沉淀反應(yīng)(precipitationreaction)概念：

可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在電解質(zhì)存在，兩者比例恰當時，可出現(xiàn)肉眼可見的沉淀現(xiàn)象。

Ag沉淀原Ab

沉淀素(precipitin)實驗中為使抗原抗體比例（數(shù)量）恰當，應(yīng)稀釋Ag分類：液體內(nèi)沉淀反應(yīng)：絮狀沉淀試驗、環(huán)狀沉淀試驗免疫濁度測定法凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)：雙向瓊脂擴散試驗、單向瓊脂擴散試驗等凝膠免疫電泳：免疫電泳、對流免疫電泳、火箭免疫電泳等一.液體內(nèi)沉淀試驗（一）絮狀沉淀反應(yīng)

(flocculation)抗原、抗體特異性結(jié)合，在電解質(zhì)存在的情況下出現(xiàn)肉眼可見的絮狀/塊狀沉淀既可在試管內(nèi)進行，也可在玻片上進行。用于：玻片法常用于定性測定

試管法:半定量測定在沉淀反應(yīng)前，應(yīng)測試抗原、抗體間最適比例，方法有抗原稀釋法、抗體稀釋法、方陣滴定等。方陣最適比測定抗體抗原稀釋度稀釋度———————————————————1/101/201/401/801/1601/3201/6401/1280對照

1/5++++++++++++±－－

1/10+++++++++++++－－

1/20++++++++++++－－

1/40－±++++++++++－

1/80－－－－++++－（二）環(huán)狀沉淀反應(yīng)方法：在環(huán)沉管（0.2×3cm)中進行。

先加已知Ab，再加待測Ag。靜置30min后觀察Ag、Ab液面交界處是否有白色沉淀環(huán)，若有，為陽性）。用途：用于微量抗原檢測（法醫(yī)學上血跡鑒定等）

環(huán)狀沉淀試驗1.毛細玻管，內(nèi)徑1.5~2mm2.下層置血清（Ab），上層加Ag（不能顛倒）抗原、抗體相對應(yīng)，比例適當，即形成沉淀環(huán)（三）免疫濁度測定(immunoturbidimetry)免疫濁度測定原理可溶性Ag與相應(yīng)Ab特異性結(jié)合，二者在比例合適及增濁劑PEG作用下，可快速形成AgAb復(fù)合物，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。使用濁度計檢測相應(yīng)濁度，濁度高低與復(fù)合物含量成正比。繪制標準曲線，根據(jù)濁度推算樣品中Ag含量。優(yōu)點：敏感、快速、定量測定

免疫濁度測定的影響因素Ag/Ab的比例：Ag/Ab比例合適是形成濁度的關(guān)鍵。

Ag過剩，形成的IC分子小，易發(fā)生再解離，使?jié)岫取?/p>

Ab過剩，出現(xiàn)前帶現(xiàn)象至等價帶Ab的質(zhì)量：特異性強（不出現(xiàn)交叉反應(yīng)）；效價高（＜1:20易產(chǎn)生非特異性濁度）；與Ag親和性強Ag/Ab反應(yīng)的環(huán)境：

合適的PH6.5~8.5；離子強度大（PBS作為反應(yīng)液）增濁劑（促聚劑）：PEG、Tween-20可促進IC快速形成免疫比濁方法分類

透射免疫比濁散射免疫比濁膠乳免疫比濁1.透射免疫比濁法原理：

緩沖液中，先加入已知過量Ab，然后加入待測Ag，AgAb復(fù)合物的量隨Ag量的增加而增加，反應(yīng)液的濁度亦隨之增加，與一系列標準品對照，即可算出未知Ag含量。優(yōu)點：該法操作方便、檢測快速。臨床上多用于檢測IgG、IgA、IgM、C3、C反應(yīng)蛋白（CRP）等。缺點：所需Ag/Ab量大。

2.膠乳免疫比濁法原理：

將已知Ab吸附在大小適中、均勻一致的膠乳顆粒上，當遇到相應(yīng)Ag時，使膠乳顆粒發(fā)生凝集，減少透光度。透光度減少程度與膠乳凝聚成正比，當然也與Ag量成正比。本法不易選擇適用的乳膠，同時Ab與膠乳結(jié)合也困難。二.凝膠內(nèi)沉淀試驗

在凝膠介質(zhì)（瓊脂、瓊脂糖、聚丙烯酰胺凝膠）中進行的沉淀反應(yīng)原理

可溶性抗原與相應(yīng)抗體在電解質(zhì)存在下，在瓊脂基質(zhì)中擴散，當兩者相遇，比例恰當時結(jié)合，可出現(xiàn)肉眼可見的沉淀線/沉淀環(huán)。（一）雙向瓊脂擴散試驗

