第三章酶學(xué)

主要內(nèi)容：介紹酶的概念、作用特點和分類、命名，討論酶的結(jié)構(gòu)特征和催化功能以及酶專一性及高效催化的策略，進(jìn)而討論影響酶作用的主要因素和重要的酶類。對酶工程和酶的應(yīng)用作一般介紹。思考第三章酶◆第一節(jié)通論◆第二節(jié)酶的命名及分類◆第三節(jié)酶的結(jié)構(gòu)及催化作用機(jī)制◆第四節(jié)酶促反應(yīng)的速度和影響因素◆第五節(jié)幾種重要的酶◆第六節(jié)酶工程簡介第一節(jié)通論一、酶學(xué)研究的歷史二、酶的概念及作用特點第二節(jié)酶的命名及分類一

、酶的命名二、酶的分類三、酶的組成分類第三節(jié)酶的結(jié)構(gòu)及催化作用機(jī)制一、酶分子的結(jié)構(gòu)特點二、酶催化作用機(jī)制第四節(jié)、酶促反應(yīng)的速度和影響因素一、酶促反應(yīng)速度二、底物濃度對酶促反應(yīng)速度的影響三、酶濃度對反應(yīng)速度的影響四.

pH對酶反應(yīng)速度的影響五、溫度對酶反應(yīng)速度的影響六、抑制劑對酶反應(yīng)速度的影響七、激活劑的影響八、

酶活力單位九、酶催化反應(yīng)的某些缺點第一節(jié)通論一、酶學(xué)研究的歷史1、19世紀(jì)中葉對發(fā)酵本質(zhì)的探討：

19世紀(jì)30年代Pasteur：發(fā)酵是酵母細(xì)胞活動的結(jié)果。(活體酶)1897年Büchner兄弟：用酵母提取液實現(xiàn)發(fā)酵,獲得了1907年的諾貝爾化學(xué)獎。2、關(guān)于酶的化學(xué)本質(zhì)的認(rèn)識：1926J.BSumner：首次從刀豆中得到脲酶結(jié)晶，并證明其化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)。1982ThomasRCech從四膜蟲發(fā)現(xiàn)rRNA的自身催化作用，并提出了核酶（ribozyme）的概念。3、酶促動力學(xué)Michaelis

和Menton1913年米氏學(xué)說。鄒承魯20世紀(jì)60年代初，提出酶蛋白必需基團(tuán)的化學(xué)修飾和活性喪失的定量關(guān)系公式和確定必需基團(tuán)數(shù)的方法，分別被稱為“鄒氏公式”、“鄒氏作圖法”。80年代末還提出了酶活性部位的柔性學(xué)說。

4.酶的名稱1878年,Kühne提出enzyme一詞,“在酵母中”1898年,Duclaux提出用后綴“

ase”表示酶二、酶的概念及作用特點（一）、概念酶是活細(xì)胞產(chǎn)生的一類具有催化功能的生物分子，所以又稱為生物催化劑Biocatalysts

。絕大多數(shù)的酶都是蛋白質(zhì)。酶催化的生物化學(xué)反應(yīng)，稱為酶促反應(yīng)Enzymaticreaction。在酶的催化下發(fā)生化學(xué)變化的物質(zhì)，稱為底物substrate。（二）、酶的作用特點1.酶和一般催化劑的共性用量少而催化率高。它能夠改變化學(xué)反應(yīng)的速度，但是不能改變化學(xué)反應(yīng)平衡。酶本身在反應(yīng)前后也不發(fā)生變化。酶能夠穩(wěn)定底物形成的過渡狀態(tài)，降低反應(yīng)的活化能，從而加速反應(yīng)的進(jìn)行。2.酶催化作用特性

1．高效性酶的催化作用可使反應(yīng)速度提高106-1012倍。例如：過氧化氫分解

2H2O2

2H2O+O2用Fe+催化，效率為6*10-4

mol/mol.S，而用過氧化氫酶催化，效率為6*106mol/mol.S。用-淀粉酶催化淀粉水解，1克結(jié)晶酶在65C條件下可催化2噸淀粉水解。2．專一性（Specificity）酶的專一性又稱為特異性，是指酶只能催化一種底物或一類結(jié)構(gòu)相似的底物，酶對所催化底物嚴(yán)格的選擇特性為酶的專一性。酶作用的專一性包括結(jié)構(gòu)專一性立體異構(gòu)專一性族（基團(tuán)、鍵）專一性絕對專一性光學(xué)異構(gòu)專一性幾何異構(gòu)專一性酶作用的專一性基團(tuán)、鍵專一性：可作用于一類或一些結(jié)構(gòu)很相似的底物。RCOO-+ROH+H+′酯酶：R—C—O—R′+H2OOOCH2OHOHOHOH15α-葡萄糖苷酶OR+H2OOCH2OHOHOHOHOH15+ROH絕對專一性：只能作用于某一底物。脲酶：H2N—C—NH2+H2OO2NH3+CO2酶作用專一性的機(jī)制酶分子活性中心部位，一般都含有多個具有催化活性的手性中心，這些手性中心對底物分子構(gòu)型取向起著誘導(dǎo)和定向的作用，使反應(yīng)可以按單一方向進(jìn)行。酶能夠區(qū)分對稱分子中等價的潛手性基團(tuán)。(1)“三點結(jié)合”的催化理論認(rèn)為酶與底物的結(jié)合處至少有三個點，而且只有一種情況是完全結(jié)合的形式。只有這種情況下，不對稱催化作用才能實現(xiàn)。（2）鎖鑰學(xué)說：認(rèn)為整個酶分子的天然構(gòu)象是具有剛性結(jié)構(gòu)的，酶表面具有特定的形狀。酶與底物的結(jié)合如同一把鑰匙對一把鎖一樣（3）誘導(dǎo)契合學(xué)說該學(xué)說認(rèn)為酶表面并沒有一種與底物互補(bǔ)的固定形狀，而只是由于底物的誘導(dǎo)才形成了互補(bǔ)形狀.3．反應(yīng)條件溫和酶促反應(yīng)一般在pH5-8水溶液中進(jìn)行，反應(yīng)溫度范圍為20-40C。高溫或其它苛刻的物理或化學(xué)條件，將引起酶的失活。4.酶活力可調(diào)節(jié)控制如抑制劑調(diào)節(jié)、共價修飾調(diào)節(jié)、反饋調(diào)節(jié)、酶原激活及激素控制等。5.某些酶催化活力與輔酶、輔基及金屬離子有關(guān)。第二節(jié)酶的命名及分類一酶的命名1、習(xí)慣命名法:（1）根據(jù)其催化底物來命名；如：淀粉酶（2）根據(jù)所催化反應(yīng)的性質(zhì)來命名；如：轉(zhuǎn)氨酶。（3）結(jié)合上述兩個原則來命名，如：谷丙轉(zhuǎn)氨酶。（4）有時在這些命名基礎(chǔ)上加上酶的來源或其它特點。小牛小腸堿性磷酸酶。2、國際系統(tǒng)命名法系統(tǒng)名稱包括底物名稱、構(gòu)型、反應(yīng)性質(zhì)，最后加一個酶字。例如：習(xí)慣名稱:谷丙轉(zhuǎn)氨酶系統(tǒng)名稱:丙氨酸：-酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶酶催化的反應(yīng):谷氨酸+丙酮酸

