專(zhuān)題整合訓(xùn)練(十五)(本欄目?jī)?nèi)容，在學(xué)生用書(shū)中以獨(dú)立形式分冊(cè)裝訂！)[全員必做題]1．(2019·福建泉州一模)干擾素是一類(lèi)幾乎能抵抗所有病毒的糖蛋白，可利用基因工程技術(shù)進(jìn)行制備。請(qǐng)回答：(1)利用mRNA的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可構(gòu)建________文庫(kù)，進(jìn)而獲得干擾素目的基因，該文庫(kù)不同于基因組文庫(kù)的特點(diǎn)是________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________(答出兩點(diǎn))。(2)將干擾素目的基因?qū)氪竽c桿菌實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化時(shí)，首先應(yīng)用________處理大腸桿菌，使之處于________態(tài)。大腸桿菌剛表達(dá)出的干擾素一般沒(méi)有活性，原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)利用基因工程生產(chǎn)的干擾素在體外往往不易保存，可通過(guò)________________________工程對(duì)其進(jìn)行改造以延長(zhǎng)保存時(shí)間。解析：(1)部分基因文庫(kù)是利用細(xì)胞內(nèi)的mRNA反轉(zhuǎn)錄形成的基因構(gòu)成的，只含有該生物的部分基因，故部分基因文庫(kù)比較小，另外cDNA文庫(kù)是由反轉(zhuǎn)錄形成的，故基因中無(wú)啟動(dòng)子、內(nèi)含子等序列。(2)大腸桿菌作為受體細(xì)胞時(shí)，因其為微生物，故需要采用鈣離子處理大腸桿菌，讓其處于感受態(tài)。大腸桿菌是原核生物，沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等復(fù)雜的細(xì)胞器，無(wú)法對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行加工，故其剛表達(dá)出的干擾素一般沒(méi)有生物活性。(3)蛋白質(zhì)工程可以根據(jù)人們的預(yù)期對(duì)基因進(jìn)行改造，從而生產(chǎn)出符合人們需要的蛋白質(zhì)，對(duì)于不易保存的干擾素，可以采用蛋白質(zhì)工程進(jìn)行改造。答案：(1)cDNA(或部分基因)文庫(kù)較小、基因中沒(méi)有啟動(dòng)子、基因中沒(méi)有內(nèi)含子、只含有某種生物的部分基因、全部基因可在物種間進(jìn)行交流(2)CaCl2(Ca2＋)感受大腸桿菌沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細(xì)胞器，不能對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工(3)蛋白質(zhì)2．(2019·安徽黃山二模)反義基因是通過(guò)產(chǎn)生的mRNA分子，與相關(guān)基因產(chǎn)生的mRNA進(jìn)行互補(bǔ)，來(lái)阻斷非正常蛋白質(zhì)合成。圖1為不同的限制酶及相應(yīng)的切割位點(diǎn)。圖2為科學(xué)實(shí)驗(yàn)中利用小分子量的A反義基因的實(shí)例。據(jù)圖回答下列問(wèn)題：(1)基因工程中，A基因可以用____________(儀器)合成，利用該儀器還可以合成________等。若想將圖2中的A基因反向連接到結(jié)構(gòu)甲中，應(yīng)該用________________限制酶切割A(yù)基因和結(jié)構(gòu)甲。DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，______________________可以“縫合”平末端和黏性末端。(2)用含A反義基因的農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞的原生質(zhì)體后，可用含有________的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。培養(yǎng)一段時(shí)間后，在較高濃度的蔗糖溶液中，觀察細(xì)胞____________________來(lái)鑒別細(xì)胞壁是否再生。(3)導(dǎo)入的A反義基因能轉(zhuǎn)錄A反義RNA，且能與正常RNA互補(bǔ)，抑制A基因表達(dá)過(guò)程中的________。解析：(1)基因工程中，利用化學(xué)方法人工合成目的基因常使用的儀器是DNA合成儀，利用該儀器還可以合成引物(或探針)等。A基因和結(jié)構(gòu)甲都有EcoRⅠ和BamHⅠ的切割位點(diǎn)，切割A(yù)基因，不破壞目的基因，切割結(jié)構(gòu)甲不破壞標(biāo)記基因，故將圖2中的A基因反向連接到結(jié)構(gòu)甲中，應(yīng)該用EcoRⅠ和BamHⅠ限制酶切割A(yù)基因和結(jié)構(gòu)甲。T4DNA連接酶可以“縫合”平末端和黏性末端。(2)結(jié)構(gòu)甲中含有抗生素抗性基因，用含A反義基因的農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞的原生質(zhì)體后，可用含有抗生素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。培養(yǎng)一段時(shí)間后，在較高濃度的蔗糖溶液中，觀察細(xì)胞是否發(fā)生質(zhì)壁分離來(lái)鑒別細(xì)胞壁是否再生。(3)基因的表達(dá)分為轉(zhuǎn)錄和翻譯，翻譯是以mRNA作為模板，氨基酸為原料合成蛋白質(zhì)的過(guò)程，導(dǎo)入的A反義基因能轉(zhuǎn)錄A反義RNA，且能與正常RNA互補(bǔ)，使其不能提供翻譯模板，以抑制A基因的翻譯。