2012年設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)2012級(jí)臨床五大班實(shí)驗(yàn)室二星期三上午組別：一組資料收集：楊汝平(201201235)(201201236)邱翼(201201238)(201201234)(201201239)(201201240)匯報(bào)：向德航(201201237)案例

患兒，男性，3歲，因面色蒼白伴血尿1天入院。1天前食用新鮮蠶豆后，今日出現(xiàn)惡心、嘔吐、排尿呈醬油樣色，面色蒼白。據(jù)家長(zhǎng)反映，患者的姐姐也曾發(fā)生過(guò)類(lèi)似情況。體格檢查：體溫38℃，脈搏150次/分，呼吸40次/分，血壓80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色蒼白，皮膚及鞏膜黃染，體型較同齡人瘦小。心、肺未及異常，肝、脾未觸及，雙腎區(qū)無(wú)叩擊痛，神經(jīng)系統(tǒng)檢查未及異常。實(shí)驗(yàn)室檢查：紅細(xì)胞1.98×1012/L，血紅蛋白53g/L，血清總膽紅素85.5μmol/L，結(jié)合膽紅素13.7μmol/L，未結(jié)合膽紅素71.8μmol/L，尿蛋白（++），潛血(+)，尿膽紅素(－)，尿膽素原(+)，尿液鏡下未見(jiàn)紅細(xì)胞。（尿三膽）尿膽素（+）、尿膽紅素(－)、尿膽素原(+)肝腸循環(huán)增多膽紅素單核吞噬系統(tǒng)降解血紅素紅細(xì)胞破裂血紅蛋白滲出尿蛋白(++)(1.0g/l)運(yùn)氧功能障礙溶血性貧血循環(huán)血量減少血壓下降脈搏加快(心率加快)呼吸加快過(guò)多>34.2umol/L時(shí)，黃疸①血清總膽紅素↑②結(jié)合膽紅素變化不大（水溶性大，隨尿排出）③未結(jié)合膽紅素↑（水溶性小，不能隨尿排出，有毒）醬油尿初步判斷是何種??？誘因：一天前食用蠶豆既往史：姐姐也曾出現(xiàn)過(guò)此癥狀蠶豆?。?-磷酸葡萄糖脫氫酶缺乏癥）蠶豆病發(fā)病機(jī)制食用蠶豆產(chǎn)生大量過(guò)氧化氫，不被清除紅細(xì)胞膜脂質(zhì)被氧化破壞急性血管內(nèi)溶血，產(chǎn)生過(guò)多膽紅素導(dǎo)致溶血性黃疸，惡心，嘔吐，尿液呈醬油樣6-磷酸葡萄糖脫氫酶缺乏使磷酸戊糖途徑受阻。NADPH+H+缺乏致血還原型谷胱甘肽生成不足。紅細(xì)胞被破壞，則可被肝等單核吞噬細(xì)胞識(shí)別并吞噬，釋放血紅蛋白，進(jìn)一步分解為珠蛋白和血紅素，而血紅素被吞噬細(xì)胞降解為膽紅素。膽紅素是人體內(nèi)原型抗氧化劑，能夠清楚超氧化劑和過(guò)氧化物自由基，因患兒體內(nèi)有大量過(guò)氧化氫，氧化應(yīng)激可誘導(dǎo)HO-1的表達(dá)，從而增加膽紅素的量升高來(lái)抵御氧化應(yīng)激狀態(tài)。從生化代謝解釋患兒的臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果主要臨床表現(xiàn)：1.血尿、排醬油色尿、面色蒼白

2.皮膚及鞏膜黃染

3.體溫升高

4.呼吸急促1.血尿、排醬油色尿、面色蒼白G6PD↓GSH的主要作用：①保護(hù)紅細(xì)胞內(nèi)的含硫氫基（-SH）血紅蛋白、酶蛋白和膜蛋白的完整性，免遭氧化②與谷胱甘肽過(guò)氧化酶共同使