-酮戊二酸+丙氨酸二、酶的分類1.氧化還原酶類Oxido-reductases氧化-還原酶催化氧化-還原反應(yīng)。主要包括脫氫酶(dehydrogenase)和氧化酶(Oxidase)。

如，乳酸(Lactate)脫氫酶催化乳酸的脫氫反應(yīng)。2、轉(zhuǎn)移酶Transferase轉(zhuǎn)移酶催化基團(tuán)轉(zhuǎn)移反應(yīng)，即將一個底物分子的基團(tuán)或原子轉(zhuǎn)移到另一個底物的分子上。

例如，谷丙轉(zhuǎn)氨酶催化的氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)。3、水解酶hydrolase水解酶催化底物的加水分解反應(yīng)。主要包括淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等。例如，脂肪酶(Lipase)催化的脂的水解反應(yīng)：4、裂合（裂解）酶類Lyase主要包括醛縮酶、水化酶（脫水酶）及脫氨酶等。裂合酶催化從底物分子中移去一個基團(tuán)或原子而形成雙鍵的反應(yīng)及其逆反應(yīng)。例如，蘋果酸裂合酶即延胡索酸水合酶催化的反應(yīng)。5、異構(gòu)酶Isomerase異構(gòu)酶催化各種同分異構(gòu)體的相互轉(zhuǎn)化，即底物分子內(nèi)基團(tuán)或原子的重排過程。

例如，6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶催化的反應(yīng)。6、合成酶LigaseorSynthetase合成酶，又稱為連接酶，能夠催化C-C、C-O、C-N以及C-S鍵的形成反應(yīng)。這類反應(yīng)必須與ATP分解反應(yīng)相互偶聯(lián)。A+B+ATP+H-O-H===A—B+ADP+Pi例如，丙酮酸羧化酶催化的反應(yīng)。丙酮酸+CO2草酰乙酸乳酸脫氫酶

EC1.1.1.27第1大類，氧化還原酶第1亞類，氧化基團(tuán)CHOH第1亞亞類，H受體為NAD+該酶在亞亞類中的流水編號三、酶的組成分類蛋白質(zhì)部分：酶蛋白(apoenzyme)輔助因子(cofactor)

金屬離子小分子有機(jī)化合物全酶(holoenzyme)根據(jù)酶的組成情況，可以將酶分為兩大類：單純蛋白酶：它們的組成為單一蛋白質(zhì).結(jié)合蛋白酶：某些酶，例如氧化-還原酶等，其分子中除了蛋白質(zhì)外，還含有非蛋白組分.結(jié)合蛋白酶的蛋白質(zhì)部分稱為酶蛋白，非蛋白質(zhì)部分包括輔酶及金屬離子(或輔因子cofactor)。酶蛋白與輔助成分組成的完整分子稱為全酶。單純的酶蛋白無催化功能輔助因子分類（按其與酶蛋白結(jié)合的緊密程度）

輔酶

(coenzyme):與酶蛋白結(jié)合疏松，可用透析或超濾的方法除去。

輔基

(prostheticgroup):與酶蛋白結(jié)合緊密，不能用透析或超濾的方法除去。第三節(jié)酶的結(jié)構(gòu)及催化作用機(jī)制活性部位：酶分子中直接與底物結(jié)合，并和酶催化作用直接有關(guān)的部位。必需基團(tuán)：這些基團(tuán)若經(jīng)化學(xué)修飾使其改變，則酶的活性喪失。必需基團(tuán)活性部位維持酶的空間結(jié)構(gòu)結(jié)合基團(tuán)催化基團(tuán)專一性催化性質(zhì)一、酶分子的結(jié)構(gòu)特點活性中心

必需基團(tuán)活性部位酶的結(jié)構(gòu)

活性中心以外的必需基團(tuán)

其它部分

1．結(jié)合部位Bindingsite結(jié)合部位Bindingsite酶分子中與底物結(jié)合的部位或區(qū)域一般稱為結(jié)合部位。2．催化部位catalyticsite酶分子中促使底物發(fā)生化學(xué)變化的部位稱為催化部位。通常將酶的結(jié)合部位和催化部位總稱為酶的活性部位或活性中心。結(jié)合部位決定酶的專一性，催化部位決定酶所催化反應(yīng)的性質(zhì)。酶活性中心的必需基團(tuán)主要包括：親核性基團(tuán)：絲氨酸的羥基半胱氨酸的巰基組氨酸的咪唑基。酸堿性基團(tuán)：門冬氨酸和谷氨酸的羧基賴氨酸的氨基酪氨酸的酚羥基組氨酸的咪唑基和半胱氨酸的巰基等。酶活性中心的必需基團(tuán)主要包括：親核性基團(tuán)：絲氨酸的羥基半胱氨酸的巰基組氨酸的咪唑基。酸堿性基團(tuán)：門冬氨酸和谷氨酸的羧基賴氨酸的氨基酪氨酸的酚羥基組氨酸的咪唑基和半胱氨酸的巰基等。底物活性中心以外的必需基團(tuán)結(jié)合基團(tuán)催化基團(tuán)活性中心

