犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國國家標準

犌犅／犜２１６７４—２００８

豬圓環(huán)病毒聚合酶鏈反應試驗方法

犇犲狋犲犮狋犻狀犵狆狅狉犮犻狀犲犮犻狉犮狅狏犻狉狌狊狑犻狋犺狆狅犾狔犿犲狉犪狊犲犮犺犪犻狀狉犲犪犮狋犻狅狀

２００８０４０９發(fā)布２００８０６０１實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

書

犌犅／犜２１６７４—２００８

前言

本標準附錄Ａ為規(guī)范性附錄。

本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。

本標準由全國動物防疫標準化技術(shù)委員會歸口。

本標準起草單位：農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)診斷中心。

本標準主要起草人：田克恭、王宏偉、孫明、王傳彬、陳西釗。

Ⅰ

書

犌犅／犜２１６７４—２００８

引言

豬圓環(huán)病毒依據(jù)其致病性和基因組差異分為無致病性的豬圓環(huán)病毒Ⅰ型（ｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅｌ，

ＰＣＶ１）和有致病性的豬圓環(huán)病毒Ⅱ型（ｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２，ＰＣＶ２）。ＰＣＶ２是引發(fā)仔豬斷奶后多

系統(tǒng)衰弱綜合征（ｐｏｓｔｗｅａｎｉｎｇｍｕｌｔｉｓｙｓｔｅｍｗａｓｔｉｎｇｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＰＭＷＳ）的主要病原。該病主要以患畜

生長遲緩、進行性消瘦和多系統(tǒng)病理損傷為特征，給世界各國主要養(yǎng)豬地區(qū)的規(guī)?；B(yǎng)豬業(yè)造成了一定

的經(jīng)濟損失。

Ⅱ

犌犅／犜２１６７４—２００８

豬圓環(huán)病毒聚合酶鏈反應試驗方法

１范圍

本標準規(guī)定了豬圓環(huán)病毒（ＰＣＶ）聚合酶鏈反應（ＰＣＲ）檢測方法的技術(shù)要求。

本標準適用于豬血清和組織中的豬圓環(huán)病毒檢測，以及其Ⅰ型（ＰＣＶ１）和Ⅱ型（ＰＣＶ２）的鑒別。

２實驗室生物安全要求

試驗操作應在生物安全Ⅱ級（ＢＳＬ２級）以上的實驗室進行。

３實驗材料、儀器設(shè)備和試劑

３．１實驗材料

眼科剪、眼科鑷、稱量紙、１０ｍＬ一次性注射器、１．５ｍＬ滅菌離心管、０．２ｍＬ薄壁ＰＣＲ管、瓊脂糖、

５００ｍＬ量筒、５００ｍＬ錐形瓶、吸頭（１０μＬ、２００μＬ、１０００μＬ）、滅菌雙蒸水。

３．２儀器設(shè)備

分析天平、高速離心機、真空干燥器、ＰＣＲ擴增儀、電泳儀、電泳槽、紫外凝膠成像儀（或紫外分析

儀）、液氮罐或－７０℃冰箱、微波爐、組織研磨器、－２０℃冰箱、水浴鍋、可調(diào)移液器（最大量程為２μＬ、

２０μＬ、２００μＬ、１０００μＬ）。

３．３試劑

本標準所用試劑，除特殊標注外，均為分析純。

３．３．１消化液（見第Ａ．１章）。

３．３．２２％蛋白酶Ｋ溶液（見第Ａ．２章）。

３．３．３酚三氯甲烷異戊醇混合液（見第Ａ．３章）。

３．３．４２．５ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ（見第Ａ．４章）。

３．３．５１０ｐｍｏｌ／μＬＰＣＶ引物（見第Ａ．５章）。

３．３．６０．５Ｕ／μＬＴａｑＤＮＡ聚合酶（見第Ａ．６章）。

３．３．７１０倍ＰＣＲ緩沖液（見第Ａ．７章）。

３．３．８溴化乙錠（ＥＢ）溶液（見第Ａ．８章）。

３．３．９電泳緩沖液（５０倍）（見第Ａ．９章）。

３．３．１０１％瓊脂糖凝膠（見第Ａ．１０章）。

３．３．１１上樣緩沖液（見第Ａ．１１章）。

３．３．１２異丙醇。

３．３．１３７５％乙醇（見第Ａ．１２章）。

３．３．１４１５ｍｍｏＬ／Ｌ氯化鎂（見第Ａ．１３章）。

３．３．１５滅菌雙蒸水（見第Ａ．１４章）。