H2O2還原成H2O→NADPH+H+↓→紅細(xì)胞的抗氧化能力↓→GSH↓→紅細(xì)胞膜破裂→溶血性貧血（面色蒼白）→游離Hb>腎吸收閾值→血紅蛋白尿/含鐵血黃素尿2.皮膚及鞏膜黃染4.呼吸急促溶血性貧血↓具有載O2能力的Hb含量下降↓機(jī)體缺O(jiān)2↓呼吸急促實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)高鐵血紅蛋白還原法實(shí)驗(yàn)思路患者姐姐出現(xiàn)過(guò)此類(lèi)狀況推測(cè)屬于家族性遺傳，且患者在食用蠶豆后出現(xiàn)癥狀，故即有可能為蠶豆病。6-磷酸葡萄糖脫氫酶缺乏影響高鐵血紅蛋白的還原，故可以依據(jù)如下反應(yīng)機(jī)制設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。亞鐵血紅蛋白高鐵血紅蛋白高鐵血紅蛋白還原酶

NADPH(輔酶)

亞甲藍(lán)(遞氫體)亞硝酸鈉實(shí)驗(yàn)反應(yīng)方向二、實(shí)驗(yàn)原理

在全血中加入亞硝酸鈉，使紅細(xì)胞中的亞鐵血紅蛋白氧化為高鐵血紅蛋白（MHb）,高鐵血紅蛋白在高鐵血紅蛋白還原酶的作用下又被還原為亞鐵血紅蛋白。在這過(guò)程中，高鐵血紅蛋白還原酶不僅需要亞甲藍(lán)作為遞氫體，還需要由G6PD參與磷酸戊糖途徑形成NADPH作為輔酶才完成上述反應(yīng)。所以，G6PD缺陷癥的患者其MHb還原率下降（分光光度技術(shù)）。三、實(shí)驗(yàn)器材及試劑器材：離心機(jī)、分光光度計(jì)、微量移液器水浴箱、1.5mlEP管、抗凝管，試管試劑：①0.18mol/L亞硝酸鈉-葡萄糖溶液；②0.4mmol/L亞甲藍(lán)溶液；③0.28mol/L葡萄糖溶液、混合液（等量①+②+③）生理鹽水、抗凝劑、患者靜脈血、蒸餾水四、實(shí)驗(yàn)步驟1、取靜脈血1.8mL于抗凝管(含0.2mL109mmol/L抗凝劑+葡萄糖20mg），混勻2、離心沉淀1000r/min15min3、調(diào)整血細(xì)胞∶血漿=1∶1，混勻，（調(diào)整后全血）4.1ml0.18mol/L亞硝酸鈉、1ml0.28mol/L葡萄糖溶液、0.14mmol/L亞甲基藍(lán)液，混勻，得到混合試劑1ml五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算：計(jì)算高鐵血紅蛋白還原率公式：MHb%=(1-A/S)×100%計(jì)算出其還原率與正常值比較六、實(shí)驗(yàn)分析該患者可能患有先天性鐮刀貧血癥或蠶豆病。正常的高鐵血紅蛋白還原率>75%，若計(jì)算所得還原率低于75%，且患者姐姐也有類(lèi)似癥狀，患者吃過(guò)蠶豆后發(fā)病，故可推斷患者患有蠶豆病七、注意事項(xiàng)1、血細(xì)胞比容比值過(guò)低，高鐵血紅蛋白還原率降低。應(yīng)將血細(xì)胞比容調(diào)整到0.35-0.402、細(xì)菌污染可產(chǎn)生亞硝酸鹽而造成假陽(yáng)性，試管等應(yīng)無(wú)菌3、不穩(wěn)定Hb、高脂血癥等均可出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，故應(yīng)2h內(nèi)送檢4、標(biāo)本不應(yīng)有凝血或溶血，故需使用抗凝管5、在標(biāo)本內(nèi)應(yīng)適當(dāng)加入葡萄糖，以避免較