溶菌酶的活性中心*谷氨酸35和天冬氨酸52是催化基團(tuán)；*色氨酸62和63、天冬氨酸101和色氨酸108是結(jié)合基團(tuán)；*A~F為底物多糖鏈的糖基，位于酶的活性中心形成的裂隙中。3．調(diào)控部位Regulatorysite酶分子中存在著一些可以與其他分子發(fā)生某種程度的結(jié)合的部位，從而引起酶分子空間構(gòu)象的變化，對酶起激活或抑制作用。二、酶催化作用機(jī)制1、中間產(chǎn)物學(xué)說

在酶催化的反應(yīng)中，第一步是酶與底物形成酶－底物中間復(fù)合物。當(dāng)?shù)孜锓肿釉诿缸饔孟掳l(fā)生化學(xué)變化后，中間復(fù)合物再分解成產(chǎn)物和酶。

E+S====E-SP+E

許多實驗事實證明了E－S復(fù)合物的存在。E－S復(fù)合物形成的速率與酶和底物的性質(zhì)有關(guān)。2.

活化能降低酶促反應(yīng)：E+S===ES===ES

EPE+P反應(yīng)方向,即化學(xué)平衡方向,主要取決于反應(yīng)自由能變化H。而反應(yīng)速度快慢,則主要取決于反應(yīng)的活化能Ea。催化劑的作用是降低反應(yīng)活化能Ea,從而起到提高反應(yīng)速度的作用

反應(yīng)過程中能量的變化（自由能）酶催化作用的本質(zhì)是酶的活性中心與底物分子通過短程非共價力(如氫鍵,離子鍵和疏水鍵等)的作用，形成E-S反應(yīng)中間物。其結(jié)果使底物的價鍵狀態(tài)發(fā)生形變或極化，起到激活底物分子和降低過渡態(tài)活化能作用。

三、酶高效催化的策略

1、鄰基效應(yīng)和定向效應(yīng)在酶促反應(yīng)中，底物分子結(jié)合到酶的活性中心，一方面底物在酶活性中心的有效濃度大大增加，有利于提高反應(yīng)速度；另一方面，由于活性中心的立體結(jié)構(gòu)和相關(guān)基團(tuán)的誘導(dǎo)和定向作用，使底物分子中參與反應(yīng)的基團(tuán)相互接近，并被嚴(yán)格定向定位，使酶促反應(yīng)具有高效率和專一性特點。臨近效應(yīng)定向效應(yīng)2、與反應(yīng)過渡狀態(tài)結(jié)合作用按SN2歷程進(jìn)行的反應(yīng)，反應(yīng)速度與形成的過渡狀態(tài)穩(wěn)定性密切相關(guān)。在酶催化的反應(yīng)中，與酶的活性中心形成復(fù)合物的實際上是底物形成的過渡狀態(tài)，所以，酶與過渡狀態(tài)的親和力要大于酶與底物或產(chǎn)物的親和力。（基態(tài)）（過渡態(tài)）（活化能）3、張力學(xué)說這是一個形成內(nèi)酯的反應(yīng)。當(dāng)R＝CH3時，其反應(yīng)速度比R＝H的情況快315倍。由于-CH3體積比較大，與反應(yīng)基團(tuán)之間產(chǎn)生一種立體排斥張力，從而使反應(yīng)基團(tuán)之間更容易形成穩(wěn)定的五元環(huán)過渡狀態(tài)。

4、多功能催化作用酶的活性中心部位，一般都含有多個起催化作用的基團(tuán)，這些基團(tuán)在空間有特殊的排列和取向，可以對底物價鍵的形變和極化及調(diào)整底物基團(tuán)的位置等起到協(xié)同作用，從而使底物達(dá)到最佳反應(yīng)狀態(tài)。（四）.

酶催化反應(yīng)機(jī)制類型

1、酸－堿催化酸-堿催化可分為狹義的酸-堿催化和廣義的酸-堿催化。酶參與的酸-堿催化反應(yīng)一般都是廣義的酸－堿催化方式。廣義酸－堿催化是指通過質(zhì)子酸提供部分質(zhì)子,或是通過質(zhì)子堿接受部分質(zhì)子的作用，達(dá)到降低反應(yīng)活化能的過程。酶分子中可以作為廣義酸、堿的基團(tuán)廣義酸基團(tuán)（質(zhì)子受體）廣義堿基團(tuán)（質(zhì)子供體）His是酶的酸堿催化作用中最活潑的一個催化功能團(tuán)。2、共價催化催化劑通過與底物形成反應(yīng)活性很高的共價過渡產(chǎn)物，使反應(yīng)活化能降低，從而提高反應(yīng)速度的過程，稱為共價催化。酶中參與共價催化的基團(tuán)主要包括His的咪唑基，Cys

