ICS6502030

B40..

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T25168—2010

畜禽cDNA文庫構(gòu)建與保存技術(shù)規(guī)程

TechnicalregulationoffarmanimalscDNAlibraryconstructionandpreservation

2010-09-26發(fā)布2011-03-01實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T25168—2010

前言

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口

(SAC/TC274)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人馬月輝關(guān)偉軍陸濤峰李向臣佟春玲余露露劉鵬

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T25168—2010

畜禽cDNA文庫構(gòu)建與保存技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了畜禽文庫構(gòu)建方法

cDNA。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬牛羊馬驢雞鴨鵝等畜禽文庫構(gòu)建與保存

、、、、、、、cDNA。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款凡是注日期的引用文件其隨后所有

。,

的修改單不包括勘誤的內(nèi)容或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)然而鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究

(),,

是否可使用這些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)

。,。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)

。

31

.

cDNAcomplementarydeoxyribonucleicacid

以成熟為模板在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成的鏈

mRNA,cDNA。

32

.

cDNA文庫cDNAlibrary

將處于特定發(fā)育階段真核生物體的特定器官或組織中提取的總經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄等一系列的生化

RNA,

反應(yīng)合成雙鏈群體后再插入到適當(dāng)?shù)妮d體上經(jīng)轉(zhuǎn)化寄主菌株構(gòu)成特定的克隆群體

cDNA,,cDNA。

33

.

寡核苷酸oligonucleotide

一類只有個以下堿基對的短鏈核苷酸的總稱常用作探針確定或的結(jié)構(gòu)

20,DNARNA。

34

.

噬菌斑plaque

被噬菌體感染的細(xì)菌所釋放的子代噬菌體會繼續(xù)感染周圍的細(xì)胞致使在瓊脂平板上生長的菌苔

,,

中有大量的細(xì)胞發(fā)生裂解形成的透明區(qū)域

,。

4試劑及溶液配制

除另有規(guī)定外試劑為分析純或生化試劑實(shí)驗(yàn)用水符合一級用水的要求

,。GB/T6682。

41焦碳酸二乙酯diethypyrocarbonateDEPC處理水

.(,)

在去離子水中加入靜置高壓滅菌

1000mL1mLDEPC,37℃12h,(120℃30min)。

422mol/LMgSO4

.

稱取加雙蒸水溶解后定容到

246.50gMgSO4·H2O,400mL(doubledistilledH2O,ddH2O),

高壓滅菌

500mL,。

4310mmol/LMgSO4

.

量取加定容到高壓滅菌

1mL2mol/LMgSO4ddH2O200mL,,30min。

441mol/LTris-ClpH75

.(.)

稱取堿溶于中調(diào)至定容到高壓滅菌

121.14gTris,800mLddH2O,pH7.5,1L,。

45SM緩沖液

.

稱取量取