標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 27531-2011 病毒性腦病和視網(wǎng)膜病病原逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測(cè)方法》是一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，旨在提供一種通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)來(lái)檢測(cè)與病毒性腦病及視網(wǎng)膜疾病相關(guān)的病原體的方法。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)描述了從樣本采集到最終結(jié)果分析的整個(gè)過(guò)程。

首先，在準(zhǔn)備階段，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了所需試劑、儀器設(shè)備以及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件的要求，確保實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛟诜仙锇踩蛡€(gè)人防護(hù)要求的前提下進(jìn)行。對(duì)于樣品處理方面，則涵蓋了不同類型臨床樣本（如腦脊液、血液等）的采集、保存與運(yùn)輸指南，強(qiáng)調(diào)了避免污染的重要性。

接下來(lái)是RNA提取步驟，這是成功實(shí)施RT-PCR的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。標(biāo)準(zhǔn)中推薦了幾種常用的高效RNA純化方法，并指出了選擇合適提取方案時(shí)需要考慮的因素，比如待測(cè)目標(biāo)物特性、樣本類型等。

然后進(jìn)入逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，即使用特定引物將RNA轉(zhuǎn)化為cDNA，為后續(xù)擴(kuò)增做準(zhǔn)備。此部分詳細(xì)列出了反應(yīng)體系組成、溫度循環(huán)參數(shù)設(shè)置等內(nèi)容，并提醒操作者注意控制好每一步驟的時(shí)間和溫度以保證效率和準(zhǔn)確性。

在完成cDNA合成后，便可以開(kāi)始PCR擴(kuò)增了。標(biāo)準(zhǔn)提供了針對(duì)不同病原體設(shè)計(jì)特異性引物序列的信息，并說(shuō)明了如何根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整反應(yīng)條件（如退火溫度、循環(huán)次數(shù)）。此外，還介紹了幾種常用的熒光探針標(biāo)記方式及其優(yōu)缺點(diǎn)比較。

最后是產(chǎn)物鑒定與數(shù)據(jù)分析。除了傳統(tǒng)的瓊脂糖凝膠電泳外，《GB/T 27531-2011》也鼓勵(lì)采用更靈敏快速的實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)來(lái)進(jìn)行定性和定量測(cè)定。對(duì)于陽(yáng)性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)、陰性質(zhì)控品設(shè)置等方面也有明確指示。


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  • 2011-11-21 頒布
  • 2012-03-01 實(shí)施
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GB/T 27531-2011病毒性腦病和視網(wǎng)膜病病原逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測(cè)方法_第1頁(yè)
GB/T 27531-2011病毒性腦病和視網(wǎng)膜病病原逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測(cè)方法_第2頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

ICS11220

B41.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T27531—2011

病毒性腦病和視網(wǎng)膜病病原逆轉(zhuǎn)錄-聚合

酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RT-PCR檢測(cè)方法

()

ProtocolofreversetranscritionolmerasechainreactionRT-PCR

ppy()

forthepathogenofviralencephalopathyandretinopathy

2011-11-21發(fā)布2012-03-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

中華人民共和國(guó)

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

病毒性腦病和視網(wǎng)膜病病原逆轉(zhuǎn)錄-聚合

酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RT-PCR檢測(cè)方法

()

GB/T27531—2011

*

中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行

北京市朝陽(yáng)區(qū)和平里西街甲號(hào)

2(100013)

北京市西城區(qū)三里河北街號(hào)

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

/p>

年月第一版

20122

*

書(shū)號(hào)

:155066·1-44037

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T27531—2011

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國(guó)深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人劉葒盧體康何俊強(qiáng)史秀杰鄭曉聰賈鵬葉奕優(yōu)楊錦舜

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T27531—2011

病毒性腦病和視網(wǎng)膜病病原逆轉(zhuǎn)錄-聚合

酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RT-PCR檢測(cè)方法

()

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了病毒性腦病和視網(wǎng)膜病病原分離和逆

(viralencephalopathyandretinopathy,VER)

轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)方法

(RT-PCR)。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于病原的流行病學(xué)調(diào)查診斷檢疫和監(jiān)測(cè)

VER、、。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

出入境動(dòng)物檢疫采樣

GB/T18088

3縮略語(yǔ)

下列縮略語(yǔ)適用于本文件

。

細(xì)胞病變

CPE:(cytopathiceffect)

十六烷基三甲基溴化銨

CTAB:(hexadecyltrimethyammoniumbromide)

焦碳酸乙二酯

DEPC:(diethypyrocarbonate)

溴化乙錠

EB:(ethidiumbromide)

乙二胺四乙酸

EDTA:(ethylenediaminetetraaceticacid)

羥乙基呱嗪乙硫磺酸

HEPES:[4-(2-hydroxyerhyl)piperazine-1-erhanesulfonicacid]

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

核酸酶抑制劑

RNasin:(ribonucleaseinhibitor)

病毒性腦病和視網(wǎng)膜病

VER:(viralencephalopathyandretinopathy)

4試劑和材料

41水符合中一級(jí)水的規(guī)格用處理以除掉酶

.:GB/T6682,DEPCRNA。

42病毒參考株

.VERV。

43胰酶混合消化液見(jiàn)附錄中

.-EDTA(AA.1)。

44培養(yǎng)液見(jiàn)附錄中

.L-15(AA.2)。

45細(xì)胞系用培養(yǎng)液培養(yǎng)

.SSN-1:L-1525℃。

46細(xì)胞系用培養(yǎng)液培養(yǎng)

.E-11:L-1525℃。

47逆轉(zhuǎn)錄酶保存不要反復(fù)凍融或溫度劇烈變化

.AMV:20U/μL,-20℃,。

48

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