的硫基，Asp的羧基，Ser的羥基等。某些輔酶，如焦磷酸硫胺素和磷酸吡哆醛等也可以參與共價催化作用。

3、金屬離子催化作用提高水的親核性能金屬離子可以和水分子的OH-結(jié)合，使水顯示出更大的親核催化性能。

電荷屏蔽作用電荷屏蔽作用是酶中金屬離子的一個重要功能。多種激酶(如磷酸轉(zhuǎn)移酶)的底物是Mg2+－ATP復(fù)合物。

電子傳遞中間體許多氧化-還原酶中都含有銅或鐵離子，它們作為酶的輔助因子起著傳遞電子的功能。

第四節(jié)、酶促反應(yīng)的速度和影響因素

一、酶促反應(yīng)速度斜率=[P]/

t=V（初速度）[P]t二、底物濃度對酶促反應(yīng)速度的影響在低底物濃度時,反應(yīng)速度與底物濃度成正比，表現(xiàn)為一級反應(yīng)特征。當(dāng)?shù)孜餄舛冗_(dá)到一定值，幾乎所有的酶都與底物結(jié)合后，反應(yīng)速度達(dá)到最大值（Vmax），此時再增加底物濃度，反應(yīng)速度不再增加，表現(xiàn)為零級反應(yīng)。當(dāng)?shù)孜餄舛容^低時反應(yīng)速度與底物濃度成正比；反應(yīng)為一級反應(yīng)。[S]VVmax隨著底物濃度的增高反應(yīng)速度不再成正比例加速；反應(yīng)為混合級反應(yīng)。[S]VVmax當(dāng)?shù)孜餄舛雀哌_(dá)一定程度反應(yīng)速度不再增加，達(dá)最大速度；反應(yīng)為零級反應(yīng)[S]VVmax1.米氏方程Km即為米氏常數(shù)，Vmax為最大反應(yīng)速度米氏方程的推導(dǎo)：根據(jù)中間產(chǎn)物學(xué)說，酶促反應(yīng)分兩步進(jìn)行:2、米氏常數(shù)（Km）的意義1、不同的酶具有不同Km值，它是酶的一個重要的特征物理常數(shù)。2、Km值只是在固定的底物，一定的溫度和pH條件下，一定的緩沖體系中測定的，不同條件下具有不同的Km值。3、Km值表示酶與底物之間的親和程度：Km值大表示親和程度小，酶的催化活性低;Km值小表示親和程度大,酶的催化活性高，因此可以判斷酶的最適底物。4、催化可逆反應(yīng)的酶正逆方向反應(yīng)的Km是不相同的，測定細(xì)胞內(nèi)Km和正逆方向反應(yīng)的底物濃度，可大致推測正逆反應(yīng)的效率，判斷酶在細(xì)胞內(nèi)的催化的主要方向。3.米氏常數(shù)的求法（雙倒數(shù)作圖法）

1Km11

=

+

V

Vmax[S]Vmax-1/Km1/Vmax斜率=Km/Vmax5、多底物的酶促反應(yīng)動力學(xué)

A+B P+Q

雙底物雙產(chǎn)物的反應(yīng)按動力學(xué)機(jī)制可分為兩大類:

雙底物雙產(chǎn)物的反應(yīng)

序列反應(yīng)

（sequentialreactions）

乒乓反應(yīng)

（pingpongreactions）

有序反應(yīng)

（orderdreactions）

隨機(jī)反應(yīng)

（randomreactions）（1）、序列反應(yīng)（單置換反應(yīng)）A、有序反應(yīng)：A為領(lǐng)先底物。E+A+B—ABE—PEQ—E+P+QB、隨機(jī)反應(yīng)特點是：底物A和B隨機(jī)和酶結(jié)合，產(chǎn)物P和Q隨機(jī)和酶脫離（2）、乒乓反應(yīng)（雙置換反應(yīng)）雙置換反應(yīng)的特點是：酶同A的反應(yīng)產(chǎn)物（P）是酶同第二個底物結(jié)合之前釋放出來，相應(yīng)的酶轉(zhuǎn)變E。5、雙置換反應(yīng)舉例（轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)）5、多底物的酶促反應(yīng)動力學(xué)（乒乓反應(yīng)動力學(xué)方程）5、多底物的酶促反應(yīng)動力學(xué)（乒乓反應(yīng)動力學(xué)曲線圖）5、多底物的酶促反應(yīng)動力學(xué)（序列反應(yīng)的底物動力學(xué)方程）5、多底物的酶促反應(yīng)動力學(xué)（序列反應(yīng)的底物動力學(xué)圖）三、酶濃度對反應(yīng)速度的影響當(dāng)[S]＞＞[E]，酶可被底物飽和的情況下，反應(yīng)速度與酶濃度成正比。關(guān)系式為：V=K3[E0V[E]

當(dāng)[S]>>[E]時，Vmax

=k3[E]酶濃度對反應(yīng)速度的影響

四.pH對酶反應(yīng)速度的影響在一定的pH下,酶具有最大的催化活性,通常稱此pH為最適pH。五、溫度對酶反應(yīng)速度的影響一方面是溫度升高,酶促反應(yīng)速度加快。另一方面,溫度升高,酶的高級結(jié)構(gòu)將發(fā)生變化或變性，導(dǎo)致酶活性降低甚至喪失。因此大多數(shù)酶都有一個最適溫度。在最適溫度條件下,反應(yīng)速度最大。六、抑制劑對酶反應(yīng)速度的影響能夠和酶的必需基團(tuán)結(jié)合，改變必需基團(tuán)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，從而引起酶活性的下降，甚至使酶的活性完全喪失的現(xiàn)象稱酶的抑制作用。能引起抑制作用的化合物則稱為抑制劑。酶的抑制劑一般具備兩個方面的特點：a.在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與被抑制的底物分子或底物的過渡狀態(tài)相似。b.能夠與酶的活性中心以非共價或共價的方式形成比較穩(wěn)定的復(fù)合體或結(jié)合物。

抑制作用可逆抑制不可逆抑制

反競爭性抑制非競爭性抑制競爭性抑制1、抑制劑的作用方式（1）不可逆抑制抑制劑與酶反應(yīng)中心的活性基團(tuán)以共價形式結(jié)合，引起酶的永久性失活。如有機(jī)磷毒劑二異丙基氟磷酸酯。（2）、可逆抑制抑制劑與酶蛋白以非共價方式結(jié)合，引起酶活性暫時性喪失。抑制劑可以通過透析等方法被除去，并且能部分或全部恢復(fù)酶的活性。根椐抑制劑與酶結(jié)合的情況，又可以分為兩類A、竟?fàn)幮砸种颇承┮种苿┑幕瘜W(xué)結(jié)構(gòu)與底物相似，因而能與底物竟?fàn)幣c酶活性中心結(jié)合。當(dāng)抑制劑與活性中心結(jié)合后，底物被排斥在反應(yīng)中心之外，其結(jié)果是酶促反應(yīng)被抑制了。竟?fàn)幮砸种仆ǔ？梢酝ㄟ^增大底物濃度，即提高底物的競爭能力來消除。竟?fàn)幮砸种?/p>

磺胺類藥物的抑菌機(jī)制與對氨基苯甲酸競爭二氫葉酸合成酶二氫蝶呤啶＋對氨基苯甲酸＋谷氨酸二氫葉酸合成酶二氫葉酸*舉例

丙二酸與琥珀酸競爭琥珀酸脫氫酶琥珀酸琥珀酸脫氫酶FADFADH2延胡索酸(2)非竟?fàn)幮砸种泼缚赏瑫r與底物及抑制劑結(jié)合，引起酶分子構(gòu)象變化，并導(dǎo)至酶活性下降。由于這類物質(zhì)并不是與底物競爭與活性中心的結(jié)合，所以稱為非競爭性抑制劑。如某些金屬離子（Cu2+、Ag+、Hg2+）以及EDTA等，通常能與酶分子的調(diào)控部位中的-SH基團(tuán)作用，改變酶的空間構(gòu)象，引起非競爭性抑制。(3)、反競爭性抑制作用酶與底物結(jié)合后抑制劑才能和酶結(jié)合2.可逆抑制作用的動力學(xué)特征

