22定義化妝品中菌落總數(shù)檢驗(yàn)方法菌落總數(shù)檢驗(yàn)方法AerobicBacterialCount1范圍本規(guī)范規(guī)定了化妝品中菌落總數(shù)的檢驗(yàn)方法。本規(guī)范適用于化妝品菌落總數(shù)的測(cè)定。

2.1菌落總數(shù)Aerobicbacterialcount化妝品檢樣經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下培養(yǎng)后(如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、pH值、需氧性質(zhì)等)，1g(1mL)檢樣中所含菌落的總數(shù)。所得結(jié)果只包括一群本方法規(guī)定的條件下生長(zhǎng)的嗜中溫的需氧性和兼性厭氧菌落總數(shù)。測(cè)定菌落總數(shù)便于判明樣品被細(xì)菌污染的程度，是對(duì)樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)總評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。3儀器和設(shè)備3.1三角瓶，250mL。3.2量筒，200mL。pH計(jì)或精密pH試紙。高壓滅菌器。試管，18mmX150mm。滅菌平皿，直徑90mm。滅菌刻度吸管，10mL、1mL。酒精燈。3.9恒溫培養(yǎng)箱，36℃±1℃。3.10放大鏡。3.11恒溫水浴箱，55℃±1℃。4培養(yǎng)基和試劑4.1生理鹽水：見總則中3.1。4.2卵磷脂、吐溫80—營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化鈉5g瓊脂15g卵磷脂1g吐溫807g蒸餾水1000mL制法：先將卵磷脂加到少量蒸餾水中，加熱溶解，加入吐溫80，將其他成分（除瓊脂外）加到其余的蒸餾水中，溶解。加入已溶解的卵磷脂、?吐溫80,混勻，調(diào)pH值為7.1—7.4,加入瓊脂，121℃高壓滅菌20min,儲(chǔ)存于冷暗處備用。4.30.5%氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenylterazoliumchloride，TTC)成分：TTC0.5g蒸餾水100mL制法：溶解后過(guò)濾除菌，或115℃高壓滅菌20min,裝于棕色試劑瓶，置4℃冰箱備用。5操作步驟用滅菌吸管吸取1：10稀釋的檢液2mL，分別注入到兩個(gè)滅菌平皿內(nèi)，每皿1mL。另取1mL注入到9mL滅菌生理鹽水試管中（注意勿使吸管接觸液面），更換一支吸管，并充分混勻，制成1:100檢液。吸取2mL，分別注入到兩個(gè)滅菌平皿內(nèi)，每皿1mL。如樣品含菌量高，還可再稀釋成1:1000，1:10000，……等，每個(gè)稀釋度應(yīng)換1支吸管。將融化并冷至45℃—50℃的卵磷脂吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾注到平皿內(nèi)，每皿約15mL，隨即轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使樣品與培養(yǎng)基充分混合均勻，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，置36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h±2h。另取一個(gè)不加樣品的滅菌空平皿，加入約15mL卵磷脂吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，置36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h±2h,為空白對(duì)照。為便于區(qū)別化妝品中的顆粒與菌落，可在每100mL卵磷脂吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂中加入1mL0.5%的TTC溶液，如有細(xì)菌存在，培養(yǎng)后菌落呈紅色，而化妝品的顆粒顏色無(wú)變化。6菌落計(jì)數(shù)方法先用肉眼觀察，點(diǎn)數(shù)菌落數(shù)，然后再用5倍—10倍的

放大鏡檢查，以防遺漏。記下各平皿的菌落數(shù)后，求出同一稀釋度各平皿生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)。若平皿中有連成片狀的菌落或花點(diǎn)樣菌落蔓延生長(zhǎng)時(shí)，該平皿不宜計(jì)數(shù)。若片狀菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此半個(gè)平皿菌落計(jì)數(shù)后乘以2，以代表全皿菌落數(shù)。7菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告方法首先選取平均菌落數(shù)在30—300之間的平皿，作為菌落總數(shù)測(cè)定的范圍。當(dāng)只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時(shí)，即以該平皿菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見表1中例1）。7.2若有兩個(gè)稀釋度，其平均菌落數(shù)均在7.2若有兩個(gè)稀釋度，其平均菌落數(shù)均在30300之間，?則應(yīng)求出兩菌落總數(shù)之比值來(lái)決定，若其比值小于或等于2,應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)，若大于2?則以其中稀釋度較低的平皿的菌落數(shù)報(bào)告之（見表1中例2及例3）。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見表1中例4）。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見表1例5）。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30—300之間，其中一個(gè)稀釋度大于300，而相鄰的另一稀釋度小于30時(shí)，則以接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見表1中例6）。若所有的稀釋度均無(wú)菌生長(zhǎng)，報(bào)告數(shù)為每g或每mL小于10CFU。菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告，菌落數(shù)在10以內(nèi)時(shí)，按實(shí)有數(shù)值報(bào)告之，大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，應(yīng)以四舍五入法計(jì)算。為了縮短數(shù)字