ICS.11.220B41中華人民共和國國家標準GB/T18649—2002牛傳染性胸膜肺炎(牛肺疫)診斷技術(shù)Diagnostictechniquesforcontagiousboyineepleuropneumonia2002-02-19發(fā)布2002-05-01實施中華：人民共；和國發(fā)布國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

中華人民共和國國國家標準牛傳染性胸膜肺炎(牛肺疫)診斷技術(shù)GGB/T18649-2002中中國標準出版社出版發(fā)行北京西城區(qū)復興門外三里河北街16號郵郵政編碼：100045電話：63787337、637874472002年7月第一版2004年11月電子版制作書號：155066·1-18548版權(quán)專有侵權(quán)必究舉報電話：（010)68533533

GB/T18649-2002牛肺疫是由絲狀支原體絲狀亞種(PG1)引起的一種牛屬動物的傳染病。健康牛和病牛接觸由呼吸道吸入病牛的“飛沫".是本病的主要傳染方式和感染途徑。暴發(fā)流行時多呈急性病演，呼吸系統(tǒng)癥狀非常明顯，體溫在41C以上稽留。但在病的常在地區(qū)多見亞急性和慢性病程，以地方流行性為特點。急性期病變?yōu)闈{液滲出性纖維素性胸膜肺炎，肺間質(zhì)多孔多汁,肺小葉出現(xiàn)各期肝變、多色，呈大理石樣肺，肺胸膜和肋胸膜粘連·以及胸腔滲出液大量留為特征。轉(zhuǎn)為慢性后逐漸形成肺包膜或壞死塊。慢性病牛長期帶菌，成為隱蔽的傳染源。在新發(fā)的地區(qū)對此病的檢驗應采取流行病學、臨床學、血清學、病理學和病原學綜合診斷方法為宜世界動物衛(wèi)生組織WorldOrganizationforAnimalHealth(英）.OfficeintentionaldesEpizootic(法），OIEJ于1986年和1992年推薦采用稍加改進的Campbell和Turner的補體結(jié)合試驗作為牛肺疫血清學診斷的方法，但常出現(xiàn)非特異性反應。新中國成立后一直采用補體結(jié)合試驗檢驗牛肺疫，并于1979年將該法列入農(nóng)業(yè)部頒布的《動物檢疫操作規(guī)程》中·但這種方法常出現(xiàn)1%～2%非特異性反應。近年來我國研制成功了特異性高的微量凝集反應檢驗方法,它不但降低了非特異性反應率，而且操作簡便，容易判定.應用效果良好。病原學診斷主要取病牛肺臟.胸腔滲出液和肺門淋巴結(jié)接種馬丁培養(yǎng)基，即可分離出牛肺疫病原體，此法對急性期病例的檢出率可達100%。本標準的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D、附錄E都是標準的附錄本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。本標準由全國動物檢疫標準化技術(shù)委員會歸口。本標準起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所本標準主要起草人：白文彬

中華人民共和國國家標準GB/T18649-2002牛傳染性胸膜肺炎(牛肺疫)診斷技術(shù)Diagnostictechniguesforcontagiousbovinepleuropneumonia1范圍本標準規(guī)定了牛傳染性胸膜肺炎的病原學檢查、補體結(jié)合試驗、微量凝集試驗診斷技術(shù)要求。本標準適用于生傳染性胸膜腦炎的檢驗。病原學檢查活用于急性、亞急性及慢性病生分離病原體補體結(jié)合試驗和微量凝集試驗適用于牛肺疫抗體的檢測。病原學檢查211材料準備培養(yǎng)基：10%馬血清馬丁肉湯.10%馬血清馬丁瓊脂見附錄A(標準的附錄）。2.2病料采集2.2.1用滅苗器械(剪刀、鍛子、吸管、青霉素瓶等)無菌采集肺臟、胸腔滲出液、肺門淋巴結(jié),并將肺病科剪成3cm～5cm方塊。胸部淋巴結(jié)，以整個淋巴結(jié)為好，胸腔滲出液用吸管吸入青霉素瓶內(nèi)。2.2.2受檢病料的保存：肺和淋巴結(jié)保存在用茶色廣口瓶盛裝的滅菌的40%～50%甘油生理鹽水中，胸腔滲出液不加任何保存液。病料均放入冰箱內(nèi)保存，并應盡快送往實驗室檢驗2.3培養(yǎng)方法在無菌條件下剪肺病料或淋巴結(jié)小塊，用鉑金耳釣人10%馬血清馬丁肉湯內(nèi);胸腔滲出液用滅菌吸管吸取0.1mL～0.3ml接種于馬丁肉湯中即可。同時取剪碎病料小塊或直接取胸腔滲出液·用鉑金耳在10%馬血清馬丁瓊脂培養(yǎng)血上劃線接種,培養(yǎng)血用膠布封口,置37C～38C培養(yǎng)，每天觀察一次5d~7d后判定。2.4結(jié)果判定2.4.1培養(yǎng)特征培養(yǎng)性狀和菌落形態(tài)：牛肺疫病原微生物在10%馬血清馬丁肉湯內(nèi)生長初期呈輕微混濁或呈白色點狀、絲狀生長·以后逐漸均勾混濁，半透明稍帶乳光，不產(chǎn)生菌膜或沉淀.也無顆粒懸浮。在10%馬血清馬丁瓊脂培養(yǎng)血上生長退緩,為極小的水滴狀圓形略帶灰色的微細菌落.中央有乳頭狀突起。菌落直徑約0.2mm～0.5mm,小的不易看見，需用放大鏡或低倍顯微鏡觀察。染色鏡檢取馬丁肉湯培養(yǎng)物涂片放溫箱中干燥.后在酒精燈上輕微火焰固定.再用3%～5%絡(luò)酸蒸留水溶液固定1min～2min,水洗，浸入用蒸留水稀釋的1：30的姬姆薩氏染液中染色，染片時染色缸放入普通冰箱內(nèi)過夜，染色后取出用蒸留水輕洗，自然干燥后用800～1000倍顯微鏡觀察。菌形為多形態(tài)，以球點形最常見，大小在125nm～250nm.2.4.2生化特性糖發(fā)酵試驗.1取蛋白陳水(pH7.8～8.0)100mL·氯化鈉0.5g