(1).競爭性抑制1/Vmax競爭性抑制劑無抑制劑加入競爭性抑制劑后，Km變大，酶促反應(yīng)速度減小。（2）、非競爭性抑制不同類型抑制作用的米氏方程七、激活劑的影響（一）、凡能夠提高酶活性，加速酶促化學(xué)反應(yīng)的物質(zhì)都稱酶的激活劑（activator)。（二）、激活劑的類型1、無機(jī)離子

如：Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Co2+、Cr2+、Fe2+、Cl-、Br-、I-、CN-、NO3-、PO4-等；2、有機(jī)小分子

如：EDTA3、生物大分子

如：酶原激活時的蛋白酶八、酶活力單位1、酶活力：是指酶催化某一化學(xué)反應(yīng)的能力。2、酶活力單位：一般用活力單位U(Unit)表示，許多酶活力單位都是以最佳條件或某一固定條件下每分鐘催化生成一微摩爾產(chǎn)物所需要的酶量為一個酶活力單位。在最適的反應(yīng)條件（25℃）下，每分鐘內(nèi)催化一微摩爾底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的酶量定為一個酶活力單位，即：

1IU=1μmol/min在最適條件下，每秒鐘內(nèi)使一摩爾底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量定為1kat單位，即

1kat=1mol/s

1kat=6×107IU

3、酶的比活力：是指每毫克酶蛋白所含有的酶活力單位數(shù)，它是酶制劑純度的一個指標(biāo)。比活力=活力單位數(shù)/毫克蛋白（氮）4、酶的收率：指純化過程中酶活性的收率。5、純化倍數(shù)：指提純后與提純前酶比活力的比值。產(chǎn)率%（回收率）=——————×100每次總活力第一次總活力純化倍數(shù)=——————每次比活力第一次比活力6.轉(zhuǎn)換系數(shù)

底物（μmoL）/秒·每個酶分子6.酶的保存：1.低溫（0～4℃，-20℃）；2.高濃度較穩(wěn)定；3.加入穩(wěn)定劑；7.酶的純化鑒定：聚丙烯酰胺凝膠電泳法、等電聚焦電泳法九、酶催化反應(yīng)的某些缺點1、酶催化反應(yīng)只能得到一種構(gòu)型（L-型或D-型）的光學(xué)產(chǎn)物；2、酶常常存在著底物或產(chǎn)物抑制現(xiàn)象，造成反應(yīng)轉(zhuǎn)化率降低，生產(chǎn)能力低等問題；3、極端的pH、較高的溫度和高鹽濃度的反應(yīng)體系都可能使酶鈍化，失去部分甚至大部分催化活性；4、大量的氧化還原酶、轉(zhuǎn)氨酶等需要等計量反應(yīng)物的輔因子存在才能表現(xiàn)催化活性，從而限制了它們在許多有機(jī)合成反應(yīng)中的應(yīng)用；5、酶通常在水溶液中實施其催化活性，對于大多數(shù)有機(jī)化學(xué)反應(yīng)來說，使用的溶劑是非水溶性的有機(jī)溶劑。第五節(jié)、幾種重要的酶一、單體酶，寡聚酶，多酶體系二、同工酶三、酶原及酶原激活四、變構(gòu)酶（別構(gòu)酶）五、共價調(diào)節(jié)酶六、核酶七、抗體酶一、單體酶、寡聚酶、多酶體系、多功能酶：1、單體酶：由一條多肽鏈構(gòu)成的酶。大多數(shù)的水解酶。2、寡聚酶：由兩條及兩條以上的多肽鏈構(gòu)成的酶。如：糖代謝的酶。3、多酶體系：由幾個功能上相關(guān)的酶嵌合而成的酶的絡(luò)合物。丙酮酸脫氫酶系。4、多功能酶：一些多酶體系在進(jìn)化過程中由于基因的融合，多種不同催化功能存在于一條多肽鏈中，這類酶稱為多功能酶。二、同工酶同一種屬，同一個體的同一組織或不同組織中，具有不同分子形式，卻能催化相同化學(xué)反應(yīng)的酶。例：乳酸脫氫酶。

同工酶能催化相同的化學(xué)反應(yīng)，但在蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和免疫性能等方面都存在明顯差異的一組酶。乳酸脫氫酶（LDH）MHMMMMM4HMMMM3H1MMHHM2H2MHHHMH3HHHHH4三、酶原及酶原激活1、酶原：沒有催化能力的酶的前體。2、酶原的激活，由沒有催化能力的酶的前體轉(zhuǎn)變?yōu)橛写呋芰Φ拿傅倪^程。酶原的激活是酶的活性中心形成和暴露的過程。酶原激活舉例胰蛋白酶的激活在腸激酶的作用下切除N—末端的六肽，形成酶的活性中心。賴?yán)i天天天天甘異賴?yán)i天天天天纈組絲SSSS46183甘異纈組絲SSSS腸激酶胰蛋白酶活性中心胰蛋白酶原的激活過程四、變構(gòu)酶（別構(gòu)酶）變構(gòu)酶（別構(gòu)酶allosericenzyme）：酶分子的非催化部位與某些化合物可逆地非共價地結(jié)合后發(fā)生構(gòu)象的改變，進(jìn)而改變酶的活性狀態(tài)，稱為變構(gòu)調(diào)節(jié)。具有變構(gòu)調(diào)節(jié)作用的酶稱變構(gòu)酶。（一）、變構(gòu)酶（別構(gòu)酶）的結(jié)構(gòu)特點1、變構(gòu)酶為寡聚酶，含有兩個以上的亞基。2、變構(gòu)酶有催化亞基（具有結(jié)合底物的活性中心）和調(diào)節(jié)亞基（具有結(jié)合效應(yīng)物的別構(gòu)中心）。3、變構(gòu)酶的活性中心和別構(gòu)中心也可能在同一亞基上。（二）、變構(gòu)酶（別構(gòu)酶）具有變構(gòu)效應(yīng)1、變構(gòu)效應(yīng)調(diào)節(jié)物和變構(gòu)酶別構(gòu)中心結(jié)合后，誘導(dǎo)出或穩(wěn)定住酶分子的某種構(gòu)象，使酶的活性中心對底物的結(jié)合和催化作用受到影響，從而影響酶的活性。2、效應(yīng)物能夠引起變構(gòu)效應(yīng)的物質(zhì)（1）、正效應(yīng)物（變構(gòu)激活劑）效應(yīng)物的結(jié)合使酶的活性升高。（2）、負(fù)效應(yīng)物（變構(gòu)抑制劑）效應(yīng)物的結(jié)合使酶的活性降低。效應(yīng)物有V型和K型V型效應(yīng)物Km不變Vmax變化K型效應(yīng)物Vmax