答案：(1)DNA合成儀引物(或探針)EcoRⅠ、BamHⅠT4DNA連接酶(2)抗生素是否發(fā)生質(zhì)壁分離(3)翻譯3．(2019·廣東肇慶二模)含有限制酶的細(xì)胞中通常還具有相應(yīng)的甲基化酶，這兩種酶對(duì)DNA分子有相同的作用序列，但具有不同的催化功能。甲基化酶可以對(duì)DNA序列進(jìn)行修飾，使限制酶不能對(duì)這一序列進(jìn)行識(shí)別和切割?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)目前，基因工程中使用的__________________主要是從原核生物中分離純化獲得的。構(gòu)建“基因組文庫(kù)”和“cDNA文庫(kù)”的過(guò)程中需要使用DNA連接酶的是__________________(填“基因組文庫(kù)”“cDNA文庫(kù)”或“基因組文庫(kù)和cDNA文庫(kù)”)。(2)含有某種限制酶的細(xì)胞，可以利用該限制酶切割外源DNA，但不破壞細(xì)胞自身的DNA，其原因可能有①__________________________________________；②________________________________________。(3)利用PCR擴(kuò)增目的基因的過(guò)程由高溫變性(90～95℃)、低溫復(fù)性(55～60℃)、適溫延伸(70～75℃)三個(gè)步驟構(gòu)成一個(gè)循環(huán)，為使得________________酶能夠重復(fù)利用，選用的酶應(yīng)在90～95℃處理后仍然具備催化活性。(4)在PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，為實(shí)現(xiàn)序列中的腺嘌呤被放射性同位素標(biāo)記，反應(yīng)體系中添加的原料應(yīng)包括堿基已被標(biāo)記的________(填“腺嘌呤核糖核苷酸”“dATP”或“ATP”)。解析：(1)基因工程中的限制酶主要是從原核生物中分離純化獲得的。構(gòu)建“基因組文庫(kù)”和“cDNA文庫(kù)”的過(guò)程中都需要利用DNA連接酶將DNA片段與載體連接導(dǎo)入受體菌群而儲(chǔ)存，只不過(guò)兩者使用的DNA片段不同，cDNA文庫(kù)是利用反轉(zhuǎn)錄法獲得的DNA(部分基因)，基因組文庫(kù)使用的是某種生物的全部DNA(全部基因)。(2)原核細(xì)胞自身的DNA分子沒(méi)有該限制酶的識(shí)別序列或者甲基化酶對(duì)細(xì)胞自身的DNA分子進(jìn)行了修飾，這使含有某種限制酶的原核細(xì)胞，可以利用該限制酶切割外源DNA，但不破壞細(xì)胞自身的DNA。(2)PCR擴(kuò)增目的基因的三個(gè)步驟是高溫變性(90～95℃)、低溫復(fù)性(55～60℃)和適溫延伸(70～75℃)，該過(guò)程使用的DNA聚合酶需是熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)。(4)在PCR擴(kuò)增目的基因使用的是dATP、dTTP、dCTP和dGTP。答案：(1)限制酶(或限制性核酸內(nèi)切酶)基因組文庫(kù)和cDNA文庫(kù)(2)①細(xì)胞自身的DNA分子沒(méi)有該限制酶的識(shí)別序列②甲基化酶對(duì)細(xì)胞自身的DNA分子進(jìn)行了修飾(3)熱穩(wěn)定DNA聚合(Taq)(4)dATP4．(2019·河北唐山一模)傳統(tǒng)的人工繁殖蘭花的方法是分株繁殖和用種子播種，隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，人們開(kāi)始采用“組織培養(yǎng)繁殖蘭花”。(1)植物組織培養(yǎng)是在________和人工控制條件下，將________的植物組織、器官、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配制的________上，誘導(dǎo)其產(chǎn)生________、叢芽，最終形成完整植株的過(guò)程。(2)蘭花的葉肉細(xì)胞之所以能培養(yǎng)為新個(gè)體，是因?yàn)榧?xì)胞中含有______________________，具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能，這種潛能叫____________。(3)有人想到利用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)解決蘭花生根速度慢、幼苗生存能力弱的好辦法，但操作后得到的“韭菜—蘭花”，并沒(méi)有預(yù)想中的“繁殖容易，香氣濃郁”，可能的原因是__________________________________________________________________；培育該雜種植物的過(guò)程中，遺傳物質(zhì)的傳遞________(遵循/不遵循)孟德?tīng)栠z傳規(guī)律。解析：本題通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)的原理與技術(shù)的分析，考查考生的科學(xué)思維素養(yǎng)。(1)植物組織培養(yǎng)就是在無(wú)菌和人工控制的條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。(2)蘭花葉肉細(xì)胞中含有本物種的全部遺傳信息，具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能，即具有細(xì)胞全能性，所以蘭花葉肉細(xì)胞能夠培養(yǎng)為新個(gè)體。