犐犆犛６５．０２０．９９

犅２０

中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準

犖犢／犜６７４—２００３

轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測

犇犖犃提取和純化

犇犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳犵犲狀犲狋犻犮犪犾犾狔犿狅犱犻犳犻犲犱狆犾犪狀狋狅狉犵犪狀犻狊犿狊犪狀犱

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２００３０４０１發(fā)布２００３０５１５實施

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

書

犖犢／犜６７４—２００３

前言

本標準由農(nóng)業(yè)部科技教育司提出。

本標準起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)所、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所、上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)

院、農(nóng)業(yè)部科技發(fā)展中心、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)。

本標準主要起草人：賈士榮、金蕪軍、張大兵、彭于發(fā)、黃昆侖、李寧、汪其懷、羅云波。

本標準首次發(fā)布。

Ⅰ

書

犖犢／犜６７４—２００３

轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測

犇犖犃提取和純化

１范圍

本標準規(guī)定了轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品中ＤＮＡ提取和純化的方法和技術(shù)要求。

本標準適用于轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品中ＤＮＡ的提取和純化。

２規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有

的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究

是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。

ＮＹ／Ｔ６７２轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測通用要求

ＮＹ／Ｔ６７３轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測抽樣

３原理

通過物理和化學(xué)方法使ＤＮＡ從樣品的不同組分中分離出來。利用不同的純化方法，棄除樣品中

的蛋白質(zhì)、脂肪、多糖及其他次生代謝物，及ＤＮＡ提取過程中加入的三氯甲烷、異戊醇、異丙醇、乙醇和

乙酸鈉等，獲得純化的ＤＮＡ。

４試劑與溶液

除非另有說明，在分析中僅使用分析純試劑；配制好的溶液經(jīng)高溫滅菌后使用。

４．１溴代十六烷基三甲胺（ｃｅｔｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ，ＣＴＡＢ）。

４．２三羥甲基氨基甲烷［ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅ，Ｔｒｉｓ］。

４．３二水乙二胺四乙酸二鈉（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃａｃｉｄ，ｄｉｓｏｄｉｕｍｓａｌｔ，ｄｉｈｙｄｒａｔｅ，ＥＤＴＡＮａ·

２Ｈ２Ｏ）。

４．４Ｅ巰基乙醇（Ｅｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ）。

４．５三氯甲烷（ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ）。

４．６異戊醇（ｉｓｏａｍｙｌａｌｃｏｈｏｌ）。

４．７異丙醇（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌａｌｃｏｈｏｌ）。

４．８三氯甲烷＋異戊醇＝２４＋１（體積比）。

４．９７６％乙醇溶液：?。罚叮埃恚虩o水乙醇，加水定容至１Ｌ。

４．１０７０％乙醇溶液：取７００ｍＬ無水乙醇，加水定容至１Ｌ。

４．１１ＣＴＡＢ提取緩沖液Ⅰ：配制每升ＣＴＡＢ提取緩沖液Ⅰ，應(yīng)在８００ｍＬ去離子水中加入４６．７５ｇ氯

化鈉，搖動容器使溶質(zhì)完全溶解，然后加入５０ｍＬ１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ８．０）［在８００ｍＬ去離子水中溶

解１２１．１ｇ三羥甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓ），冷卻至室溫后用濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的ｐＨ值至８．０（約需４２ｍＬ濃

鹽酸），加水定容至１Ｌ，分裝后高壓滅