C50WS中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T223—2002乙型肝炎表面抗原酶免疫檢驗方法Guidelinesforenzymeimmuno-assayofhepatitisBsurfaceantigen2002-04-20發(fā)布2002-07-01實施中華人民共和國衛(wèi)生部發(fā)布

WS/T223-2002前乙型病毒性肝炎(簡稱乙肝)是由乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus,HBV)引起的傳染性疾病，在我國人群中感染率較高，是嚴(yán)重危害人民身體健康的常見傳染病之一。對乙肝的診斷主要以實驗室檢測乙開表面抗原（HepatitisBsurfaceantigen.HBsAg）為主，檢測方法主要有酶免疫法、反向間接血凝法、放免法、化學(xué)發(fā)光法、免疫熒光法等，目前應(yīng)用較廣、較普及的是酶免疫法本標(biāo)準(zhǔn)所使用的縮略語為HBV、HBsAg。本標(biāo)準(zhǔn)從2002年7月1日起實施。本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部醫(yī)政司提出。本標(biāo)準(zhǔn)由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部人民醫(yī)院肝病研究所負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陶其敏、全文斌。本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部委托衛(wèi)生部臨床檢驗中心負(fù)責(zé)解釋，

中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)乙型肝炎表面抗原酶免疫WS/T223-2002檢驗方法Guidelinesforenzymeimmuno-assayofhepatitisBsurfaceantigen1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了血清HBsAg酶免疫檢驗方法(兩步法)中相關(guān)的技術(shù)要求本標(biāo)準(zhǔn)適用于各基礎(chǔ)、臨床實驗室和流行病學(xué)研究中血清HBsAg測定。方法選擇21常用方法HBsAg的酶免疫檢驗方法根據(jù)反應(yīng)模式可分為"一步法"和"兩步法"兩種方法。一步法"是將待測樣品和酶標(biāo)記抗體同時加入到反應(yīng)孔中進行反應(yīng)，從而達到快速的目的;兩步法"則是先將樣品加入到反應(yīng)孔中，待反應(yīng)結(jié)束后再加入酶標(biāo)記抗體，從而使待測樣品的“捕猶反應(yīng)"和酶標(biāo)記抗體的“酶聯(lián)反應(yīng)"分開進行，因而反應(yīng)更加穩(wěn)定、重復(fù)性也更好。2.2推薦方法由于"一步法"存在產(chǎn)生"前帶現(xiàn)象”的可能，故在本標(biāo)準(zhǔn)中不列為推薦方法；本標(biāo)準(zhǔn)推薦使用酶免疫“兩步法”2.3方法原理本標(biāo)準(zhǔn)推薦使用酶免疫"兩步法"檢測HBsAg:將抗-HBs的單克隆抗體(簡稱單抗)或多克隆抗體（簡稱多抗)包被于聚苯乙烯微孔板等固相載體上，加人待測血清,如其中含有HBsAg,則可與固相上的包被抗體結(jié)合：洗板去除不參加反應(yīng)的無關(guān)蛋白成分后，加入酶（如辣根過氧化物酶)標(biāo)記的第二棟抗體使之與血消中HBeAg反應(yīng)，在固相載體上形成包被抗體-血清中HBeAg-酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物(即雙抗體夾心)：再加入底物后，酶催化底物，產(chǎn)生顯色反應(yīng)，根據(jù)顯色反應(yīng)顏色的深淺可判定血清樣品中HBsAg的有無及相對含量。試劑和材料國內(nèi)目前已有成套的試劑盆供應(yīng)顯色反應(yīng)底物液可選用鄰苯二胺(o-phenylenediamine.OPD）-過氧化氫（H.O.）溶液（簡稱OPD）或3,3′,5,5”-四甲基聯(lián)苯胺（3,3′.5,5”-Tetramethylbenzidine,TMB)-H.O。溶液（簡稱TMB)。使用OPD時，可選用2mol/L的硫酸(H.SO,)作為終止液，比色時選用492nm作為測定波長;使用TMB時，可選用2mol/L的鹽酸或2mol/L的硫酸溶液作為終止液，比色時選用450nm作為測定波長。注：國內(nèi)市場目前亦有HBeAg檢測的快速酶免疫試劑盒供應(yīng)，該試劑盒系加有標(biāo)本加速劑和酶