標準解讀
《GB/T 23874-2009 飼料添加劑木聚糖酶活力的測定 分光光度法》是一項國家標準,旨在提供一種基于分光光度計測量飼料添加劑中木聚糖酶活性的方法。該標準適用于以木聚糖為底物,在特定條件下通過測定還原糖生成量來間接反映木聚糖酶活力大小。
根據(jù)標準內容,實驗過程主要包括以下幾個步驟:
- 樣品處理:首先需要準備待測樣品溶液,通常要求將樣品溶解于適宜緩沖液中。
- 反應條件設定:定義了酶促反應的具體條件,包括pH值、溫度以及反應時間等參數(shù)。
- 酶解反應:在上述確定條件下,讓樣品中的木聚糖酶與底物(通常是某種形式的木聚糖)進行充分接觸并發(fā)生酶解作用。
- 產(chǎn)物檢測:采用分光光度法測量反應后產(chǎn)生的還原糖含量。此過程中可能需要用到DNS(二硝基水楊酸)試劑或其他能夠與還原糖發(fā)生顏色反應的物質作為顯色劑。
- 計算酶活力:依據(jù)標準曲線或直接從吸光度讀數(shù)換算出單位體積內樣品所含有的木聚糖酶活性單位數(shù)。
整個測定過程中需要注意控制好各種變量,確保實驗結果準確可靠。此外,還需按照標準規(guī)定正確使用儀器設備,并嚴格遵守安全操作規(guī)程。
如需獲取更多詳盡信息,請直接參考下方經(jīng)官方授權發(fā)布的權威標準文檔。
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2009-05-26 頒布
- 2009-10-01 實施
文檔簡介
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中華人民共和國國家標準
犌犅/犜23874—2009
飼料添加劑木聚糖酶活力的測定
分光光度法
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20090526發(fā)布20091001實施
中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局
發(fā)布
中國國家標準化管理委員會
書
犌犅/犜23874—2009
前言
本標準的附錄A為資料性附錄。
本標準由全國飼料工業(yè)標準化技術委員會提出并歸口。
本標準由中國農業(yè)大學農業(yè)部飼料工業(yè)中心、武漢新華揚生物有限公司、廣東溢多利生物技術股份
有限公司負責起草。
本標準主要起草人:陸文清、曹云鶴、劉興海、詹志春、劉亞力、陳清華。
Ⅰ
書
犌犅/犜23874—2009
飼料添加劑木聚糖酶活力的測定
分光光度法
1范圍
本標準規(guī)定了用分光光度法測定飼料添加劑中木聚糖酶的活力。
本標準適用于飼料添加劑木聚糖酶產(chǎn)品,最低檢出量為10.0U/g。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有
的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本標準,然而,鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究
是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標準。
GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
3原理
木聚糖酶能將木聚糖降解成寡糖和單糖。還原性寡糖和單糖在沸水浴條件下可以與3,5二硝基
水楊酸(DNS)試劑發(fā)生顯色反應。反應液顏色的深度與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比,而還原糖的生成
量又與反應液中木聚糖酶的活力成正比。因此,通過分光比色測定反應液顏色的強度,可以計算反應液
中木聚糖酶的活力。
在37℃、pH為5.50的條件下,每分鐘從濃度為5mg/mL的木聚糖溶液中降解釋放1μmol還原
糖所需要的酶量為一個酶活力單位U。
4試劑與溶液
除特殊說明外,所用的試劑均為分析純,水均為符合GB/T6682中規(guī)定的二級水。
4.1氫氧化鈉溶液,濃度為200犵/犔
稱取氫氧化鈉20.0g。加水溶解,定容至100mL。
4.2乙酸溶液,濃度為0.1犿狅犾/犔
吸取冰乙酸0.60mL。加水溶解,定容至100mL。
4.3乙酸鈉溶液,濃度為0.1犿狅犾/犔
稱取三水乙酸鈉1.36g。加水溶解,定容至100mL。
4.4乙酸乙酸鈉緩沖溶液,濃度為0.1犿狅犾/犔,狆犎為5.50
稱取三水乙酸鈉23.14g,加入冰乙酸1.70mL。再加水溶解,定容至2000mL。測定溶液的pH。
如果pH偏離5.50,再用乙酸溶液(4.2)或乙酸鈉溶液(4.3)調節(jié)至5.50。
4.5木糖溶液(犆5犎10犗5),濃度為10.0犿犵/犿犔
稱取無水木糖1.000g,加乙酸乙酸鈉緩沖溶液(4.4)溶解,定容至100mL。
4.6木聚糖溶液,濃度為100犿犵/犿犔
稱取木聚糖(SigmaX06271))1.00g,加入0.32g氫氧化鈉,再加入90mL
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