(3)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)獲得的“韭菜—蘭花”并沒(méi)有預(yù)想中的“繁殖容易，香氣濃郁”，可能是因?yàn)閮蓚€(gè)物種之間的基因相互影響，使某些基因無(wú)法正常表達(dá)；孟德?tīng)栠z傳規(guī)律發(fā)生在減數(shù)分裂過(guò)程中，植物體細(xì)胞雜交技術(shù)過(guò)程中只進(jìn)行有絲分裂，沒(méi)有發(fā)生減數(shù)分裂。答案：(1)無(wú)菌離體培養(yǎng)基愈傷組織(2)本物種的全部遺傳信息細(xì)胞的全能性(3)兩個(gè)物種之間的基因相互影響，導(dǎo)致某些基因無(wú)法正常表達(dá)不遵循5．(2019·河南南陽(yáng)一中模擬)科學(xué)家培育轉(zhuǎn)乳糖分解酶基因奶牛的過(guò)程如圖所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)圖中細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)液成分與植物組織培養(yǎng)基成分最主要的區(qū)別在于前者含有________。在進(jìn)行細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí)會(huì)出現(xiàn)________________________和細(xì)胞接觸抑制現(xiàn)象。為了防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)菌的污染，可向培養(yǎng)液中加入適量的________________。(2)圖中將乳糖分解酶基因?qū)肱咛コ衫w維細(xì)胞中，最常用的方法是________________________________________________________________________。(3)圖中的核移植操作需要將進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)獲得的供體細(xì)胞的細(xì)胞核注入去核的卵母細(xì)胞中，去掉卵母細(xì)胞細(xì)胞核的目的是________________________________________________________________________。而所用的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞，原因是________________________________________________________________________。(4)重組細(xì)胞2在培養(yǎng)液中培養(yǎng)成的重組胚胎移入受體母牛體內(nèi)會(huì)生出與圖中的黑白花奶牛性狀并不完全相同的犢牛，原因可能有______________________________________________________________________________________________________________(至少答出兩點(diǎn))。(5)轉(zhuǎn)乳糖分解酶基因奶牛的培育成功，說(shuō)明了動(dòng)物的______________________具有全能性。解析：本題通過(guò)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)等的原理與技術(shù)的分析，考查考生的科學(xué)思維素養(yǎng)。(1)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的合成培養(yǎng)基中，通常需加入動(dòng)物的血清等天然成分，為動(dòng)物細(xì)胞提供多種可促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的物質(zhì)。在進(jìn)行細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí)會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)和細(xì)胞接觸抑制現(xiàn)象。向培養(yǎng)液中加入適量的抗生素，可以防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)菌的污染。(2)將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法。(3)核移植過(guò)程中，去掉卵母細(xì)胞細(xì)胞核的目的是保證克隆動(dòng)物的核遺傳物質(zhì)幾乎全部來(lái)自供體細(xì)胞的細(xì)胞核。原代培養(yǎng)10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞能保持正常的二倍體核型，因此所用的供體細(xì)胞一般都選用原代培養(yǎng)10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞。(4)生物的性狀由遺傳物質(zhì)和環(huán)境因素共同控制，生物的遺傳物質(zhì)主要存在于細(xì)胞核中，少數(shù)存在于細(xì)胞質(zhì)中，胚胎成纖維細(xì)胞的遺傳物質(zhì)有近一半來(lái)自配種的公牛等，因此重組細(xì)胞2在培養(yǎng)液中培養(yǎng)成的重組胚胎移入受體母牛體內(nèi)會(huì)生出與圖中的黑白花奶牛性狀并不完全相同的犢牛。(5)將供體細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中，形成重組細(xì)胞2。重組細(xì)胞2培養(yǎng)成重組胚胎并最終發(fā)育成個(gè)體，說(shuō)明動(dòng)物的細(xì)胞核具有全能性。