為了棉花姓“中國”1992年，一場史無前例的棉鈴蟲災(zāi)害以迅雷不及掩耳之勢吞噬著中國的棉田，我國棉花產(chǎn)業(yè)遭遇滅頂之災(zāi)；國外公司拒絕出售抗蟲棉核心技術(shù)，到1999年外國抗蟲棉已占領(lǐng)我國95%的棉花市場份額，國內(nèi)棉花品種市場迅速流失。棉花棉鈴蟲幼蟲2002年成功培育出我國第一個雙價轉(zhuǎn)基因抗蟲棉新品種——中棉所41，該品種能夠緩解棉鈴蟲抗藥性。我國成為世界第二個擁有抗蟲基因自主知識產(chǎn)權(quán)的國家！第3章基因工程重組DNA技術(shù)的基本工具01基因工程的基本操作程序02基因工程的應(yīng)用03蛋白質(zhì)工程的原理和應(yīng)用041944年艾弗里等人證明了DNA可以在同種生物的不同個體之間轉(zhuǎn)移。1950年埃特曼發(fā)明了一種測定氨基酸序列的方法。1958年梅塞爾森和斯塔爾用實驗證明了DNA的半保留復(fù)制。1953年沃森和克里克建立了DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型。1961年尼倫伯格和馬太破譯了第一個編碼氨基酸的密碼子。1967年，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，在細(xì)菌擬核DNA之外的質(zhì)粒有自我復(fù)制能力，并可以在細(xì)菌細(xì)胞間轉(zhuǎn)移。1970年科學(xué)家在細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)了第一個限制性內(nèi)切核酸酶（簡稱限制酶）。20世紀(jì)70年代初，多種限制酶、DNA連接酶和逆轉(zhuǎn)錄酶被相繼發(fā)現(xiàn)。1972年，伯格成功構(gòu)建了第一個體外重組DNA分子。1973年，證明質(zhì)?？梢宰鳛榛蚬こ痰妮d體，構(gòu)建重組DNA，導(dǎo)入受體細(xì)胞，使外源基因在原核細(xì)胞中成功表達(dá)，基因工程正式問世。1977年，桑格等科學(xué)家發(fā)明了DNA序列分析的方法。此后，DNA合成儀的問世為體外合成DNA提供了方便。1982年，第一個基因工程藥物-重組人胰島素被批準(zhǔn)上市。1983年，科學(xué)家采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育出世界上第一例轉(zhuǎn)基因煙草。1984年，我國科學(xué)家朱作言領(lǐng)導(dǎo)的團(tuán)隊培育出世界上第一條轉(zhuǎn)基因魚。1985年，穆里斯等人發(fā)明了PCR。1990年，人類基因組計劃啟動。2003年完成21世紀(jì)以來，科學(xué)家發(fā)明了多種高通量測序技術(shù)，加速了人們對基因組序列的了解。2013年，華人科學(xué)家張鋒及其團(tuán)隊首次報道利用最新的基因組編輯技術(shù)編輯了哺乳動物基因組。該技術(shù)可以實現(xiàn)對特定基因的定點插入、敲除或替換。基因工程發(fā)展歷程

2020年9月10日，專利審判和上訴委員會（PTAB）裁定，Broad研究所張鋒團(tuán)隊在其已獲準(zhǔn)的專利中擁有將CRISPR系統(tǒng)用于真核細(xì)胞的“優(yōu)先權(quán)”，該專利涵蓋了在實驗室培養(yǎng)的人類或直接在人體內(nèi)的應(yīng)用。華人科學(xué)家張鋒諾獎獲得者杜德娜

2020年諾貝爾化學(xué)獎頒給了埃馬紐埃爾·卡彭蒂耶（EmmanuelleCharpentier）和詹妮弗·杜德納(JenniferAnneDoudna），獲獎原因是她們開發(fā)了一種新的基因編輯方法——CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)。一、基因工程的概念是指按照人們的愿望，通過轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物制品。從技術(shù)操作層面看，由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計和施工的，因此又叫重組DNA技術(shù)。原理操作環(huán)境操作對象操作水平基本過程目的生物體外基因DNA分子水平定向改造生物的遺傳性狀剪切→拼接→導(dǎo)入→表達(dá)優(yōu)點：定向改造生物體的性狀，目的性強(qiáng)（與誘變育種相比）育種周期短，克服遠(yuǎn)緣雜交不親和障礙（與雜交育種相比）基因重組