不變Km改變變構(gòu)酶常為多個亞基構(gòu)成的寡聚體，具有協(xié)同效應(yīng)

變構(gòu)激活變構(gòu)抑制

變構(gòu)酶的Ｓ形曲線[S]V無變構(gòu)效應(yīng)劑

（四）、變構(gòu)酶（別構(gòu)酶）協(xié)同效應(yīng)協(xié)同效應(yīng)一個效應(yīng)物分子和變構(gòu)酶的變構(gòu)中心結(jié)合后，對第二個效應(yīng)物分子結(jié)合的影響。同促效應(yīng)一個效應(yīng)物分子和變構(gòu)酶的變構(gòu)中心結(jié)合后，影響另一相同的效應(yīng)物和酶的另一結(jié)合部位。異促效應(yīng)一個效應(yīng)物分子和變構(gòu)酶的變構(gòu)中心結(jié)合后，影響另一不同的效應(yīng)物和酶的另一結(jié)合部位。別構(gòu)酶活性調(diào)節(jié)機(jī)理別構(gòu)酶的序變模型SSSSSSSSSSSSSS亞基全部處于R型亞基全部處于T型依次序變化別構(gòu)酶的齊變模型SSSSSSSSSST狀態(tài)（對稱亞基）T狀態(tài)（對稱亞基）SSSS對稱亞基對稱亞基齊步變化怎么區(qū)分米氏酶與別構(gòu)酶？koshland建議用飽和比值（saturationratio,Rs）典型的米氏酶RS=81具有正協(xié)同效應(yīng)的別構(gòu)酶RS<81

具有負(fù)協(xié)同效應(yīng)的別構(gòu)酶RS>81目前常使用Hill系數(shù)區(qū)分米氏酶與別構(gòu)酶

Hill方程將Hill方程中的有關(guān)參數(shù)換成別構(gòu)酶中的有關(guān)參數(shù)n為Hill系數(shù)，米氏酶Hill系數(shù)n=1正協(xié)同效應(yīng)的別構(gòu)酶n>1負(fù)協(xié)同效應(yīng)的別構(gòu)酶n<1共價調(diào)節(jié)酶常見的是磷酸化/脫磷酸化，腺苷?；?脫腺苷?；?，乙?；?脫乙酰化，尿苷?；?脫尿苷酰化，甲基化/脫甲基化，S-S/SH相互轉(zhuǎn)變，共6種類型。

共價調(diào)節(jié)酶最典型的例子

是動物組織的糖原磷酸化酶1.糖原磷酸化酶催化的反應(yīng)催化糖原的磷酸解，生成G-1-P。糖原G-1-P+糖原+H3PO4糖原磷酸化酶（n-1個Glc基）（n個Glc基）第六節(jié)酶工程簡介一、化學(xué)酶工程

天然酶

固定化酶

化學(xué)修飾酶人工模擬酶二、生物酶工程克隆酶

突變酶

新酶

將酶學(xué)和工程學(xué)相結(jié)合，產(chǎn)生了酶工程(enzymeengineering)這樣一個新的領(lǐng)域。酶工程主要研究酶的生產(chǎn)、純化、固定化技術(shù)、酶分子結(jié)構(gòu)的修飾和改造以及在工農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和理論研究等方面的應(yīng)用。固定化酶

將水溶性酶用物理或化學(xué)方法處理，固定于高分子支持物(或載體)上而成為不溶于水，但仍有酶活性的一種酶制劑形式，稱固定化酶(immobilizedenzyme)。包埋法吸附法共價偶聯(lián)法交聯(lián)法溴化氰亞氨碳酸基偶聯(lián)法OHOHBrCNH2OOOC=N-EO-CO-NH-EOHO-C-NH-ENHOHH2N-E（多羥基載體）O-CONH2OH（惰性）OOC=NH（活潑）O—C—NOH戊二醛交聯(lián)法

OHC(CH2)3CHO戊二醛H2N-EN

-HC=N-E-N=CH（CH2）3-CH=N-

E-NCHCH人工模擬酶-benzyme

環(huán)糊精催化側(cè)鏈催化側(cè)鏈連接到環(huán)糊精上，可模擬胰凝乳蛋白酶環(huán)糊精分子結(jié)構(gòu)環(huán)糊精結(jié)構(gòu)模型生物酶工程示意圖

酶的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能新酶分子藍(lán)圖選擇性修飾方案突變酶

新酶克隆酶產(chǎn)品效用發(fā)展酶基因遺傳設(shè)計遺傳修飾DNA重組技術(shù)DNA重組技術(shù)七、抗體酶

抗體酶（abzyme）又稱催化抗體（catalyticantibody）,是指通過一系列化學(xué)與生物技術(shù)方法制備出的具有催化活性的抗體，它除了具有相應(yīng)免疫學(xué)性質(zhì)，還類似于酶，能催化某種活化反應(yīng)。抗體與酶相似，都是蛋白質(zhì)分子，酶與底物的結(jié)合及抗體與抗原的結(jié)合都是高度專一性的，但這兩種結(jié)合的基本區(qū)別在于酶與高能的過度態(tài)分子向結(jié)合，而抗體則與抗原（基態(tài)分子）相結(jié)合。利用抗體能與抗原特異結(jié)合的原理可用過度態(tài)類似物作為半抗原來誘發(fā)抗體，這樣產(chǎn)生的抗體便能特異地識別反應(yīng)過程中真正的過渡分子，從而降低反應(yīng)的活化能。達(dá)到催化反應(yīng)的目的，這種具有催化功能的抗體就被稱為催化抗體或抗體酶。

