1全國婦幼保健協(xié)會HCY重大課題介紹杭州中翰盛泰生物技術(shù)有限公司

溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院（同型半胱氨酸檢測的質(zhì)量保證方案）陳曉東該項目背景品牌的優(yōu)勢生化與方法性能和特點質(zhì)量保證措施2

一、項目的背景（一）

出生缺陷是我國政府亟待解決的

重大社會問題

出生死亡率在下降，但缺陷率在上升。出生缺陷發(fā)生率大概在5.6%左右每年新增90萬，明顯可見的25萬……“人口與健康”目標(biāo)：15億，＜3%？HCY和葉酸：1%的貢獻(xiàn)……？中國婦幼保健協(xié)會HCY課題的實施3

項目的背景（二）已證實葉酸代謝與出生缺陷相關(guān)，和孕期、圍產(chǎn)期合并癥相關(guān)。但發(fā)生機理并不是葉酸缺乏，而是和血液中HCY不能正常代謝。調(diào)查HCY相關(guān)影響因素，提出針對不同HCY水平和基因多態(tài)性婦女的圍孕期葉酸增補模式并予以人群驗證，建立起成體系的檢測、干預(yù)、健康管理的標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范。步驟：張家港6（試點）→50—100家→＞1000家

整省加入—覆蓋全國4同型半胱氨酸具有胚胎毒性我國每隔40秒鐘就會有一個缺陷兒出生出生缺陷病因復(fù)雜，機理未清，出生后干預(yù)有心無力孕期補充葉酸或含葉酸維生素復(fù)合劑可降低胎兒出生缺陷發(fā)生率同型半胱氨酸—妊娠與優(yōu)生5高HCY血癥對孕期的影響近年發(fā)現(xiàn)，孕婦血漿中HCY水平升高可直接影響宮內(nèi)胎兒生長發(fā)育，發(fā)生胎兒流產(chǎn)、胎兒生長受限、胎兒畸形、死胎、新生兒出生缺陷以及一些妊娠相關(guān)疾病(如PIH、胎盤早剝、胎盤血管疾病)，并可能與早產(chǎn)、低體重兒等密切相關(guān)。6目前已在CFDA注冊產(chǎn)品數(shù)據(jù)檢索至國家食品藥品監(jiān)督局網(wǎng)站，截止2015年2月3日二、中翰盛泰HCY品牌、性能優(yōu)勢

項目組為什么選用本公司HCY？來自國際知名品牌—英國Axis-Shield8JOINSTAR與英國Axis-Shield全面戰(zhàn)略合作9HCY循環(huán)酶法檢測

專利使用現(xiàn)狀國內(nèi)其它公司產(chǎn)品雅培、羅氏、貝克曼的試劑（包括免疫法）都源自：Axis-ShieldHCYAXIS-SHIELDHCY:專業(yè)專注20年10實行雙品牌、同品質(zhì)戰(zhàn)略英國ASD公司原裝進(jìn)口自產(chǎn)：專利許可，技術(shù)轉(zhuǎn)讓同工藝，同原料，同標(biāo)準(zhǔn)—保證原裝品質(zhì)11JacobsenDW,Ed.RobinsonK,HomocysteineandVascularDisease,2000,15-392CHCHHOOC2CH2NHSH帶有巰基的一個氨基酸巰基有活性，可以進(jìn)行氧化還原反應(yīng)不存在于飲食蛋白中從蛋氨酸中形成代謝依賴于葉酸和B族維生素

三、HCY的生化與檢測方法胱氨酸1212DuVigneaud1932首次提出HcyMcCully1969

首次在基因紊亂的患者中提出血管組織病理學(xué)，叫高胱氨酸尿癥，提示高Hcy可能引起早期血管疾病。美國哈佛-1995WilckenCVD患者Hcy水平升高

通過補充維生素來糾正Boushey升高5μmol/L，在女性中的風(fēng)險性增加80%，而男性60%KilmerMcCullyDuVigneaudHomocysteine

的發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用同型半胱氨酸的代謝心腦血管疾病糖尿病腎病中風(fēng)老年、血管性癡呆，靜脈栓塞腫瘤同型半胱氨酸升高—相關(guān)疾病妊娠并發(fā)癥幾率增加：

習(xí)慣性流產(chǎn)、先兆子癇、早產(chǎn)、新生兒體重低新生兒缺陷，神經(jīng)管缺陷高壓液相層析+電泳液相層析+質(zhì)譜分析高壓液相+熒光/紫外氨基酸分析儀毛細(xì)管電泳+激光誘導(dǎo)熒光測定酶免疫測定熒光偏振酶免疫測定雙循環(huán)酶法HCY測定的方法學(xué)演變兩種酶法原理比較

總同型半胱氨酸

同型半胱氨酸

TCEP

S-腺苷-甲硫氨酸

S-腺苷-L-同型半胱氨酸

同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶

S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶

腺苷

NH3

α-酮戊二酸

谷氨酸脫氫酶

NADH

NAD＋

谷氨酸

腺苷脫氨酶1.五步反應(yīng)；2.共7種底物參與反應(yīng)；3.反應(yīng)需要NH3的參與。方法（一）谷氨酸脫氫酶法方法（二）—乳酸脫氫酶法總同型半胱氨酸TCEP絲氨酸同型半胱氨酸胱硫醚CBSCBLNH3丙酮酸NADHNAD＋乳酸乳酸脫氫酶1.Axis-Shield公司專利；2.四步反應(yīng)；3.共5種底物參與反應(yīng)；4.無NH3參與。（三）兩種循環(huán)酶法-典型反應(yīng)曲線可測量區(qū)段少；可使用測試模式少；A1-A2變化值321。反應(yīng)段接近直線，可使用測試模式多；A1-A2變化值594；靈敏度高；線性可加大。19溯源性：NISTSRM1955