番木瓜容易受番木瓜環(huán)斑病毒的侵襲。當(dāng)番木瓜被這種病毒感染后，產(chǎn)量會大大下降?？茖W(xué)家通過精心設(shè)計，用“分子工具”培育出了轉(zhuǎn)基因番木瓜，它可以抵御番木瓜環(huán)斑病毒。

DNA雙螺旋的直徑只有2nm,對如此微小的分子進(jìn)行操作，是一項非常精細(xì)的工作，更需要專門的“分子工具”。

到社會中去那么，科學(xué)家究竟用到了哪些“分子工具”？這些“分子工具”各具有什么特征呢？培育轉(zhuǎn)基因番木瓜的簡要過程：環(huán)斑花葉病毒提取外殼蛋白基因普通番木瓜(無抗病特性)番木瓜細(xì)胞(含抗病基因)與運(yùn)載體DNA拼接，導(dǎo)入番木瓜植株(有抗病特性)表達(dá)抗病基因(CP基因）1、不同生物的基因為什么能拼接？2、外源基因為什么能在受體細(xì)胞中表達(dá)？(1)DNA的基本組成單位都是四種脫氧核苷酸。(2)DNA分子都遵循堿基互補(bǔ)配對原則(3)雙鏈DNA分子的空間結(jié)構(gòu)都是規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)。(1)基因是控制生物性狀的遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能單位。(2)遺傳信息的傳遞都遵循中心法則。(3)生物界共用一套遺傳密碼?；蚬こ陶Q生的理論基礎(chǔ)“分子手術(shù)刀”“分子縫合針”“分子運(yùn)輸車”思考：解決培育番木瓜的關(guān)鍵步驟需要哪些分子工具呢？關(guān)鍵步驟一：抗病基因的提取出來關(guān)鍵步驟二：抗病基因與運(yùn)載體DNA“縫合”關(guān)鍵步驟三：抗病基因進(jìn)入

番木瓜限制性內(nèi)切核酸酶：DNA連接酶：工具分子手術(shù)刀分子縫合針分子運(yùn)輸車載體：準(zhǔn)確切割DNA分子將DNA片段連接起來將體外重組好的DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞01重組DNA技術(shù)的基本工具1、來源：主要從原核生物中分離純化出來

2、種類：

數(shù)千種3、作用特點：4、作用部位:特定切點上的磷酸二酯鍵能夠識別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列,并使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開。專一性一、限制酶——“分子手術(shù)刀”ATCGTAGC5’3’5’3’磷酸二酯鍵回憶：

磷酸二酯鍵T1234512345A一個核苷酸脫氧核糖上第3位C的羥基，與下一個核苷酸脫氧核糖上第5位C的磷酸羥基，脫水縮合成酯鍵，該酯鍵稱又3,5磷酸二酯鍵。3’5’3’3’5’AGTCTA復(fù)習(xí)：DNA的空間結(jié)構(gòu)特點：①兩條脫氧核苷酸長鏈反向平行盤旋而成雙螺旋結(jié)構(gòu)。②脫氧核糖和磷酸交替連接，排列在外側(cè)，構(gòu)成基本骨架；堿基排列在內(nèi)側(cè)。③兩條鏈上的堿基通過氫鍵連接成堿基對，A與T(兩個氫鍵)，G與C配對(三個氫鍵)。堿基之間這種一一對應(yīng)的關(guān)系，叫做堿基互補(bǔ)配對原則。1．推測限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么？2．為什么限制酶不切割細(xì)菌本身的DNA分子？尋根問底自身DNA不存在該酶的識別序列或識別序列已經(jīng)被修飾(甲基化)限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA，使之失效，從而達(dá)到保護(hù)自身的目的。5.限制酶識別的特定序列有何特點:呈現(xiàn)堿基互補(bǔ)對稱，無論是6個堿基還是4個堿基，或其他數(shù)量都可以找到一條中心軸線，中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的，稱為回文序列。EcoRⅠ5’…G-A-A-T-T-C…3’3’…C-T-T-A-A-G…5’SmaⅠ5’…C-C-C-G-G-G…3’3’…G-G-G-C-C-C…5’BamHⅠ5’…G-G-A-T-C-C…3’3’…C-C-T-A-G-G…5’TaqⅠ5’……T-C-G-A……3’3’……A-G-C-T……5’一條鏈從5’往3’讀的堿基順序與另一條鏈從5’往3’讀的順序完全一致?！?/p>

