第十九章微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制

質(zhì)量控制是指人們根據(jù)客觀條件的許可所制定的，實(shí)際可以達(dá)到的統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制，包括室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評(píng)價(jià)室內(nèi)質(zhì)量控制是由實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部制定并實(shí)施的，是質(zhì)量保證的核心和基礎(chǔ)。室間質(zhì)量評(píng)價(jià)是由實(shí)驗(yàn)室外部的組織或機(jī)構(gòu)對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

第一節(jié)室內(nèi)質(zhì)量控制

（一）人員與組織管理

具備扎實(shí)的微生物學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等理論知識(shí)專業(yè)化的實(shí)驗(yàn)技能培訓(xùn)配有一名經(jīng)嚴(yán)格訓(xùn)練并長期從事于微生物檢驗(yàn)的技術(shù)員，全面負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室的工作定期進(jìn)行新理論、新技術(shù)、新方法的業(yè)務(wù)學(xué)習(xí)，經(jīng)常組織疑難細(xì)菌鑒定討論會(huì)，提高業(yè)務(wù)水平（二）操作手冊(cè)包括：①實(shí)驗(yàn)室的規(guī)章制度各級(jí)人員的職責(zé)和權(quán)限；②實(shí)驗(yàn)室安全措施；③標(biāo)本采集和處理指南；④本室開展的檢驗(yàn)項(xiàng)目及最低鑒定要求；⑤培養(yǎng)基、試劑和染色劑的配制與保存；⑥質(zhì)量控制方案；⑦常用參考數(shù)據(jù)；⑧其他制度。（三）儀器設(shè)備的功能檢測

1．高壓滅菌器最好在滅菌器裝上溫度記錄裝置，以保證整個(gè)滅菌過程中保持合適的溫度。為了保證滅菌的徹底，可用生物指示劑嗜熱脂肪芽胞桿菌ATCC7953監(jiān)視滅菌效果。2．培養(yǎng)箱、冰箱、水浴箱應(yīng)在每日工作開始和結(jié)束時(shí)記錄溫度。3．二氧化碳培養(yǎng)箱每天檢查CO2含量。4．厭氧罐或厭氧箱美籃為指示劑，無氧時(shí)應(yīng)無色。5．生物安全柜更換濾網(wǎng)由專門技術(shù)人員進(jìn)行。6．細(xì)菌培養(yǎng)儀對(duì)每批培養(yǎng)瓶進(jìn)行生長試驗(yàn)。保證在有效期內(nèi)使用。7．微生物鑒定儀應(yīng)及時(shí)更新系統(tǒng)操作軟件，使之能識(shí)別最新認(rèn)識(shí)的微生物。（四）培養(yǎng)基的質(zhì)量控制培養(yǎng)基是分離培養(yǎng)微生物的必需品。培養(yǎng)基質(zhì)量的好壞，直接關(guān)系到分離培養(yǎng)的成敗。目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都使用干粉培養(yǎng)基配制或使用成品培養(yǎng)基。對(duì)來自著名的微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)公司的培養(yǎng)基，質(zhì)量比較穩(wěn)定。只要按照說明書的要求貯存，在有效期內(nèi)使用可獲得滿意效果。常用培養(yǎng)基質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基質(zhì)控菌株判定標(biāo)準(zhǔn)營養(yǎng)瓊脂金黃色葡萄球菌ATCC25923生長血瓊脂肺炎鏈球菌ATCC6305化膿性鏈球菌ATCC19615生長，α溶血生長，β溶血巧克力瓊脂淋病奈瑟菌ATCC

43069腦膜炎奈瑟菌ATCC13090流感嗜血桿菌ATCC10211生長生長生長中國藍(lán)瓊脂大腸埃希菌ATCC25922鼠傷寒沙門菌ATCC14028生長，藍(lán)色菌落生長，無色菌落麥康凱瓊脂大腸埃希菌ATCC25922奇異變形桿菌ATCC12453生長，紅色菌落無遷徙生長，無色菌落SS瓊脂大腸埃希菌ATCC25922鼠傷寒沙門菌ATCC14028不生長生長，中心黑色菌落（五）試劑、染色液及診斷血清質(zhì)量控制1．試劑及染色液注明配制日期，有效日期及貯存條件。測試同時(shí)進(jìn)行陽性和陰性對(duì)照試驗(yàn)。2．抗血清的質(zhì)量控制來源可靠，根據(jù)使用說明使用與保存。凍干制品還應(yīng)注明配成水溶液的日期；抗血清應(yīng)澄清；第一次使用時(shí)，應(yīng)用已知菌效價(jià)和特異性進(jìn)行測定，合格者方可使用。

（六）藥敏試驗(yàn)的質(zhì)量控制

抗菌藥物敏感試驗(yàn)是臨床進(jìn)行抗菌治療的指導(dǎo)性實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果的正確性直接關(guān)系到抗菌治療的成敗。常用有紙片法和稀釋法，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性極為重要。

