ICS65120

B46.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T28642—2012

飼料中沙門氏菌的快速檢測(cè)方法

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR法

()

RapiddeterminationofSalmonellasppinanimalfeedingstuffs—

.

PCRmethod

2012-07-31發(fā)布2012-11-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T28642—2012

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC76)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位農(nóng)業(yè)部飼料質(zhì)量及畜產(chǎn)品安全監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心沈陽(yáng)

:()。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人張秀芹張建勛杜柏林李欣南楊希國(guó)馬俊馳陳曉月

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T28642—2012

飼料中沙門氏菌的快速檢測(cè)方法

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR法

()

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中沙門氏菌的快速檢測(cè)的方法

PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中沙門氏菌的定性篩選

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

飼料中沙門氏菌的檢測(cè)方法

GB/T13091

飼料采樣

GB/T14699.1

實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

GB19489

基因檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求

SN/T1193

食品中致病菌檢測(cè)方法實(shí)時(shí)法

SN/T1870PCR

3原理

利用沸水浴使菌體細(xì)胞破裂釋放基因組離心使細(xì)胞壁等有形物沉淀以上清液為模板進(jìn)行

,DNA,,

擴(kuò)增瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物

,PCR。

4試劑和材料

除另有規(guī)定外試劑為分析純或生化試劑試驗(yàn)用水符合的要求

,,GB/T6682。

41沙門氏菌檢測(cè)用引物對(duì)序列為

.():

SalF:5′-TCGCACCGTCAAAGGAACCGTAAAGC-3′

SalR:5′-GCATTATCGATCAGTACCAGCCGTCT-3′

42Taq緩沖液內(nèi)含Taq聚合酶2+

.Premix(2×):DNA1.25U/25μL,4mmolMg,dNTP

各

0.4mmol。

43瓊脂糖電泳級(jí)

.:。

44

.Marker2000。

45緩沖蛋白胨水見

.(BPW):A.1。

46大豆蛋白胨肉湯見

.(RVS):A.2。

47亞硒酸鹽胱氨酸增菌液見

.(SC):A.3。

48倍上樣緩沖液的溴酚藍(lán)丙三醇溶液的

.10(10×loadingbuffer):0.05%,50%,1%SDS。

49質(zhì)控菌株沙門氏菌陽(yáng)性標(biāo)