實訓四阿司匹林腸溶片的含量測定高效液相色譜法基本理論知識高效液相色譜儀的組成高效液相色譜儀的操作實訓操作：高效液相色譜法測定阿司匹林腸溶片的含量液相色譜：經典液相色譜法

高效液相色譜法高效液相色譜法經典柱色譜法高壓輸送流動相無外加壓力固定相粒度小、分布均勻固定相粒度大、分布不均色譜柱長度固定，內徑小色譜柱長度差別大，內徑大安裝了在線檢測器未安裝在線檢測器分離效能高，分析速度快分離效能低，分析速度慢高效液相色譜法的特點一、固定相：填充劑1.特點：顆粒細且均勻傳質快機械強度高，能耐高壓化學穩(wěn)定性好，不與流動相發(fā)生化學反應高效液相色譜的基本原理2.化學鍵合相：用化學反應的方法將固定液的官能團鍵合在載體表面，多用硅膠作為載體。（1）非極性鍵合相非極性烴基，如C18﹑C8﹑C1與苯基等鍵合在硅膠表面。用于反相色譜。ODS鍵合相（2）弱極性鍵合相醚基和二羥基等鍵合相用于反相或正相色譜（3）極性鍵合相：常用氨基﹑氰基鍵合相（氰乙硅烷基≡Si(CH2)2CN)鍵合硅膠一般用于正相色譜3.化學鍵合相的特點使用過程中不流失化學穩(wěn)定性好適于梯度洗脫載樣量大注意：流動相的pH一般應在2-8，否則會引起硅膠溶解。二、流動相：洗脫劑1.要求與固定相不發(fā)生化學反應對試樣有適宜的溶解度純度高，粘度小。與檢測器相適應。2.流動相對分離的影響n由色譜柱（固定相）性能決定α主要受溶劑種類的影響，α=K2/K1=k2/k1k受溶劑配比的影響。

3.洗脫方式等度洗脫（等濃度洗脫）

流動相所用的溶劑種類與配比恒定。梯度洗脫

在一定分析周期內，按一定程序，不斷改變流動相的濃度配比。提高分離效果。4.流動相的強度和選擇性流動性的極性與洗脫能力正相色譜：溶劑極性越強，洗脫能力越強反相色譜：極性弱的溶劑洗脫能力強反相色譜首選純溶劑：甲醇、乙腈和水的組合。三、反相鍵合相色譜的分離條件固定相非極性鍵合相，如ODS流動相以水為基礎溶劑，加入甲醇、乙腈等極性調節(jié)劑弱酸、弱堿或緩沖鹽作為離子抑制劑加入0.1%－1%的醋酸鹽、磷酸鹽可減少殘余硅醇基的作用儲液罐控制系統(tǒng)脫氣泵進樣閥色譜柱檢測器收集器數據處理系統(tǒng)自動進樣儀器的重要組件高壓輸液泵輸送流動相柱塞往復泵多元梯度洗脫裝置進樣器六通進樣閥自動進樣器色譜柱高效液相色譜系統(tǒng)中最重要的組件包括柱管和固定相主要柱參數：柱長、柱內徑、粒徑檢測器紫外檢測器（UV）：應用最為普遍固定波長、可變波長、二極管陣列（DAD）蒸發(fā)光散射檢測器：ELSD儀器的操作過濾溶劑、流動相并超聲脫氣排氣（開關、溶劑沖洗、Drain旋鈕、Purge）溶劑、流動相沖柱（更換溶劑時要重新排氣）打開檢測器和色譜工作站（設置參數）進樣（過濾、反復潤洗進樣針、旋轉手柄）記錄數據（保留時間、峰面積）平衡系統(tǒng)關閉儀器溶劑過濾裝置PowerDrain(Open)PurgePumpPower實訓操作腸溶片：查閱藥典（色譜條件；方法）乙腈沖柱0.5h，流動相沖柱0.5h，進樣供試品，對照品的配制記錄峰面積乙腈：水（10：90）沖柱1h，乙腈沖柱0.5h實驗數據測定波長（nm）流速（ml/min）進樣量（μl）停止時間（min）流動相組成27611015保留時間（min）峰面積對照品

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供試品

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