檢測】下面哪項不具有限制酶識別序列的特征（）A．GAATTCB．GGGGCCCC

CTTAAG

CCCCGGGGC．CTGCAGD．CTAAATC

GACGTC

GATTTAGD6.限制酶的命名：

用生物屬名的頭一個字母與種加詞的頭兩個字母，組成了3個字母的略語，以此來表示這個酶是從哪種生物中分離出來的。例如，一種限制酶是從大腸桿菌(Escherichiacoli)的R型菌株分離來的，就用字母EcoR表示；如果它是從大腸桿菌R型菌株中分離出來的第一種限制酶，則進(jìn)一步表示成EcoRI。EcoRⅠ屬名種名菌株數(shù)字代表第幾個SmaⅠ：粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratiamarcescens）中分離出的第一個限制酶。7.作用結(jié)果：形成黏性末端和平末端。當(dāng)限制酶在它識別序列的___________將DNA分子的兩條鏈分別切開時，產(chǎn)生的是__________；當(dāng)限制酶在它識別序列的_________切開時，產(chǎn)生的是______；中軸線兩側(cè)黏性末端中軸線處平末端

黏性末端黏性末端EcoRI限制酶的切割只能識別GAATTC序列,并在G和A之間切開。平末端平末端SmaI限制酶的切割只能識別CCCGGG序列,并在C和G之間切開

一個限制酶切割一次斷

個磷酸二酯鍵；形成

個黏性末端；有___個游離的磷酸基團(tuán)；消耗

分子水？兩2思考ATCGTAGC5’3’5’3’兩2下列粘性末端是由同一種限制酶切割而成的是①③兩個黏性末端否由同一種限制酶切割產(chǎn)生的：一看游離堿基能否相互配對二看兩條鏈的切點是否相同。技巧：將黏性末端之一旋轉(zhuǎn)180°后，若完全相同且切點相同則是。BamHⅠ____EcoRⅠ___HindⅢ___BglⅡ___GATCAATTAGCTGATC討論：請寫出下列限制酶切割形成的黏性末端，并思考同種限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端是否相同？不同限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端是否一定不同？同種限制酶產(chǎn)生的黏性末端相同，不同的限制酶可能會形成相同的黏性末端。識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。主要是原核生物數(shù)千種1、來源：2、種類：3、作用特點：4、結(jié)果：形成兩種末端小結(jié)：“分子手術(shù)刀”

——限制酶黏性末端平末端①同種限制酶產(chǎn)生的黏性末端相同②不同的限制酶可能會形成相同的黏性末端。④兩個黏性末端否由同一種限制酶切割產(chǎn)生的：一看游離堿基能否相互配對；二看兩條鏈的切點是否相同。③黏性末端只要互補(bǔ)，即可重新配對。注意：⑤限制酶切一次可產(chǎn)生2個末端和2個游離的磷酸基團(tuán)，斷2個磷酸二脂鍵，消耗2分子水。CGGCCGTATAATATGCGCGCTTAATCGTATAATATGCTAAEcoRIEcoRICGGCCGTTAAAATTGCGCGCGTAATCGTTAAAATTCTATACGGCCGTTAAATATTGCTAA如果把兩種來源不同的DNA用同一種限制酶來切割，會怎樣呢？會產(chǎn)生相同的黏性末端

