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文檔簡介

影響核酸電泳的因素：1．核酸的性質(zhì)2．凝膠孔徑的大小3．電場強度和電場方向4．電泳環(huán)境緩沖液的組成和離子強度直接影響遷移率。核酸電泳的指示劑：核酸電泳常用的指示劑有兩種：⑴溴酚藍⑵二甲苯青，

DNA的瓊脂糖凝膠電泳

引言：瓊脂糖主要從海洋植物瓊脂中提取來的，為一種聚合線性分子，一般含有多糖、蛋白質(zhì)和鹽等雜質(zhì)，雜質(zhì)的含量每個廠商和批號的產(chǎn)品不盡相同。對DNA電泳遷移率的影響也不一樣，經(jīng)化學修飾后熔點降低的瓊脂糖叫低熔點瓊脂糖，其機械強度無明顯變化，主要用于DNA的限制酶原位消化、DNA片段回收以及小DNA片段（10～500bP）的分離。瓊脂糖凝膠的孔徑取決于瓊脂糖的濃度。

【實驗目的】

掌握DNA瓊脂糖凝膠電泳的原理和操作方法。

【實驗原理】

DNA分子帶負電荷，在電場中受到電荷效應、分子篩效應向正極移動過程中，因DNA分子的大小及構象差別而呈現(xiàn)遷移位置上的差異，對于線形DNA分子，其電場中的遷移率與其相對分子質(zhì)量的對數(shù)值成反比，電泳時加溴化乙錠，其與DNA結合形成一種熒光絡合物，在254～365nm紫外光照射下可產(chǎn)生桔紅色的熒光，可用于檢測DNA（此法可觀察到凝膠中2ng的DNA）。如有必要可從凝膠回收DNA片段，用于分子克隆或探針標記等操作。瓊脂糖可制成不同孔徑的凝膠，分離DNA的范圍廣，約200bp～50kb。【實驗材料】1．電泳儀。2．電泳槽。3．紫外透射儀。4．試劑【實驗方法】1．瓊脂糖凝膠板的制備將1～2%瓊脂糖凝膠加熱溶化均勻，冷卻到60～70℃加EB至濃度0.5μg/ml，倒入封好的凝膠槽，厚度約3～5mm，在距底板0.5～1mm的位置放置樣品梳，檢查梳子齒間有無氣泡，可用吸管小心吸出氣泡，待冷卻成形后取出梳子及隔板，放入水平電泳槽中，緩沖液淹沒過膠1～2mm為止。2．加樣樣品中加1/5體積的上樣緩沖液，混勻，取10～15μl加入凝膠點樣孔中，同時要設立合適的DNA相對分子質(zhì)量標準物。3．電泳電壓＜10V/cm，電泳至溴酚藍移出樣品槽到凝膠板的2/3距離時，關閉電源。4．取出凝膠塊，置紫外透射反射分析儀上觀察，即可見桔紅色DNA區(qū)帶?！緦嶒炈伎肌?．影響DNA片段瓊脂糖

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