O–C–A.酯酶的底物–酯B.酯的羧基碳原子受到親核攻擊形成四面體過渡態(tài)C.設(shè)計的磷酸酯類似物,作為抗原去免疫實驗動物磷酸酯類似物(半抗原)對酯水解反應(yīng)有催化作用的單克隆抗體免疫免疫反應(yīng)誘導(dǎo)法制備具有酯酶活性的抗體基因工程抗體酶的制備

對已產(chǎn)生的單抗，分析氨基酸的組成或相應(yīng)基因的堿基序列，對抗體結(jié)合的部位的基因進(jìn)行定位突變，在抗體結(jié)合部位換上有催化活性的氨基酸，基因工程的技術(shù)使得建立抗體基因的組合文庫，并根據(jù)需要構(gòu)建適當(dāng)程序的基因片段成為可能?？贵w酶的篩選

在抗體酶研究中，一個不可少的步驟是在細(xì)胞融合后篩選到能分泌催化抗體的細(xì)胞克隆。一般的方法是先篩選其抗體能結(jié)合特異抗原的細(xì)胞克隆，再從純化的抗體中篩選出有催化能力的單抗。主要篩選方法有生物學(xué)篩選法和純化學(xué)篩選法?？贵w酶的研究和應(yīng)用前景

催化抗體的出現(xiàn)不僅為人們開創(chuàng)了一條人工設(shè)計酶的新方法，也使人們對催化過程中催化劑的作用機(jī)理和催化劑和底物的相互識別有了進(jìn)一步認(rèn)識。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)具有催化作用的自身抗體在生物體內(nèi)的存在，其不僅和疾病相關(guān)，可能還參與了生物體內(nèi)的某些或基本的生物學(xué)反應(yīng)。有可能成為抗體酶研究的新熱點。充分利用抗體的種類繁多以及抗體酶的可誘導(dǎo)、可改造的特點，可望制備出具有治療和輔助治療某些疾病或催化某類具有特殊意義反應(yīng)的抗體酶?？贵w酶的研究無疑會對化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響。核酶（Ribozyme)一、概述二、剪接型核酶三、剪切型核酶四、核酶的應(yīng)用五、核酶技術(shù)面臨的問題六、脫氧核酶1、對酶及生物催化劑的認(rèn)識的發(fā)展一、概述生物催化劑（Biocatalyst）蛋白質(zhì)類：天然酶

enzyme

極端酶extremozyme

抗體酶abzyme

生物工程酶其它：模擬酶核酸類:克隆酶遺傳修飾酶蛋白質(zhì)工程新酶、RibozymeDeoxyribozyme2、長期以來，人們認(rèn)為只有某些蛋白質(zhì)才有生物催化功能。但近些年研究發(fā)現(xiàn)，某些RNA分子也具有生物催化功能，被稱為Ribozyme。1982年Cech等發(fā)現(xiàn)四膜蟲細(xì)胞大核期間26SrRNA前體具有自我剪接功能，并于1986年證明其內(nèi)含子L-19IVS具有多種催化功能。1984年Altman等發(fā)現(xiàn)RNaseP的核酸組分M1RNA具有該酶的活性，而該酶的蛋白質(zhì)部分C5蛋白并無酶活性。Cech和Altman因發(fā)現(xiàn)Ribozyme而獲得1989年度諾貝爾化學(xué)獎。

化學(xué)本質(zhì)RNA

底物RNA肽鍵ā-葡聚糖分支酶反應(yīng)特異性(專一性）堿基催化效率低產(chǎn)物3、核酶作用的特點剪切型核酶剪接型核酶根據(jù)催化反應(yīng)錘頭核酶I內(nèi)含子II內(nèi)含子發(fā)夾核酶丁型肝炎病毒（HDV)核酶RNaseP4.核酶的分類二、剪接型核酶剪接型核酶的作用機(jī)制是通過既剪又接的方式除去內(nèi)含子（Intron).剪接型核酶分類1、I類內(nèi)含子

2、II類內(nèi)含子

1.I類內(nèi)含子的自我剪接(Self-splicing)剪接機(jī)制L-19IVS在體外的多種酶活性核酶是一種金屬依賴酶結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系自我剪接方式總結(jié)A

保守的二級結(jié)構(gòu)B鳥嘌呤核苷酸輔因子是自由羥基的提供者C

沒有套索結(jié)構(gòu)的形成D

自我剪接核酶是一種金屬依賴酶（金屬離子的作用）1、特異的結(jié)構(gòu)作用，或參與活性部位的化學(xué)過程2、促進(jìn)RNA的總體折疊3、二價金屬離子（如Mg2+）與底物活性部位直接相互作用，參與過渡中間復(fù)合物的形成CCCUCUOP+HOG

3’OAoooCCCUCUOPOAoOGCCCUCUOH+P-oGoAoo過渡態(tài)

Ⅰ類內(nèi)含子二級結(jié)構(gòu)通式保守序列G結(jié)合位點剪接部位引導(dǎo)序列2、Ⅱ類內(nèi)含子的自我剪接剪接機(jī)制結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系自我剪接方式總結(jié)A

保守的二級結(jié)構(gòu)B

內(nèi)部腺嘌呤是自由羥基的供體C

形成套索結(jié)構(gòu)的中間體D

自身催化剪接Ⅱ類內(nèi)含子有一個保守的二級結(jié)構(gòu)：結(jié)構(gòu)域Ⅰ：兩個保守內(nèi)含子結(jié)構(gòu)序列EBS1,EBS2與兩個外顯子結(jié)構(gòu)序列IBS1,IBS2互相配對。結(jié)構(gòu)域Ⅴ：高度保守，催化活性必需。結(jié)構(gòu)域Ⅵ：A提供2‘-OHⅡ類內(nèi)含子二級結(jié)構(gòu)模式5’3’三、剪切型核酶1、自身催化剪切型RNA

1、1剪切機(jī)制

1、2結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系

錘頭結(jié)構(gòu)

(Hammerhead)

發(fā)夾結(jié)構(gòu)(Hairpin)

斧頭結(jié)構(gòu)(Axehead)

