HSQC實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的變化

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝PEP-HSQC PEP是”preservationofequivalentpathways”的縮寫,在常規(guī)的HSQC中S橫向磁化在t1期間由于化學(xué)位移進(jìn)動(dòng)要產(chǎn)生二個(gè)相互正交的分量，但是最后的反向INEPT只能將同S90度脈沖相位垂直的分量傳遞給1H，另一個(gè)保留在橫向，形成多量子信號(hào)而不能被觀測(cè)到。因此平均地講，有一半信號(hào)沒有被利用。PEP類型實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)期前的特別序列實(shí)現(xiàn)兩個(gè)分量的同時(shí)檢測(cè)，因而使信噪比提高。

PEP-HSQC

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝PEP-HSQC

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝PEP-HSQC

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生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝PEP-HSQC

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝PEP-HSQC

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝PEP-HSQC

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝3.PFG-PEP-HSQC

通常稱為”gradient-enhancedHSQC”，梯度場(chǎng)脈沖可以用于相干傳遞途徑的選擇，但經(jīng)常導(dǎo)致一半信號(hào)的損失，因?yàn)樘荻葓?chǎng)脈沖選擇信號(hào)依據(jù)信號(hào)的絕對(duì)相干階。但是梯度場(chǎng)脈沖可以同PEP-HSQC結(jié)合起來(lái)，既保留正交的兩個(gè)分量，又沒有一半傳遞途徑被抑制的問題。

PEP-HSQC

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝PEP-HSQC

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝PEP-HSQC

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝PEP-HSQC

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝PEP-HSQC

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝PEP-HSQC

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝液體NMR技術(shù)的發(fā)展：TROSY

（Transverserelaxation-optimizedspectroscopy）偶極－偶極弛豫與化學(xué)位移各向異性弛豫間的互相關(guān)會(huì)導(dǎo)致J偶合裂分成的雙線有不同的線寬即二個(gè)單線成分的弛豫速率不同1997年P(guān)ervushin創(chuàng)造性地設(shè)計(jì)了一種脈沖序列，該序列抑制弛豫較快的成分，而只保留弛豫較慢的成分。利用這一原理可以大大提高核磁共振可以解析的蛋白質(zhì)的分子量生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝TROSY

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝TROSY

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝原始的TROSY序列

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝TROSY

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝TROSY

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝TROSY

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝TROSY

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝改進(jìn)的TROSY序列－ST2-PT生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝同一個(gè)時(shí)間點(diǎn)采集兩個(gè)FID，一個(gè)相位是ψ1=y，-x；ψ2=-y；ψ4=-y；φref=1，2另一個(gè)FID的相位取ψ1=y，x；ψ2=y；ψ4=y。同時(shí)g2變號(hào)TROSY

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝三.進(jìn)一步的討論

前面提到當(dāng)pS時(shí)TROSY序列的效果最好。這里p反映了偶極－偶極相互作用的大小，而S是化學(xué)位移各向異性的大小，與磁場(chǎng)強(qiáng)度成正比。在較低的磁場(chǎng)強(qiáng)度下，主要的弛豫貢獻(xiàn)來(lái)自偶極－偶極相互作用，只有在高場(chǎng)情況下，化學(xué)位移各向異性才能與偶極－偶極相互作用相抗衡?？梢奣ROSY的效果必須在高場(chǎng)譜儀上才能得到表現(xiàn)。

TROSY

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝具體到15N－1H基團(tuán)，H=-16ppm，N=-160ppm，rHN=0.101nm，且CSA張量的主軸與rHN矢量基本平行，計(jì)算表明當(dāng)磁場(chǎng)強(qiáng)度相當(dāng)?shù)?H共振頻率為1100MHz時(shí)，pS同時(shí)pI。滿足這樣條件時(shí)，較窄譜線的線寬便由公式中的其他項(xiàng)決定，這些項(xiàng)的主要來(lái)源是其他1H核特別是CH與這對(duì)核的偶極－偶極相互作用，所以如果將CH上的1H代以2H，TROSY將有非常好的效果。

750MHz下的氘代蛋白質(zhì)的理論線寬蛋白質(zhì)分子量1H線寬（窄）1H線寬（寬）15N線寬（窄）15N線寬（寬）150kDa15Hz70Hz5Hz60Hz800kDa50Hz350Hz15Hz300HzTROSY的效果生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝HSQCTROSY

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝在較低場(chǎng)強(qiáng)下TROSY效果不明顯，而且由于TROSY僅檢測(cè)雙線之一，與常規(guī)異核相關(guān)譜相比信噪比較低，故一般在高場(chǎng)譜儀上對(duì)氘標(biāo)樣品進(jìn)行。

除了這里討論的15N－1H相關(guān)譜，芳環(huán)上的13C的化學(xué)位移各向異性也比較大，故也可記錄TROSY類型的13C－1H相關(guān)譜

Problemset1

生物大分子波譜學(xué)原理吳季輝請(qǐng)查找CloreMG的順磁弛豫增強(qiáng)(PRE)相關(guān)的相關(guān)文獻(xiàn)，分析測(cè)量基于HSQC的1H