【原理】

洛美沙星快速檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書

6、底物A液 7ml 棕色帽7、底物B液 7ml 黑色帽8、終止液 7ml 黃色帽

【樣本前處理方法】樣本前處理須知：處理任何樣本時(shí)，都必須注意：本試劑盒所檢測(cè)的組織樣本包括：動(dòng)物組織、試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物洛美沙星和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗洛美沙星抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB其所含殘留洛美沙星的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物洛美沙星的含量?！驹噭┖屑夹g(shù)指標(biāo)規(guī) 格：96孔盒靈敏度：0.1ppb檢測(cè)時(shí)間：45min樣本定量檢測(cè)下限：組織… 蜂蜜… 0.2ppb血清… 0.2ppb樣本回收率組織… 80±15%血清… 80±15%蜂蜜 75±15%洛美沙星反應(yīng)率洛美沙星（ENR）… 100％【試劑盒組成】1、微量測(cè)試孔：每條8孔，一板12條2、標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb3、高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液×1瓶：（1ml/瓶）100ppb4、酶標(biāo)記物 7ml 紅色帽5、抗體工作液 7ml 綠色帽

9、20X濃縮洗滌液40ml 白色帽10、2X濃縮復(fù)溶液50ml 藍(lán)色帽【所用儀器、試劑】具備的儀器：微孔酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）微量移液器：?jiǎn)蔚?0μl-200μl、100μl-1000μl，多道試 劑：濃鹽酸、二氯甲烷、正己烷、乙腈、肝素鈉Na2HPO4·12H2O、NaH2PO4·2H2O、【實(shí)驗(yàn)前溶液配制】樣本處理前需配制：10.1MHCL860μl濃鹽酸加去離子水100ml溶解。配液2、乙腈-0.1MHCL溶液V 0.1MHCL＝8416配液3、乙腈-二氯甲烷混合溶液V -V =1:4乙腈 二氯甲烷配液4、pH7.20.05MPB緩沖液12.9gNa2HPO4·12H2O+2.175gNaH2PO4·2H2O加去離子水1L溶解。配液5、pH7.20.02MPB緩沖液5.16gNa2HPO4·12H2O+0.87gNaH2PO4·2H2O加去離子水1L溶解。配液6、用去離子水將2X濃縮復(fù)溶液按1：1稀釋（1份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水）用于樣本復(fù)溶。740ml濃縮洗滌液倍濃縮）1：19稀釋（1+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。

禽類和水產(chǎn)組織。eg:雞、鴨、牛、兔、魚、蝦等。頭。具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。樣本前處理步驟組織樣本（雞肉肝、豬肉肝、蝦、魚等）1、稱2.0±0.05g50ml離心管中；2、加入乙腈-二氯甲烷混合溶液8ml，振蕩5min，4000r/min以上，15℃離心10min；3、取4ml上層清澈有機(jī)相至干燥溶器中，56℃氮?dú)獯蹈?旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干；4、用1ml稀釋后的復(fù)溶液溶解干燥的殘留物，加入正己烷1ml混合30s，4000r/min以上，15℃離心5min；5、去除上層取下層50μl液體用于分析。樣本稀釋倍數(shù)：1血清樣本的處理1、用加有肝素鈉（20-30單位/ml血）的離心管采集血樣本（建議采血注射器也用肝素鈉潤(rùn)洗），血樣本室溫靜置1h，待析出血漿后4000r/min以上，15℃離心10min，取出血漿1ml；2、加入乙腈（無(wú)水）4ml上下充分混合5min，4000r/min以上，15℃離心10min；3、移上清至另一離心管中，加入2ml0.02MPB緩沖液，混勻；4、加入二氯甲烷5ml，充分混勻5min，4000r/min，15℃離心10min，去上層，取下層有機(jī)相到干燥瓶

2、按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存于2-8℃，不要冷凍。

百分吸光度值（%）＝

B×100%B0中（清亮無(wú)雜質(zhì)），50℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干/氮?dú)獯蹈桑?、用1ml稀釋后的復(fù)溶液溶解干燥的殘留物，加入正己烷1ml混合30s，4000r/min以上，離心5min；6、輕吸掉上層和中間白色雜質(zhì)，取下層相100μl加入100μl稀釋后的復(fù)溶液，混合30s；7、取50μl用于分析。樣本稀釋倍數(shù)：2蜂蜜1、取1g蜂蜜，加６ml乙腈-0.1MHCL溶液振蕩至蜂蜜全部溶解；2、加入３ml0.05MPB緩沖液，加入11ml二氯甲烷，振蕩5min，4000r/min以上離心5min；3、輕吸掉上層，取下層有機(jī)相８ml至干燥溶器中，56℃氮?dú)獯蹈桑?、用1ml稀釋后的復(fù)溶液溶解干燥的殘留物，再加入正己烷1ml混合30s，3000r/min以上，15℃離心5min；5、去除上層取下層50μl液體用于分析。稀釋倍數(shù)：2注：在使用國(guó)家規(guī)定最高殘留限量（100ppb）進(jìn)行判定時(shí)，需進(jìn)行10倍稀釋（1份樣本液+9份已稀釋好的復(fù)溶液）?！久笜?biāo)免疫分析程序】操作步驟：1、將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

3、編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品均需做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔的樣本孔所在的位置。4、加標(biāo)準(zhǔn)品50μl/孔50μl/孔酶標(biāo)記物；再加50μl/孔抗體工作液。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，2530min。5、取出用洗滌液按每孔25μ洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。6、顯色：每孔加入底物液A液50μl再加B液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境避光顯色15min。7、測(cè)定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀450nm處（450/630nm5min數(shù)據(jù)），測(cè)定吸光度值（OD值）?！窘Y(jié)果判定】結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與洛美沙星的含量成負(fù)相關(guān)。1、粗略判定用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)品比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)10.2382的吸光度值為0.9461.8450.1ppb0.3ppb為1.130；0.9ppb為0.635；2.7ppb為0.326；8.1ppb為0.15612.7ppb-8.1ppb2是0.3ppb-0.9ppb。乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中洛美沙星的實(shí)際濃度。2、定量分析或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)）100%，即

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以洛美沙星標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中洛美沙星的實(shí)際濃度。若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來(lái)電索取）3、標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲線：B/B0(%)0.1 0.3 0.9 2.7 8.1(ppb)[μg/kg]圖1：洛美沙星檢測(cè)試劑盒的回歸曲線4、再現(xiàn)性：%CV 2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。【有效期】有效期12個(gè)月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號(hào)見(jiàn)外包裝。0 0.1 0.3 0.9 2.7 8.1(ppb)[μg/kg]圖2：洛美沙星檢測(cè)試劑盒的精密度2對(duì)相應(yīng)洛美沙星濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。【注意事項(xiàng)】6、使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒(méi)有回到室溫（20-25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。7、在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。8、混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。9、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。10、不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒，稀釋