假結(jié)樣結(jié)構(gòu)(Pseudoknot-like)1、3影響核酶活性的因素2、異體催化剪切型RNA

核糖核酸酶P(RNaseP)是內(nèi)切核酸酶，是核糖核蛋白體復(fù)合物，能剪切所有tRNA前體的5‘端，除去多余的序列，形成3’-OH和5’-磷酸末端。

RNaseP由M1RNA和蛋白質(zhì)亞基組成。體外：M1RNA具催化作用蛋白質(zhì)作為輔助因子體內(nèi)：M1RNA和蛋白質(zhì)對酶活性都是必需的。2、1剪切機(jī)制

Mg2+2、2結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系M1RNA5‘端完整結(jié)構(gòu)對維持催化活性是必需的。

RNaseP可剪切前體5‘端41nt,5’端成熟。不同tRNA的5’端沒有順序共同性，剪切的準(zhǔn)確性與剪切部位周圍的核苷酸順序無關(guān)，表明在RNaseP的組分內(nèi)沒有引導(dǎo)序列，RNaseP所識別的是底物的高級結(jié)構(gòu)。RNaseP底物的二級結(jié)構(gòu)剪切位點1、轉(zhuǎn)核苷酸作用2CpCpCpCpCCpCpCpCpCpC

+CpCpCpC2、水解作用

CpCpCpCpCCpCpCpC+pC3、轉(zhuǎn)磷酸作用CpCpCpCpCpCp+UpCpUCpCpCpCpCpC+UpCpUp4、去磷酸作用

CpCpCpCpCpCpCpCpCpC+Pi5、限制性內(nèi)切酶作用

CpUpCpUpN+GCpUpCpU

+GpN核酶在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用1、核酶抗肝炎病毒的研究目前人們已進(jìn)行了核酶抗甲型肝炎病毒（HAV)、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）以及HDV作用的研究。人工設(shè)計核酶多為錘頭狀結(jié)構(gòu)，少部分是采用發(fā)夾狀核酶。2、抗人類免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-Ⅰ)核酶1998年，美國加利福尼亞大學(xué)Wong-Staal等利用發(fā)夾核酶抑制HIV-Ⅰ基因表達(dá)，并率先進(jìn)入臨床Ⅰ期。3、抗腫瘤治療核酶能在特定位點準(zhǔn)確有效地識別和切割腫瘤細(xì)胞的mRNA,抑制腫瘤基因的表達(dá)，達(dá)到治療腫瘤的目的。

五、核酶技術(shù)面臨的問題1、核酶催化切割反應(yīng)的可逆性問題2、提高催化效率3、尋找合適載體將核酶高效、特異地導(dǎo)入靶細(xì)胞4、使核酶在細(xì)胞內(nèi)有調(diào)控地高效表達(dá)5、增強(qiáng)核酶在細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性6、對宿主的損傷問題有待進(jìn)一步考察六、脫氧核酶的研究

1、體外選擇技術(shù)篩選脫氧核酶分子脫氧核酶分子的體外選擇是通過優(yōu)先擴(kuò)增事先固定在固相載體上的具有自我裂解功能的活性分子來實現(xiàn)的。通過這一技術(shù)已有兩種具有RNA裂解活性的脫氧核酶被篩選出來。

10-23裂解位點為嘌呤、嘧啶連接雙鏈穩(wěn)定性越高，酶活性越高結(jié)合臂的長度影響酶催化轉(zhuǎn)換性RNA-DNA比RNA-RNA穩(wěn)定性差。對Mg2+,Zn2+,Ca2+,Mn

2+有依賴性組氨酸，精氨酸促進(jìn)催化活性極強(qiáng)的切割特異性（單堿基錯配即可大幅降低切割活性）2、脫氧核酶催化特征10-23型脫氧核酶作用機(jī)理RYRRNAsubstrate切割點R=AorGY=CorUdeoxyribozyme53手槍型脫氧核酶自我剪切作用機(jī)理莖II(催化部位)莖I(結(jié)合部位)

5‘3‘3‘CA切割點10203040UCUAAAIVSGUAAPre-rRNAUCU

AAAGUAAUCUoH3’5‘GAAAGUAAUCUUAA5’GAAAGOH3’G-IVSL-19IVS19nt5‘3‘rRNA5‘3‘5‘pGOH3‘5‘3‘四膜蟲rRNA前體自我剪接反應(yīng)p3’HO-Gp3’pP-GOHpP-G3‘HO

Ⅰ類內(nèi)含子的剪接機(jī)制Mg2+或Mn

2+GMP,GDP,GTP外顯子內(nèi)含子或居間序列（Interveningsequence,IVS)5‘p2‘

HO-Ap

p-Ap3’OHpP-AHO3’Ⅱ類內(nèi)含子的剪接機(jī)制Mg2+套環(huán)的形成5‘3‘外顯子連接剪輯過程：套索結(jié)構(gòu)形成mRNA前體的剪輯過程BAA5‘BBABAPCRPCR5‘5‘5‘StreptavidinColumnNaOHcofactor體外選擇技術(shù)篩選具有自我裂解功能的DNA分子N50(DNA分子庫）5個環(huán)和4個螺旋形成兩個結(jié)構(gòu)域剪切反應(yīng)發(fā)生在底物識別序列GUC的5‘端兩個內(nèi)部環(huán)中的堿基及在螺旋區(qū)Ⅱ的G11和底物中的G+1都是酶發(fā)揮作用所必需的。5‘3‘發(fā)夾二級結(jié)構(gòu)模型剪切位點HDVRNA斧頭結(jié)構(gòu)模式

三個堿基對的莖需要二價陽離子，產(chǎn)生5‘-OH和2’,3’-環(huán)磷酸剪切部位剪切部位

這類RNA進(jìn)行自身催化的反應(yīng)是只切不接。特點：在Mg2+

或其他二價金屬離子存在下，在特定的位點，自我剪切，產(chǎn)生5‘-OH和2’，3‘-環(huán)磷酸二酯末端。

剪切機(jī)制核酶自身剪切反應(yīng)

mRNA剪接過程

mRNA剪接反應(yīng)是在剪接體（splicesome)上進(jìn)行的.5種snRNA剪接體50多蛋白質(zhì)錘頭結(jié)構(gòu)的五種類型R示酶，S示底物，箭頭示剪切位點建議的