（簡稱雙擴

doubleimmunodiffusion)方法：制瓊脂板(3ml1.5%NS瓊脂）打孔（雙孔型/三角孔型/梅花孔型）加樣（平孔沿加滿）擴散（37C、24h觀察結(jié)果）

雙向瓊脂擴散試驗抗原抗體抗原抗體結(jié)合沉淀線用途：1.已知Ag或Ab檢測未知Ab或Ag的濃度及分子量：雙孔型2.抗原性質(zhì)分析：三角孔型3.測Ag有效稀釋度或

Ab的效價：梅花孔型4.鑒定Ag或Ab純度：一條沉淀線，純；多條沉淀線，不純測未知抗原或抗體：雙孔型

抗原性質(zhì)分析：三角孔型

測Ag有效稀釋度：梅花孔型優(yōu)點：簡單、易行，用途廣缺點：

敏感性低出結(jié)果慢只定性，不能精確定量（半定量）（二）單向瓊脂擴散試驗(簡稱單擴

singleimmunodiffusion)方法：

已知定量Ab+瓊脂制板、打孔在瓊脂板小孔中加入待測的梯度AgAg向四周擴散形成沉淀環(huán)

Ag濃度與沉淀環(huán)直徑呈線性關(guān)系繪制標準曲線

從標準曲線上查出并計算待測標本含量12345待測標本單向瓊脂擴散試驗Ag的沉淀環(huán)注：1~5孔為抗原不同梯度形成的免疫沉淀環(huán)沉淀環(huán)直徑cmAg含量（濃度）單向瓊脂擴散試驗標準曲線圖Ag濃度沉淀環(huán)直徑用途：定量測定抗原，如測IgG、IgA、IgM、C3等含量

三.免疫電泳技術(shù)(agargelimmunoelectrophoresis)在電場作用下進行的凝膠擴散電泳技術(shù)：帶電膠體顆粒在電場中向相反電極泳動，利用電泳現(xiàn)象研究某些化學組分的分離技術(shù)免疫電泳技術(shù)的優(yōu)點：1.加快反應(yīng)速度2.規(guī)定了抗原、抗體擴散方向，提高反應(yīng)敏感度3.可將某些帶電性不同的蛋白組分先分開，再與抗體進行抗原抗體反應(yīng)影響電泳的因素：1.與溶液的pH有關(guān)：常用pH8~9，蛋白質(zhì)帶負電2.與溶液離子強度有關(guān)：愈高，泳動慢，一般0.02~0.2M3.與電場強度有關(guān)：愈高，愈快，一般4~6v/cm（瓊脂長），約40v左右4.電滲作用的影響電滲作用：電場中液體對于一固體的固定相對移動的現(xiàn)象。電滲方向與電泳方向相反。

（一）對流免疫電泳（counter-immunoelectrophoresis)原理：定向加速的免疫雙擴

（雙擴＋電場，使抗原、抗體相對泳動）方法：

抗原、抗體分別在瓊脂板上不同孔內(nèi)，抗原在負極端，抗體在正極端，電泳。電壓：4~6v/cm(瓊脂長度）電泳時間：45分鐘~1小時-抗原抗體對流免疫電泳PH：8.6BB緩沖液

Ag：-，借助電泳由負向正極運動；

Ab：-少，分子大，重，電泳慢，因電滲反而由正向負極運動。優(yōu)點、用途：

簡便、快速；反應(yīng)敏感度達μg/ml

常用于Ag/Ab的效價及純度鑒定（二）火箭免疫電泳（rocketimmunoelectrophoresis)原理：

單擴＋電場，為定量試驗方法：

已知定量Ab+瓊脂混合，制板在玻板一端打孔、加梯度Ag

電泳根據(jù)所知樣品梯度含量繪制標準曲線

查出待測樣品含量-+火箭免疫電泳12345待測優(yōu)點與用途：

與單擴相同，已知Ab定量檢測Ag（IgG/IgA/IgM），時間短，敏感度高（ng/ml）。（三）免疫電泳（immunoelectrophoresis)

多用于分析復(fù)雜抗原組分原理：

Ag區(qū)帶電泳＋雙擴結(jié)合方法：

1.Ag電泳分出區(qū)帶

2.Ag、Ab免疫雙擴用途：常用于分析復(fù)雜Ag的組分。（如人全血清組分的分析）-+病人血清中缺少這條沉淀線雙擴時加Ab的小槽人血清免疫電泳后的結(jié)果（有的病人缺少某一條沉淀線，有的病人會出現(xiàn)多一條不該有的沉淀線，均為異常）正常人血清病人血清優(yōu)點：

用樣品量小特異性高分辨力強缺點：

由于復(fù)雜抗原中各成分含量差異大，不能全部顯出，敏感性不高。用途：

分析復(fù)雜抗原組分