鼠疫病原學檢驗的實驗室質(zhì)量控制寧夏疾病預防控制中心人畜共患病實驗室2014年4月1日鼠疫病原學檢驗的實驗室質(zhì)量控制質(zhì)量控制的定義鼠疫病原學檢驗的質(zhì)量控制方法鼠疫病原學檢驗方法動物間鼠疫疫情的實驗室復判實驗室質(zhì)量控制的定義實驗室質(zhì)量控制的定義質(zhì)量控制(QualityContro,lQ.C)是監(jiān)視全過程,排除誤差,防止變化,維持標準化現(xiàn)狀的一個管理過程。

鑒于鼠疫細菌學檢驗的重要性,有必要對其進行規(guī)范化管理。鼠疫細菌學檢驗質(zhì)控(QualityControloftestYersiniaPestis)是鼠疫微生物學實驗室為了保證檢驗結(jié)果實事求是地反映客觀存在而建立的操作程序體系。鼠疫病原學檢驗的質(zhì)量控制方法室內(nèi)質(zhì)控(InternalQualityControlIQC)是指一個實驗室內(nèi)部對所有影響質(zhì)量的各個環(huán)節(jié)進行系統(tǒng)控制，是由實驗室內(nèi)部制定并實施的，是質(zhì)量保證的核心和基礎。目的是控制本實驗室常規(guī)工作的精密度，提高常規(guī)工作前后的一致性。室間質(zhì)控(ExternalQualityAssessment簡稱EQA)簡稱室間質(zhì)評。室間質(zhì)控由上級業(yè)務單位采用一系列的辦法連續(xù)地、客觀地評價各實驗室的試驗結(jié)果，并發(fā)現(xiàn)室內(nèi)質(zhì)控不易發(fā)現(xiàn)的不準確性，了解各實驗室之間結(jié)果的差異，并幫助校正，使具有可比性，這種評價是一種回顧性評價。室內(nèi)質(zhì)控主要監(jiān)測試驗結(jié)果的精密度，而室間質(zhì)控主要控制實驗結(jié)果的準確度，不互相替代，參與室間質(zhì)控的試驗室應先做好室內(nèi)質(zhì)控。鼠疫病原學檢驗的質(zhì)量控制方法鼠疫病原學檢驗的質(zhì)量控制方法人員與組織管理儀器設備的質(zhì)控疑似鼠疫材料的采取、保存和運輸培養(yǎng)基、染色液、試劑盒等的質(zhì)量控制鼠疫細菌檢驗程序及結(jié)果判定報告卡的書寫、疫情上報及交換室內(nèi)質(zhì)控室內(nèi)質(zhì)控扎實的基礎教育和專業(yè)知識職業(yè)道德和高度的責任心質(zhì)量管理體系各實驗室制定SOP專業(yè)化的技能培訓繼續(xù)教育人員與組織管理室內(nèi)質(zhì)控性能試驗正確貯存無菌試驗診斷試劑盒(噬菌體等)培養(yǎng)基量pH值試劑的質(zhì)量控制室內(nèi)質(zhì)控生物安全柜顯微鏡高壓鍋離心機培養(yǎng)箱冰箱儀器設備鼠疫病病原學學檢驗驗的質(zhì)質(zhì)量控控制方方法設立參比實驗室發(fā)質(zhì)控物進行檢查評價定期舉辦各級培訓班派觀察員到實驗室進行檢查指導室間質(zhì)控方法室間質(zhì)質(zhì)控的的一般般檢查查項目目實驗室室的布布局SOP制訂訂及執(zhí)執(zhí)行情情況實驗室室安全全防護護和污污染物物處理理室內(nèi)質(zhì)質(zhì)控執(zhí)執(zhí)行情情況及及各種種紀錄錄發(fā)放模模擬標標本(菌種種)，，規(guī)定定時間間內(nèi)反反饋至至上級級業(yè)務務單位位以pH值、、軟硬硬度、、鼠疫疫菌生生長數(shù)數(shù)量(活菌菌數(shù))等為為綜合合指標標對培培養(yǎng)基基進行行質(zhì)控控和用用已知知菌對對噬菌菌體進進行質(zhì)質(zhì)控盲點試試驗，，模擬擬標本本混入入監(jiān)測測標本本常規(guī)規(guī)測定定對結(jié)果果進行行評價價，分分析錯錯誤原原因鼠疫病病原學學檢驗驗方法法鼠疫病病原學學檢驗驗方法法染色鏡鏡檢培養(yǎng)特特性噬菌體體裂解解動物實實驗基因檢檢測鼠疫病病原學學檢驗驗方法法鼠疫病病原體體發(fā)現(xiàn)：：1894年，，在香香港，，日本本學者者北里里柴三三郎和和法國國學者者亞力力山大大耶爾爾森二二氏。。