答案：(1)血清細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)抗生素(2)顯微注射法(3)保證克隆動(dòng)物的遺傳物質(zhì)幾乎全部來(lái)自供體細(xì)胞的細(xì)胞核傳代10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞能保持正常的二倍體核型(4)生物的性狀受細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)共同控制、生物的性狀還受環(huán)境因素的影響、胚胎成纖維細(xì)胞的遺傳物質(zhì)有近一半來(lái)自配種的公牛等(5)細(xì)胞核6．(2019·江西上饒中學(xué)開(kāi)學(xué)檢測(cè))如圖表示兩種制備單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)方案。已知調(diào)控細(xì)胞增殖的基因在骨髓瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，回答相關(guān)問(wèn)題：(1)體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的條件有無(wú)菌無(wú)毒、營(yíng)養(yǎng)條件、______________和____________。(2)若圖1中A是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，則B細(xì)胞是取自____________________________動(dòng)物體內(nèi)的B細(xì)胞，促進(jìn)d過(guò)程的常用誘導(dǎo)劑是________________________________。(3)利用圖1制備單克隆抗體的方法中制備的原理是細(xì)胞膜流動(dòng)性和________。(4)圖2以細(xì)胞核移植技術(shù)制備單克隆抗體，a為去核的________細(xì)胞，e是從d中分離出的胚胎干細(xì)胞，V過(guò)程類(lèi)似于植物組織培養(yǎng)中的________過(guò)程。(5)單克隆抗體作為診斷試劑的優(yōu)點(diǎn)是________________________________________________________________________。解析：本題通過(guò)兩種制備單克隆抗體方案的對(duì)比分析，考查考生的科學(xué)思維素養(yǎng)。(1)動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)的條件除無(wú)菌無(wú)毒、營(yíng)養(yǎng)條件外，還需要適宜的溫度和pH，需要一定的氣體環(huán)境(5%的二氧化碳，95%的空氣)。(2)若圖1中A是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，則B細(xì)胞是從注射過(guò)特定抗原蛋白的動(dòng)物中取出的B細(xì)胞，經(jīng)過(guò)特定抗原的刺激，對(duì)應(yīng)的B細(xì)胞就能產(chǎn)生對(duì)應(yīng)的特異性抗體，促進(jìn)d動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程的常用誘導(dǎo)劑是聚乙二醇(PEG)或滅活的病毒。(3)圖1表示通過(guò)細(xì)胞融合獲得了雜交瘤細(xì)胞，要獲得更多的抗體需要將雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)增殖。這種方法制備單克隆抗體需經(jīng)過(guò)細(xì)胞融合獲得雜交瘤細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)兩個(gè)階段，兩個(gè)階段的原理分別是細(xì)胞膜流動(dòng)性和細(xì)胞增殖。(4)骨髓瘤細(xì)胞具有無(wú)限增殖能力，且調(diào)控細(xì)胞增殖的基因在其細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，而圖2是借助核移植技術(shù)制備單克隆抗體，所以a為去核的骨髓瘤細(xì)胞。e是從d所示的早期胚胎中分離出的胚胎干細(xì)胞，通過(guò)V過(guò)程的培養(yǎng)得到的特定細(xì)胞f能分泌抗體，因此V過(guò)程類(lèi)似于植物組織培養(yǎng)中的再分化過(guò)程。(5)由于單克隆抗體具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、可大量制備的特點(diǎn)，所以單克隆抗體作為診斷試劑的優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速。答案：(1)溫度和pH氣體環(huán)境(2)注射過(guò)特定抗原蛋白聚乙二醇(PEG)或滅活的病毒(3)細(xì)胞增殖(4)骨髓瘤再分化(5)準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速[重點(diǎn)選做題]1．(2019·廣東惠州三模)據(jù)報(bào)道，世界首例基因編輯嬰兒——“露露”和“娜娜”于2018年11月在中國(guó)健康誕生，她們的基因已經(jīng)經(jīng)過(guò)人為修飾，能夠天然抵抗艾滋病?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)目前艾滋病治療采用的“雞尾酒療法”是通過(guò)三種或三種以上的抗病毒藥物聯(lián)合使用來(lái)治療艾滋病的，________________能抑制病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄成DNA。研究人員發(fā)現(xiàn)，能防止艾滋病病毒攜帶者轉(zhuǎn)化為艾滋病患者的強(qiáng)力藥物會(huì)損害病人體內(nèi)細(xì)胞儲(chǔ)存葡萄糖的能力，從而可能引發(fā)______________病。