缺口怎么辦？二、DNA連接酶——“分子縫合針”將雙鏈DNA片段“縫合”起來，恢復(fù)被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵，形成重組DNA分子。1、作用:兩條鏈的骨架部分，形成磷酸二酯鍵

連接部位：CGGCCGTTAAAATTGCTATA類型來源功能相同點差別E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶大腸桿菌T4噬菌體恢復(fù)磷酸二酯鍵只能連接黏性末端能連接黏性末端和平末端(效率較低)2、分類：DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？DNA連接酶DNA連接酶ATAGTCCGAATT連接兩個DNA片段DNA連接酶：CAATTDNA聚合酶GAGTATCDNA聚合酶連接單個脫氧核苷酸形成單鏈DNA連接酶DNA聚合酶相同點作用實質(zhì)化學(xué)本質(zhì)不同點模板作用對象作用結(jié)果 用途都能催化形成磷酸二酯鍵都是蛋白質(zhì)

不需要需要DNA的一條鏈作模板形成完整的重組DNA分子形成DNA的一條鏈基因工程DNA復(fù)制只能將單個核苷酸連接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯鍵在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵DNA連接酶與DNA聚合酶的區(qū)別：與DNA相關(guān)的五種酶的比較名稱作用部位作用結(jié)果限制酶磷酸二酯鍵將DNA切成兩個片段DNA連接酶磷酸二酯鍵將兩個DNA片段連接為一個DNA分子DNA聚合酶磷酸二酯鍵將單個脫氧核苷酸依次連接到單鏈末端DNA(水解)酶磷酸二酯鍵將DNA片段水解為單個脫氧核苷酸解旋酶堿基對之間的氫鍵將雙鏈DNA分子局部解旋為單鏈，形成兩條長鏈1.根據(jù)所學(xué)知識，完成以下填空：①限制酶②解旋酶③DNA連接酶④DNA聚合酶⑤RNA聚合酶baA.切斷a處的酶為_______

B.連接a處的酶為_______C.切斷b處的酶為_______①③④②a：磷酸二酯鍵；b：氫鍵練習(xí)：2.下圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，圖中依次表示限制性核酸內(nèi)切酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是(

)

A．①②③④ B．①②④③

C．①④②③ D．①④③②CC2.以下是四種不同限制酶切割形成的DNA片段:你是否能用DNA連接酶將它們連接起來？…CTGCA

…G

①…AC…TG②

CG…GC…③…G

…CTTAA

④G…

ACGTC…

⑤…GC…CG⑥GT…

CA…

⑦AATTC…G…⑧②和⑦能連接形成④和⑧能連接形成③和⑥能連接形成①和⑤能連接形成反向?qū)ΨQ3.關(guān)于下圖所示黏性末端的敘述，正確的是A.①與③是由相同限制酶切割產(chǎn)生的B.DNA連接酶可催化①與③的連接C.經(jīng)酶切形成④需要脫去2分子水D.DNA連接酶與DNA聚合酶均能作用于上述黏性末端。B重組DNA分子的模擬制作目的要求：模擬重組DNA分子的操作過程，說出其基本原理

剪刀透明膠條ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATACTATCGTACGATAGGTACTTAAGCCGTATGTCCTAGAATTCTCGGTATGAATTCCATACAGGATCTTAAGAGCCATACTTAAGGTATG（DNA連接酶）（限制酶EcoRⅠ：GAATTC）材料用具：AATTCGGCATAC……TATCGTACGATAGGTACTTAA

…ATAGCATGCTATCCATGGCCGTATG…目的基因…

TCCTAG…

AGGATCTTAAAATTCCATAC…

GAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATGGGTATG…要想獲得某個特定性狀的目的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產(chǎn)生幾個黏性(平)末端？共產(chǎn)生幾個游離的磷酸基團(tuán)？要切2個切口，產(chǎn)生4個黏性(平)末端，產(chǎn)生4個游離的磷酸基團(tuán)。重組DNA分子的模擬制作AATTCGGCATAC……TATCGTACGATAGGTACTTAA