舉例：紙片法質(zhì)量控制①質(zhì)控菌株有：金黃色葡萄球菌ATCC25923；大腸埃希菌ATCC25922；銅綠假單胞菌ATCC27853⑥抑菌環(huán)的質(zhì)控范圍：標(biāo)準(zhǔn)菌株的抑菌圈直徑在連續(xù)20個(gè)試驗(yàn)結(jié)果中只能有1個(gè)結(jié)果超出所列的范圍。⑦質(zhì)控測定次數(shù)：每批新的MH瓊脂和含藥紙片必須用質(zhì)控菌株進(jìn)行檢測30日，30個(gè)抑菌環(huán)直徑只有少于3個(gè)結(jié)果超出范圍。達(dá)到要求后，每周檢測一次。

（七）質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株1．標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源標(biāo)準(zhǔn)菌株是指具有典型的、穩(wěn)定的生理生化特征，并被國際社會(huì)所認(rèn)可的菌株。來源于專門的菌種保存供應(yīng)機(jī)構(gòu)，如衛(wèi)生部生物制品鑒定所菌種保藏中心（CMCC）。2．標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存（1）一般保存法將菌種于半固體培養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng)18h時(shí)后封蓋無菌石蠟油，置4℃冰箱保存。此法是最簡單的保存菌種方法，最長可保存一年。（2）快速冷凍保存法將細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中增菌取數(shù)環(huán)對(duì)數(shù)生長期的細(xì)菌加入含有小牛血清或無菌脫纖維羊血的培養(yǎng)基中再放入無菌玻璃珠數(shù)枚速凍后置-30℃以下低溫冰箱保存。此法可長期保存菌種。（3）真空冷凍干燥法

是最可靠的菌種保藏方法，它具有不改變菌種性狀和保存時(shí)間長等優(yōu)點(diǎn)，但需有專門的冷凍干燥設(shè)備。菌種保藏中心多用此法。

第二節(jié)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)：

是通過國內(nèi)負(fù)責(zé)室間質(zhì)量控制的機(jī)構(gòu)檢查各實(shí)驗(yàn)室的工作質(zhì)量，并接受國際檢驗(yàn)質(zhì)量控制機(jī)構(gòu)的質(zhì)量檢查。同時(shí)制訂符合本國國情且與國際標(biāo)準(zhǔn)相統(tǒng)一的質(zhì)量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。

（一）室間質(zhì)量評(píng)價(jià)機(jī)構(gòu)

我國負(fù)責(zé)此項(xiàng)工作的部門是衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心及各省、市、自治區(qū)的臨床檢驗(yàn)中心定期或不定期的向下一級(jí)實(shí)驗(yàn)室發(fā)放模擬臨床未知標(biāo)本，評(píng)價(jià)各實(shí)驗(yàn)室在病原體的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)等方面的質(zhì)量，對(duì)各實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行橫向比較發(fā)現(xiàn)問題并進(jìn)行指導(dǎo)和糾正。（一）室間質(zhì)量評(píng)價(jià)機(jī)構(gòu)我國負(fù)責(zé)此項(xiàng)工作的部門是衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心及各省、市、自治區(qū)的臨床檢驗(yàn)中心。定期或不定期的向下一級(jí)實(shí)驗(yàn)室發(fā)放模擬臨床未知標(biāo)本，評(píng)價(jià)各實(shí)驗(yàn)室在病原體的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)等方面的質(zhì)量，對(duì)各實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行橫向比較發(fā)現(xiàn)問題并進(jìn)行指導(dǎo)和糾正。（二）室間質(zhì)量評(píng)價(jià)方法日常臨床標(biāo)本檢驗(yàn)結(jié)果

評(píng)價(jià)指標(biāo)為細(xì)菌分離率和細(xì)菌耐藥率

定期評(píng)估

熟練程度的考核由質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)發(fā)放模擬標(biāo)本到受試實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室知道菌株的來源、檢驗(yàn)的內(nèi)容和時(shí)間。實(shí)驗(yàn)室完成鑒定后在規(guī)定時(shí)間內(nèi)將結(jié)果反饋至質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)，進(jìn)行評(píng)價(jià)。但受試實(shí)驗(yàn)室通常對(duì)這些菌株特別重視，采用超過常規(guī)操作標(biāo)準(zhǔn)的方法進(jìn)行鑒定，使上報(bào)結(jié)果不能準(zhǔn)確反映實(shí)驗(yàn)室的真實(shí)水平。盲點(diǎn)試驗(yàn)由質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)將模擬標(biāo)本混入臨床普通標(biāo)本，送入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行常規(guī)測定。實(shí)驗(yàn)室主管及實(shí)驗(yàn)操作者不知道哪一個(gè)標(biāo)本是來自質(zhì)控機(jī)構(gòu)