分類位位置：：腸桿桿菌科科耶爾爾森菌菌屬。。生物學學特性性分子生生物學學特性性：6MD、45MD、、65MD三種種質(zhì)粒粒；目目前已已知IS100、IS285、IS1541、、IS1661四種種插入入序列列，分分布于于鼠疫疫菌質(zhì)質(zhì)粒的的染色色體基基因組組中。。毒力決決定因因子:F1抗原原，VWa抗原原，Pstl，Pgm分型:古典典、中中世紀紀、東東方、、田鼠鼠變種種四個個生物物變種種；5個個群（（A、、B、、C、、D、、E群群），，21個生生態(tài)型型。染色鏡鏡檢革蘭氏氏染色色美蘭染染色典型的的鼠疫疫菌是是短而而粗、、兩端端鈍圓圓、兩兩極濃濃染的的橢圓圓形小小桿菌菌，革革蘭氏氏染色色陰性性。細菌培培養(yǎng)病原學學在普通通培養(yǎng)養(yǎng)基上上28－30℃℃經(jīng)24h，肉眼眼可見見形成成薄薄薄一層層淡灰灰色小小菌落落,圓圓形，，有光光澤，，中心心稍突突起。。透過過光線線呈灰灰白色色或淡淡青色色，菌菌落較較干燥燥，鏡鏡下：：中央央隆起起中心心發(fā)暗暗，有有粗糙糙顆粒粒（黃黃褐色色）周周圍有有薄而而透明明的花花邊，，呈鋸鋸齒狀狀。培養(yǎng)特特性Y.PEVY.E耶爾森菌屬三個致病菌形態(tài)比較噬菌體體裂解解實驗驗28－－30℃24h噬菌帶帶明顯顯觀察1-9天，，可以以從感感染動動物體體內(nèi)檢檢出鼠鼠疫菌菌為陽陽性。。動物實實驗鼠疫菌菌的基基因檢檢測病原學的檢測DNA提取取水煮法法提取取可疑疑鼠疫疫菌DNA對于臟臟器標標本，，在強強毒實實驗室室以無無菌手手續(xù)取取動物物的各各種臟臟器(心、、肝、、脾、、肺)約1g，，加入入到等等量生生理鹽鹽水中中，研研碎，，100℃℃水浴浴中煮煮沸10min，離離心，，取上上清直直接用用作PCR模板板對于培培養(yǎng)可可疑鼠鼠疫菌菌，在在平板板上刮刮取可可疑鼠鼠疫菌菌于裝裝有500ul蒸餾餾水（（生理理鹽水水）的的1.5ml離離心管管中，，于沸沸水浴浴中煮煮10min，，離心心上清清液中中含有有可疑疑鼠疫疫菌DNA作為為PCR模模板。。細菌基基因組組DNA提提取試試劑盒盒提取取鼠疫疫菌基基因組組DNA操作方方法可可根據(jù)據(jù)試劑劑盒說說明書書進行行操作作。鼠疫菌菌的基基因檢檢測體系配制PCR-bufferdNTP引物（2對各1ul）TaqDNA聚合酶模板純水總體積25ul2.5ul2ul4ul1ul（2.5U)1ul14.5ul鼠疫菌菌的基基因檢檢測PCR擴增93℃5min90℃1min60℃1min72℃1min30cycle72℃10min4℃保存鼠疫菌菌的基基因檢檢測瓊脂糖糖凝膠膠鼠疫菌菌的基基因檢檢測拍照鼠疫菌菌的基基因檢檢測臟器懸懸液基基因檢檢測：：FI特特異性性片249bp，Pla特異異性片片456bp菌懸液液基因因檢測測：FI特特異性性片249bp，Pla特異異性片片456bpPCR操作作鼠疫菌菌株的的復蘇蘇、培培養(yǎng)、、傳代代、核核酸提提取均均在BSL-2實驗驗室操操作其余PCR過程程在普普通實實驗室室操作作動物間間鼠疫疫疫情情的實實驗室室復判判動物間間鼠疫疫疫情情的實實驗室室復判判復判流流程日常監(jiān)測膠體金抗體陽性間接血凝（抑制）陽性自斃鼠培養(yǎng)鑒定為陽性膠體金抗原陽性反向血凝（抑制）陽性培養(yǎng)鑒定為陽性報自治區(qū)疾控中心復判謝謝大大家！