犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

犖犢／犜６８０—２００３

禽白血病病毒狆２７抗原

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法

犈狀狕狔犿犲犾犻狀犽犲犱犻犿犿狌狀狅狊狅狉犫犲狀狋犪狊狊犪狔

犳狅狉犪狏犻犪狀犾犲狌犽狅狊犻狊狏犻狉狌狊狆２７犪狀狋犻犵犲狀

２００３０７３０發(fā)布２００３１００１實(shí)施

中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布

書

犖犢／犜６８０—２００３

前言

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄Ａ為規(guī)范性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)診斷中心。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳西釗、蘇敬良、王宏偉、田克恭、吳清民、王傳彬。

Ⅰ

書

犖犢／犜６８０—２００３

禽白血病病毒狆２７抗原

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了禽白血病病毒（ＡＬＶ）ｐ２７抗原酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于檢測(cè)雞蛋蛋清以及雞胚組織細(xì)胞培養(yǎng)物中的ＡＬＶｐ２７蛋白抗原。

２狆２７抗原酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

２．１試驗(yàn)材料

２．１．１試劑

２．１．１．１抗ｐ２７蛋白抗體：應(yīng)用提純的禽成髓細(xì)胞性白血病病毒ｐ２７蛋白免疫家兔制備。

２．１．１．２陽性抗原：含雞白血病／肉瘤病毒群特異性ｐ２７蛋白抗原的雞蛋清。

２．１．１．３陰性抗原：無雞白血病／肉瘤病毒群特異性ｐ２７蛋白抗原的ＳＰＦ雞蛋清。

２．１．１．４酶結(jié)合物：辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗ｐ２７蛋白抗體。

２．１．１．５磷酸鹽緩沖液（ＰＢＳ）：配制見第Ａ．１章。

２．１．１．６包被液：配制見第Ａ．２章。

２．１．１．７洗滌液：配制見第Ａ．３章。

２．１．１．８樣品稀釋液：配制見第Ａ．４章。

２．１．１．９底物溶液：配制見第Ａ．６章。

２．１．１．１０終止液：配制見第Ａ．７章。

２．１．２器材

ａ）酶聯(lián)檢測(cè)儀；

ｂ）聚苯乙烯板；

ｃ）微量加樣器，容量５０μＬ～２００μＬ；

ｄ）３７℃恒溫培養(yǎng)箱。

２．１．３樣品

２．１．３．１雞蛋樣品：將待檢雞蛋小的一端朝上放置，打碎蛋殼，用移液器無菌吸取蛋清，密裝于滅菌小

瓶?jī)?nèi)。

２．１．３．２細(xì)胞培養(yǎng)物：用移液器無菌吸取細(xì)胞培養(yǎng)物，密裝于滅菌小瓶?jī)?nèi)，４℃或－３０℃保存或立即送

檢。試驗(yàn)前將送檢樣品統(tǒng)一編號(hào)，試驗(yàn)時(shí)不做稀釋。

２．２操作方法

２．２．１用包被液將抗ｐ２７蛋白抗體作４０００倍稀釋，每孔１００μＬ加入９６孔聚苯乙烯板中，４℃過夜。

２．２．２取出包被好的聚苯乙烯板，將液體倒棄，每孔加２５０μＬ洗滌液漂洗三次，每次２ｍｉｎ，甩干。

２．２．３每孔加１５０μＬ質(zhì)量濃度為１％的明膠封閉液，３７℃反應(yīng)６０ｍｉｎ。

２．２．４重復(fù)２．２．２。

２．２．５在Ａ１、Ａ２孔各加１００μＬ標(biāo)準(zhǔn)陰性對(duì)照，Ａ３、Ａ４孔各加１００μＬ標(biāo)準(zhǔn)陽性對(duì)照。