…ATAGCATGCTATCCATG目的基因…

TCCTAG…

AGGATCTTAAAATTCCATAC…

GAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATGGGTATG…GCCGTATG…重組DNA分子的模擬制作1、

用DNA連接酶連接兩個相同的黏性未端要形成幾個磷酸二酯鍵？2個3、外源基因（如抗蟲基因）怎樣才能運(yùn)送到受體細(xì)胞（如棉花細(xì)胞）？需要“分子運(yùn)輸車”——基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體2、不同限制酶切割的末端，是否可以用DNA連接酶進(jìn)行連接？不一定1.作用:①將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中去②利用運(yùn)載體在受體細(xì)胞內(nèi)對目的基因進(jìn)行大量復(fù)制1234能夠在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定保存和自我復(fù)制；具有一個或多個限制酶切位點，便于外源基因插入；具有標(biāo)記基因，便于重組DNA的鑒定和篩選；對受體細(xì)胞無害；2.載體需具備的條件三、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”載體上標(biāo)記基因的標(biāo)記原理普通培養(yǎng)基不含抗生素選擇培養(yǎng)基50μg/ml四環(huán)素四環(huán)素抗性基因、氨芐青霉素抗性基因、熒光蛋白基因有標(biāo)記基因的存在，可用含青霉素的培養(yǎng)基鑒別。有多個切割位點能復(fù)制并帶著插入的目的基因一起復(fù)制3.常用運(yùn)載體：①質(zhì)粒：一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨立于細(xì)胞核或擬核外的并具有自我復(fù)制能力的環(huán)狀雙鏈DNA分子。②噬菌體、動植物病毒等思考：若用家蠶作為某基因表達(dá)載體的受體細(xì)胞，在噬菌體和昆蟲病毒兩種載體中，不選用

作為載體，其原因是

。噬菌體噬菌體的宿主細(xì)胞是細(xì)菌，而不是家蠶利用病毒對宿主細(xì)胞的侵染性（具物種或組織特異性）☆真正被用作載體的質(zhì)粒，都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過人工改造的。（1）質(zhì)粒與擬核中的DNA有哪些相同點：（至少寫出兩點）

①______

。

②______

。

③___________________

。（2）質(zhì)粒

（是/不是）一種細(xì)胞器。（3）細(xì)胞膜上的載體蛋白與基因工程中的載體的區(qū)別

①化學(xué)本質(zhì)不同：細(xì)胞膜上的載體：

。基因工程中的載體可能是物質(zhì),如_

;也可是生物,如___

；也可是λ噬菌體的衍生物。

②功能不同：細(xì)胞膜上的載體功能是

?；蚬こ讨械妮d體是一種“分子運(yùn)輸車”,把

____________

.化學(xué)本質(zhì)和結(jié)構(gòu)相同能夠自我復(fù)制具有遺傳效應(yīng)或都能夠指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成等不是蛋白質(zhì)質(zhì)粒動植物病毒協(xié)助細(xì)胞膜控制物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞【檢測】辨析填空限制酶DNA連接酶載體①對受體細(xì)胞無害；②有一個至多個限制酶切割位點；③有特殊的標(biāo)記基因；④能自我復(fù)制或能整合到宿主DNA上。質(zhì)粒、噬菌體、動植物病毒小結(jié)基因工程的基本工具作為載體的條件種類:磷酸二酯鍵來源：主要來源于原核生物特點：作用部位：具有專一性結(jié)果：形成黏性末端或平末端連接部位：磷酸二酯鍵種類：E.coliDNA連接酶、T4DNA連接酶作用：把兩條雙鏈DNA片段拼接起來

