結(jié)核分枝桿菌耐藥檢測技術(shù)選擇——分子線形探針方法

MDR-TB結(jié)核病患者感染的結(jié)核分枝桿菌體外被證實至少對異煙肼/利福平耐藥XDR-TB耐藥型TB的特殊形式，由于結(jié)核分枝桿菌對異煙肼、利福平、任何氟喹諾酮類，以及可注射的抗TB藥物卡那霉素、卷曲霉素、阿米卡星、鏈霉素中的至少1種有耐藥性耐藥結(jié)核分枝桿菌機制基因突變結(jié)核分枝桿菌產(chǎn)生耐藥性的主要原因藥物外排泵的影響結(jié)核分枝桿菌細胞壁結(jié)構(gòu)的改變耐藥產(chǎn)生的主要原因微生物上，耐藥性是基因突變引起藥物對突變株的效力降低造成的。臨床及管理上，不足夠的或不恰當?shù)闹委煂?dǎo)致結(jié)核病患者體內(nèi)的耐藥突變株變成優(yōu)勢株。2012年TB流行情況全球（Global

TuberculosisReport2013）TB約有860萬MDR-TB：45萬3.6%新發(fā)結(jié)核病，20%復(fù)治結(jié)核病患者XDR-TB：約有9.6%MDR-TB中國（Tuberculosisprofile

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China,2013）TB：90萬MDR-TB：6萬2012中國MDR-TB流行情況TuberculosisProfileinChina,2012/sree/Reports?op=Replet&name=%2FWHO_HQ_Reports%2FG2%2FPROD%2FEXT%2FTBCountryProfile&ISO2=CN&LAN=EN&outtype=pdf中國耐藥流行情況中國，異煙肼耐藥率位居第一。全國第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查資料匯編中國耐藥流行情況中國單耐藥中，單耐異煙肼的患者最多中國衛(wèi)生部2009年，中國衛(wèi)生部疾病預(yù)防控制局和梅里?；饡诰┞?lián)合舉辦了“耐多藥結(jié)核病診斷技術(shù)研討會”(主要邀請各地疾病預(yù)防控制中心)分別于2007年和2012年與衛(wèi)生部簽署了結(jié)核病防控項目中蓋項目耐多藥結(jié)核鑒定藥敏分子檢測系統(tǒng)的選擇利福平檢測不能替代MDR檢測中國是TB和MDR-TB高負擔(dān)國家；異煙肼耐藥率居首耐多藥快速診斷需要同時對異煙肼和利福平進行耐藥檢測WHO政策聲明?…有充分的總括性證據(jù)證明關(guān)于在國家特定情況下快速篩查MDR-TB使用線性探針方法的建議的合理性。“耐多藥結(jié)核分枝桿菌快速藥敏檢測

HAIN

GenoTypeMTBDRplusGenoTypeMTBDRplus：一種基于DNASTRIP技術(shù)的線性探針方法。WHO推薦：參比級和地方級選擇線性探針方法應(yīng)用于較高級別的專業(yè)實驗室。2023/2/1LPA基本原理預(yù)先標記的擴增產(chǎn)物被固定在硝化纖維試紙條上的DNA探針所捕獲，并使用比色法檢測后，結(jié)果以線性條帶形式顯現(xiàn)耐多藥結(jié)核分枝桿菌快速藥敏檢測GenoTypeMTBDRplus基于線形探針技術(shù)

（2008年WHO認可）簡便快捷，6小時得到結(jié)果樣本要求:固體或液體培養(yǎng)物;臨床痰標本與傳統(tǒng)藥敏檢測結(jié)果相比，符合率較高2023/2/1GenoTypeMTBDRplus

檢測結(jié)果快速檢測結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（MTBC）檢測利福平和/或異煙肼的耐藥性（單耐或MDR）檢測異質(zhì)性耐藥

HAIN試劑盒GenoType-DNASTRIP技術(shù)2023/2/121DNA提取PCR反向雜交結(jié)果分析

雜交儀（手工,12條）TwinCubator?（可做12個條）

雜交儀（全自動,48條）GenoType系列產(chǎn)品可在同一平臺（基于同一種技術(shù)——DNASTRIP技術(shù)）完成：6種MTBC和30種NTM鑒定，MDR-TB和XDR-TB藥敏檢測。GenoTypeMTBDRplus是Genotype系列產(chǎn)品之一，是一種可同時鑒定MTBC和檢測RFP和/或INH耐藥情況的分子遺傳學(xué)方法。2023/2/124世界衛(wèi)生組織在南非、印度及俄羅斯這些結(jié)核病高發(fā)區(qū)，對比評估分子線性探針與傳統(tǒng)方法結(jié)果顯示分子線性探針對涂陽標本的靈敏度和特異性高于97%和98%，肯定了快速檢測對控制耐多藥結(jié)核傳播的價值。分子線性探針雖然未能完全取代傳統(tǒng)培養(yǎng)，特別涂陰標本必須做培養(yǎng)，但這種新技術(shù)大縮短等候的時間、省略繁瑣的操作流程，并提高了檢測中的生物安全性?？焖贆z測方法與傳統(tǒng)方法對比

傳統(tǒng)法快速法實驗方法PNB/TCH鑒別比例法/絕對濃度法藥敏實驗GenoTypeMTBDRplus樣本要求固體培養(yǎng)物固體培養(yǎng)物涂陽標本或培養(yǎng)物（固體/液體）功能鑒別MTB、M.bovis和NTM一二線藥物耐藥情況同時鑒定MTBC和利福平和/或異煙肼耐藥情況，可確定是否為單耐或MDR時間4-8周4-8周6小時工作強度較大大，一般8種藥物最多可以完成30個樣本/人/天小，Twincubator是12份樣本規(guī)格，全自動GTBlot48是48跟樣品規(guī)格結(jié)果判讀BSL3/2，肉眼讀