ICS6502030

B41..

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T37746—2019

草魚(yú)呼腸孤病毒三重RT-PCR檢測(cè)方法

TriplexRT-PCRassayfordetectionofgrasscarpreoviruses

2019-06-04發(fā)布2020-01-01實(shí)施

國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T37746—2019

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)水產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC156)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人曾偉偉王慶吳淑勤王英英石存斌宋新建李瑩瑩趙長(zhǎng)臣

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T37746—2019

引言

本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)提請(qǐng)注意如下事實(shí)聲明符合本文件時(shí)可能涉及到第章操作步驟和附錄引

,,7“”B“

物與用于診斷草魚(yú)呼腸孤病毒的三重檢測(cè)引物組試劑盒及方法專利號(hào)等

”《PCR、》(:ZL201210039379.8)

相關(guān)專利的使用

。

本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)對(duì)于該專利的真實(shí)性有效性和范圍無(wú)任何立場(chǎng)

、。

該專利持有人已向本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)保證他愿意同任何申請(qǐng)人在合理且無(wú)歧視的條款和條件下

,,

就專利授權(quán)許可進(jìn)行談判該專利持有人的聲明已在本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)備案相關(guān)信息可以通過(guò)以下

。。

聯(lián)系方式獲得

:

專利持有人中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所

:

地址廣州市荔灣區(qū)西塱興漁路號(hào)珠江水產(chǎn)研究所

:1

請(qǐng)注意除上述專利外本文件的某些內(nèi)容仍可能涉及專利本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專

,。

利的責(zé)任

。

Ⅱ

GB/T37746—2019

草魚(yú)呼腸孤病毒三重RT-PCR檢測(cè)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了種不同基因型草魚(yú)呼腸孤病毒的三重檢測(cè)技術(shù)

3RT-PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于對(duì)草魚(yú)的種基因型呼腸孤病毒的核酸進(jìn)行檢測(cè)與分離株的鑒定

3。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

水生動(dòng)物產(chǎn)地檢疫采樣技術(shù)規(guī)范

SC/T7103

3縮略語(yǔ)

下列縮略語(yǔ)適用于本文件

。

焦炭酸二乙酯

DEPC:(diethypyrocarbonate)

脫氧核苷酸三磷酸

dNTP:(deoxy-riboncleosidetriphosphate)

溴化乙錠

EB:(ethidiumbromide)

草魚(yú)呼腸孤病毒

GCRV:(grasscarpreovirus)

莫洛尼氏鼠白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶

M-MLVRT:(moloneymurineleukemiavirusreversetran-

scriptase)

磷酸鹽緩沖液

PBS:(phosphatebuffersolution)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR:(polymerasechainreaction)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

酶抑制劑

RNaseinhibitor:RNA

逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

RT-PCR:-(reverse-transcriptionpolymerasechainaction)

TaqTaq聚合酶

DNApolymerase:DNA

三重三重逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

RT-PCR:-(triplexreversetranscriptasepolymerasechainreac-

tion)

4技術(shù)原理

草魚(yú)呼腸孤病毒現(xiàn)有和型個(gè)基因型根據(jù)同一基因型不同毒株之間共有的保守

(GCRV)Ⅰ、ⅡⅢ3,

序列分別設(shè)計(jì)特異性引物這些引物可以特異性擴(kuò)增相對(duì)應(yīng)基因型分離株的核酸而不能擴(kuò)增其他基因

,,

型分離株的核酸在同一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)反應(yīng)體系里加入針對(duì)個(gè)基因型的對(duì)保守引物便

。(PCR)33,

可同時(shí)擴(kuò)增出個(gè)大小有差異的核酸片段可以通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳的電泳條帶分子量大小來(lái)區(qū)分從

3