67.7%早期潛伏梅毒43.7%43.7%第九十三頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日先天梅毒的實驗室診斷方法依據(jù)實驗指標診斷查到螺旋體；非梅毒螺旋體抗原血清試驗滴度持續(xù)上升；滴度高于母親4倍（高于2個稀釋滴度）；檢測到抗梅毒的19S-IgM特異性抗體陽性；隨訪18個月觀察抗體的變化（主要是指特異性抗體）。第九十四頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日神經梅毒的實驗室診斷實驗室診斷標準梅毒螺旋體血清學檢測陽性；腦脊液白細胞計數(shù)或蛋白質測定結果異常；腦脊液VDRL試驗陽性；腦脊液檢測到IgM抗體。第九十五頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日檢測方法評價

各種檢測方法在臨床應用中都存在一定的局限性。1、梅毒的臨床診斷：（1）特征性皮損中檢測到梅毒螺旋體；（2）血清中檢測到抗體。2、梅毒的表現(xiàn)非常復雜，感染后可不出現(xiàn)皮損或皮損不明顯，檢測不到抗原；3、感染極早期或窗口期的存在，檢測不到抗體。第九十六頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日檢測方法評價血清學檢測是目前提供診斷依據(jù)的主要的梅毒實驗室檢測方法。1、但檢測腦脊液中的抗體時，VDRL更具有臨床診斷價值。2、對病人進行治療效果的隨訪觀察，需根據(jù)RPR或TRUST定量試驗及抗體滴度的變化進行判斷。3、抗原血清試驗都是檢測特異性梅毒螺旋體抗體。無論采用哪一種梅毒螺旋體抗原抗體檢測方法，都不能代替非梅毒螺旋體抗原血清試驗的臨床意義。第九十七頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日第九十八頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日非梅毒螺旋體抗原血清學試驗結果解釋示意圖治療前治療后陽性：陰性：一期：二期：早期潛伏：晚期潛伏：三期：早期晚期第九十九頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗原血清學試驗結果解釋示意圖治療前治療后陽性：陰性：一期：二期：早期潛伏：晚期潛伏：三期：早期晚期第一百頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日梅毒血清學試驗結果的臨床意義匯總試驗結果主要臨床意義TPPA等RPR等++現(xiàn)癥梅毒或接受過治療的晚期梅毒--排除梅毒感染或極早期梅毒（窗口期）或極晚期-+非梅毒螺旋體抗原血清試驗假陽性+-臨床治愈的早期梅毒（既往感染）或極早期梅毒第一百零一頁，共一百一十二頁，2022年，8月28日應用策略梅毒血清學檢測的目的：臨床診療、血液篩查、流行病學監(jiān)測、高危人群篩查和干預等。無論什么目的，都需要根據(jù)非梅毒螺旋體抗原血清試驗和梅毒螺旋體抗原血清試驗這兩類血清學檢測方法的特性進行結果判斷。第一百零二頁，共一百一十二頁，20