(2)研究人員使用CRISPR基因編輯技術(shù)來(lái)修飾人類(lèi)胚胎基因，在此過(guò)程使用的工具酶有____________________和________________。該基因編輯嬰兒孕育過(guò)程中使用了____________________________________等生物技術(shù)。(3)目前國(guó)際上普遍不贊同對(duì)健康胚胎進(jìn)行基因編輯，請(qǐng)你談?wù)劺碛桑篲_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________(談出一條即可)。解析：(1)抑制病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄成DNA的物質(zhì)可以是逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。若某強(qiáng)力藥物會(huì)損害病人體內(nèi)細(xì)胞儲(chǔ)存葡萄糖的能力，會(huì)使血液中的葡萄糖無(wú)法降低而可能引發(fā)糖尿病。(2)使用CRISPR基因編輯技術(shù)來(lái)修飾人類(lèi)胚胎基因過(guò)程中使用的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)和DNA連接酶。需采用試管嬰兒技術(shù)獲得基因編輯嬰兒，試管嬰兒孕育過(guò)程中使用了體外受精、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等生物技術(shù)。(3)對(duì)健康胚胎進(jìn)行基因編輯是不理智的，違反倫理的；基因編輯后她們的全身基因組可能造成突變；艾滋病病毒的高變性，基因編輯技術(shù)也無(wú)法完全阻斷艾滋病病毒感染，因此國(guó)際上普遍不贊同對(duì)健康胚胎進(jìn)行基因編輯。答案：(1)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑糖尿(2)限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)DNA連接酶體外受精、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植(3)對(duì)健康胚胎進(jìn)行基因編輯是不理智的，違反倫理的；基因編輯后她們的全身基因組可能造成突變；艾滋病病毒的高變性，基因編輯技術(shù)也無(wú)法完全阻斷艾滋病病毒感染2．菊天牛是菊花的主要害蟲(chóng)之一，為達(dá)到防治目的，科研人員通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了抗蟲(chóng)菊花。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)可用____________處理土壤農(nóng)桿菌，使其處于____________以便吸收重組質(zhì)粒。(2)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌的目的是利用農(nóng)桿菌能夠______________________________的特點(diǎn)，使目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞中，并插入菊花細(xì)胞的____________上，最終形成轉(zhuǎn)基因植株。(3)用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，需根據(jù)______________________的脫氧核苷酸序列設(shè)計(jì)特異引物，以________________________為模板進(jìn)行第一輪擴(kuò)增。(4)將轉(zhuǎn)基因菊花嫩莖及葉片與人工飼料以適當(dāng)比例混合后飼喂菊天牛2齡幼蟲(chóng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示：組別實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)基因植株2對(duì)照組死亡率(%)轉(zhuǎn)基因植株153.3360.0013.33①對(duì)照組應(yīng)飼喂等量的________菊花嫩莖及葉片與人工飼料的混合物。②據(jù)表分析，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組________差異顯著，說(shuō)明轉(zhuǎn)基因菊花對(duì)菊天牛2齡幼蟲(chóng)有較強(qiáng)的毒殺作用。解析：(1)通常用Ca2＋處理細(xì)菌，使之處于感受態(tài)以便吸收重組質(zhì)粒。(2)根據(jù)農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的TDNA可以整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上的特點(diǎn)，通常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的染色體DNA上，最終形成轉(zhuǎn)基因植株。(3)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，需要根據(jù)目的基因的脫氧核苷酸序列設(shè)計(jì)特異引物，同時(shí)利用含有目的基因的DNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增。(4)①實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)遵循對(duì)照原則、單一變量原則和等量原則等，因此對(duì)照組應(yīng)該加入等量的非轉(zhuǎn)基因菊花嫩莖及葉片與人工飼料的混合物。