探究·實踐DNA的粗提取與鑒定①DNA不溶于酒精，某些蛋白質(zhì)溶于酒精②DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/LNaCl溶液，在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低。③在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍(lán)色。0DNA溶解度NaCl濃度0.14mol/L2mol/L利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。1.實驗原理1、了解DNA的物理化學(xué)性質(zhì)；理解DNA粗提取和鑒定的原理。2、學(xué)會DNA粗提取的方法以及利用二苯胺試劑對DNA進(jìn)行鑒定2.目的要求DNA含量相對較高的生物組織，如新鮮洋蔥、香蕉、菠菜、菜花和豬肝等。①選材：②試劑：①研磨液②體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精③2mol/L的NaCl溶液④二苯胺試劑⑤蒸餾水——析出DNA——溶解DNA——鑒定DNA，要現(xiàn)配現(xiàn)用3.實驗材料不能選擇哺乳動物成熟的紅細(xì)胞，因為哺乳動物成熟的紅細(xì)胞中無細(xì)胞核（無DNA）?！蠳aCl、EDTA、SDS、Tris-HCl緩沖液（P117）4.實驗步驟(1)稱取約30g洋蔥,切碎,然后放入研缽中,倒入10mL研磨液,充分研磨。(2)在漏斗中墊上紗布,將洋蔥研磨液過濾到燒杯中,在4℃冰箱中放置幾分鐘后,再取上清液。也可以直接將研磨液倒入塑料離心中,1500r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min,再取上清液放入燒杯中。否則細(xì)胞核不會充分破碎，釋放出的DNA量就會減少。過濾能用濾紙代替嗎？不可以，因為DNA會被吸附到濾紙上而大量損失?？赡芎蠨NA、RNA以及蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖類等。（1）取材研磨（2）去除濾液中的雜質(zhì)低溫放置幾分鐘的作用

抑制核酸水解酶的活性，進(jìn)而抑制DNA降解；抑制DNA分子運(yùn)動，使DNA易形成沉淀析出；(3)在上清液中加入體積相等的、預(yù)冷的酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)為95%),靜置2~3min,溶液中出現(xiàn)的白色絲狀物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個方向緩慢攪拌,卷起絲狀物,并用濾紙吸去上面的水分;或者將溶液倒入塑料離心管中,在10000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min,棄上清液,將管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。（1）冷卻的酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)95％)作用：①抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；②是低溫有利于增加DNA分子柔韌性，減少斷裂。③抑制分子運(yùn)動，使DNA易形成沉淀析出避免破壞DNA不能形成絮狀沉淀。蛋白質(zhì)溶解在酒精中，DNA不溶于酒精而析出。（3）DNA的析出(4)取兩支20mL的試管,各加入2mol/L的NaC1溶液5mL。將絲狀物或沉淀物溶于其中一支試管的NaC1溶液中。然后,向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?將試管置于沸水中加熱5min。待試管冷卻后,比較兩支試管中溶液顏色的變化。（4）DNA的鑒定【請同學(xué)們補(bǔ)充完整以下實驗步驟】試管編號A（對照組）B（實驗組）步驟12mol/L的NaC1溶液5mL步驟2不進(jìn)行任何處理步驟3步驟4沸水浴加熱5min實驗現(xiàn)象溶液不變藍(lán)色實驗結(jié)論加絲狀物或沉淀物加4mL的二苯胺試劑溶液逐漸變藍(lán)DNA在沸水浴的情況下遇二苯胺試劑會被染成藍(lán)色注意事項1．以血液為實驗材料時，每100mL血液中需要加入3g檸檬酸鈉，防止血液凝固。2.利用動物細(xì)胞提取DNA破碎細(xì)胞的方法：動物細(xì)胞無細(xì)胞壁，可直接吸水漲破。3．加入研磨液后，必須充分研磨，否則細(xì)胞核不會充分破碎，釋放出的DNA量就會減少。4．加入酒精和用玻璃棒攪拌時，動作要輕緩，以免加劇DNA分子的斷裂，導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。5．預(yù)冷的酒精具有以下優(yōu)點：①可抑制核酸水解酶的活性，進(jìn)而抑制DNA降解；②抑制分子運(yùn)動，使DNA易形成沉淀析出；③低溫有利于增加DNA分子的柔韌性，減少其斷裂。刑偵破案拓展：DNA提取的應(yīng)用基因組測序插入人胰島素基因的大腸桿菌基因工程親子鑒定1.你提取出白色絲狀物或沉淀物了嗎？用二苯胺試劑鑒定的結(jié)果如何？2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些雜質(zhì)嗎？3.與其他同學(xué)提取的