②根據(jù)實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組的死亡率高，說(shuō)明轉(zhuǎn)基因菊花對(duì)菊天牛2齡幼蟲(chóng)有較強(qiáng)的毒殺作用。答案：(1)Ca2＋(或CaCl2)感受態(tài)(2)將TDNA轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞染色體DNA(3)抗蟲(chóng)基因(或目的基因)轉(zhuǎn)基因菊花的DNA(或含目的基因的菊花DNA)(4)非轉(zhuǎn)基因死亡率3．(2019·廣東肇慶一模)“不務(wù)正業(yè)”的化學(xué)諾貝爾獎(jiǎng)又頒給了生物學(xué)，2018年10月3日，諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)授予了格雷戈里·溫特(GregoryP．Winter)等3位科學(xué)家，以表彰他們?cè)诿傅亩ㄏ蜻M(jìn)化，肽類(lèi)和噬菌體展示技術(shù)等方面的成績(jī)。噬菌體展示技術(shù)是將外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，使外源基因隨外殼蛋白的表達(dá)而表達(dá)，同時(shí)，外源蛋白隨噬菌體的重新組裝而展示到噬菌體表面的生物技術(shù)。請(qǐng)根據(jù)材料回答下列問(wèn)題：(1)T2噬菌體的遺傳物質(zhì)是______________，如噬菌體外殼蛋白展示胰島素蛋白原，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，胰島素基因前還要插入________________________________________________________________________。(2)將外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因中，需要用到的工具酶有__________________。噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因用EcoRⅠ切割后產(chǎn)生的片段如圖：圖示末端為_(kāi)_______________，為使外源蛋白DNA序列能與其相連，外源蛋白DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種酶切割，該酶必須具有的特點(diǎn)是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)從物質(zhì)基礎(chǔ)來(lái)看，不同生物之間能夠進(jìn)行基因重組，原因是________________________________________________________________________。(4)雷格戈里·溫特發(fā)明了“擬人化”和全擬人化的噬菌體展示技術(shù)，并開(kāi)發(fā)了制造人源化抗體以及在細(xì)菌中重組表達(dá)人源抗體的技術(shù)，這一技術(shù)解決了單克隆抗體傳統(tǒng)的制備過(guò)程中需要將______________和____________________相融合的需求。單克隆抗體常應(yīng)用于分子靶向治療，其特點(diǎn)是________________________________________________________________________。解析：本題考查基因工程的綜合應(yīng)用，屬于對(duì)科學(xué)思維和社會(huì)責(zé)任要素的考查。(1)T2噬菌體是一種DNA病毒，其遺傳物質(zhì)是DNA。如噬菌體外殼蛋白展示胰島素蛋白原，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，胰島素基因前還要插入該基因的啟動(dòng)子。(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA和運(yùn)載體，其次還需要用DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA。EcoRⅠ切割后產(chǎn)生的末端為黏性末端。為使外源蛋白DNA序列能與其相連，外源蛋白DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種酶切割，但該酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的應(yīng)相同，否則無(wú)法連接。(3)不同生物之間能夠進(jìn)行基因重組的原因是DNA都是由四種脫氧核苷酸組成的。(4)單克隆抗體傳統(tǒng)的制備過(guò)程中需要將骨髓瘤細(xì)胞和已免疫的效應(yīng)B細(xì)胞相融合。單克隆抗體的特點(diǎn)是：特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備。答案：(1)DNA(胰島素基因)啟動(dòng)子(2)限制酶和DNA連接酶黏性末端切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的相同(3)DNA都是由四種脫氧核苷酸組成的(4)骨髓瘤細(xì)胞已免疫的效應(yīng)B細(xì)胞特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備4．(2018·安徽宣城二模)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用大大提高了動(dòng)植物的品質(zhì)，如圖是綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬培育示意圖，據(jù)圖和材料回答下列問(wèn)題：(1)過(guò)程①需要的工具酶有________________________。綠色熒光蛋白基因需要導(dǎo)入成纖維細(xì)胞的____________上才有可能培育出綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬。(2)豬胎兒成纖維細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，為了防止培養(yǎng)過(guò)程中的污染，通常還要在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的________________________________________________________________________。(3)通過(guò)過(guò)程⑤將早期胚胎移植到受體母豬體內(nèi)能存活的原因是________________________________________________________________________。(4)若是想在短期內(nèi)獲得更多的相同的綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬該如何做？________________________________________________________________________。(5)科學(xué)家將反義F3H序列導(dǎo)入康乃馨中，降低了植株中F3H基因的表達(dá)量和酶活性，封鎖了花青素合成途徑，獲得花香物質(zhì)苯甲酸的釋放量大大增加的轉(zhuǎn)基因康乃馨。以上說(shuō)明目的基因除了是編碼蛋白質(zhì)的基因，還可以是________________。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用的方法是____________________。解析：(1)圖中①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，②表示超數(shù)排卵處理，③是核移植過(guò)程，④是早期胚胎培養(yǎng)，⑤是胚胎移植過(guò)程，最后通過(guò)妊娠分娩獲得綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬。構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要的工具酶有限制酶和DNA連接酶。綠色熒光蛋白基因需要導(dǎo)入成纖維細(xì)胞的染色體DNA上才有可能培育出綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬。(2)豬胎兒成纖維細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)液中通常加入抗生素的目的是防止培養(yǎng)液被污染，培養(yǎng)液含有葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等。(3)早期胚胎移植時(shí)，受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為胚胎在受體母豬體內(nèi)存活提供了可能。(4)來(lái)自同一胚胎的后代具有相同的遺傳物質(zhì)，所以將早期胚胎進(jìn)行胚胎分割移植可以獲得更多相同的綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬。(5)科學(xué)家將反義F3H序列導(dǎo)入康乃馨中，降低了植株中F3H基因的表達(dá)量和酶活性，封鎖了花青素合成途徑，獲得花香物質(zhì)苯甲酸的釋放量大大增加的轉(zhuǎn)基因康乃馨。以上說(shuō)明目的基因除了是編碼蛋白質(zhì)的基因，還可以是調(diào)控作用因子。因?yàn)閷?dǎo)入的對(duì)象是植物細(xì)胞，而土壤農(nóng)桿菌易侵染植物細(xì)胞，故一般用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。答案：(1)限制酶和DNA連接酶染色體DNA(2)抗生素(3)受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)(4)對(duì)早期胚胎進(jìn)行分割移植(5)調(diào)控作用因子農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法5．現(xiàn)代生物科技日新月異，請(qǐng)據(jù)圖回答：(1)圖中的prG、生長(zhǎng)激素基因都是目的基因，可從基因文庫(kù)或cDNA文庫(kù)獲得后，常用________技術(shù)擴(kuò)增。擴(kuò)增后，如何鑒定其化學(xué)本質(zhì)，請(qǐng)簡(jiǎn)要寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路。________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)獲得轉(zhuǎn)生長(zhǎng)激素基因牛的核心步驟是________________________________________________________________________，過(guò)程通常用________法把目的基因?qū)胧芫眩贿^(guò)程③若要得到兩頭基因型一樣的牛，可在________________階段采用胚胎分割技術(shù)獲得。(3)將prG導(dǎo)入漿細(xì)胞制備單克隆抗體，應(yīng)進(jìn)行多次專(zhuān)一性抗體檢測(cè)，Ⅰ到Ⅱ間檢測(cè)篩選的目的是______________________________________________________________。(4)簡(jiǎn)述⑤的培養(yǎng)流程：______________________________________________________________________________________________________________________