每盒產(chǎn)品中均包含校準(zhǔn)液與試劑一起注冊

目前有很多國內(nèi)廠家的HCY試劑不含校準(zhǔn)液（一）校準(zhǔn)品的溯源性四、本HCY試劑的方法性能優(yōu)勢1.1可溯源的參考物質(zhì)-外部有證參考物質(zhì)：美國國家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究院SRM1955(NationalInstituteofStandardsandTechnology，NISTSRM1955)三個濃度水平： Level1:3.98±0.18μmol/LLevel2:8.85±0.60μmol/LLevel3:17.7±1.1μmol/L用四種測量程序賦值LC/MS、GC/MS、FPIA、LC-FD。1.2可溯源的參考物質(zhì)-內(nèi)部

工作校準(zhǔn)品-Axis-Shield —六個濃度水平。

內(nèi)部質(zhì)控品（QCPanels）

—來源于Axis-Shield，共17個。

產(chǎn)品校準(zhǔn)品-來源于Axis-Shield

兩個濃度（0μmol/L,28μmol/L）

質(zhì)控品-來源于Axis-Shield

三個濃度……1.3產(chǎn)品的量值溯源

ASDLC/MSNISTSRM1955(μmol/L)工作校準(zhǔn)品HPLC產(chǎn)品校準(zhǔn)品HCY測定試劑常規(guī)樣本檢測結(jié)果校準(zhǔn)賦值程序?qū)嵤㎞ISTASDASDASD＆JSJS＆客戶終端客戶終端客戶物質(zhì)ASD:Axis-ShieldJS:JoinStar23（二）適用性和穩(wěn)定性

適用生化儀機型

（幾乎所有）上機穩(wěn)定性：30天校準(zhǔn)穩(wěn)定性：30天視生化機型不同而略有差別

對AU系列的建議24（三）有證質(zhì)控品英文名稱：HCY

ControlKit注冊證號：國食藥監(jiān)械（進(jìn)）字2011第2402152號產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)：YZB/UK2144-2011生產(chǎn)廠家：英國Axis-ShieldDiagnosticsLtd.規(guī)格：FHCY200CN：

低值：1×1.5ml

中值：1×1.5ml

高值：1×1.5ml定值質(zhì)控品也可溯源到：—NISTSRM1955對質(zhì)控品的應(yīng)用建議（四）本HCY試劑的方法性能精密度（重復(fù)性）準(zhǔn)確度1（比對試驗）準(zhǔn)確度2（抗干擾試驗）分析靈敏度（LOB/LOD/FS）線性范圍（可報告范圍）穩(wěn)定性（上機、定標(biāo)）26264.1—精密度樣本試劑批號均值(μmol/L)批內(nèi)CV%TotalCV%1組17.01.93.327.02.24.42組136.01.32.5235.51.12.33組148.31.12.0247.71.02.2低值質(zhì)控16.32.64.426.32.14.1中值質(zhì)控112.31.53.0212.21.33.2高值質(zhì)控125.51.52.5225.31.62.9OlympusAU400上建立的數(shù)據(jù)4.2—準(zhǔn)確性用病人標(biāo)本作方法比對(來自省人民醫(yī)院臨床試驗資料)4.3準(zhǔn)確性—抗干擾干擾物質(zhì)干擾物質(zhì)濃度干擾百分比Bilirubin20mg/dL≤+10Haemoglobin500mg/dL≤+10RedBloodCell0.4%≤+10Triglyceride500mg/dL≤+10Glutathione1000μmol/L≤+10Methionine800μmol/L≤+10Cysteine200μmol/L≤+10Pyruvate1250μmol/L≤+104.4靈敏度LOB≤0.5LOD≤0.7FS：樣本濃度1.0左右CV約為2%323334353637383940414243444546474849505152ABCDEFSample125810Day10.90.80.60.70.5Day10.70.90.70.60.8Day10.80.90.71.10.6Day10.70.70.70.71.0Day10.80.90.60.81.0Day20.60.80.71.20.9Day21.00.90.90.80.5Day21.01.00.80.80.5Day20.91.00.70.81.1Day20.50.70.71.20.8Day30.80.80.70.80.7Day30.60.60.30.70.5Day30.80.80.40.50.8Day30.50.90.50.70.8Day30.90.80.70.90.9Average0.80.80.60.80.8SD0.16330.11130.15060.20420.2028SD20.02670.01240.02270.04170.0411Cochran'sDFN-1=140.28854.5稀釋線性稀釋線性：[1-50]μmol/L4.6穩(wěn)定性試劑儲存穩(wěn)定性：12個月；上機穩(wěn)定性：30天；校準(zhǔn)曲線穩(wěn)定性：30天；上述穩(wěn)定性數(shù)據(jù)為日立7100數(shù)據(jù)，

儀器及使用環(huán)境不同略有偏差。婦幼保健協(xié)會HCY課題準(zhǔn)確實施

（同型半胱氨酸檢測的質(zhì)量保證方案）

32

五、如何保障：33三個層面：保障結(jié)果準(zhǔn)確性、一致性英國ASD公司支持公司室內(nèi)質(zhì)控，

參加衛(wèi)生部室間質(zhì)評出廠批性能驗證(8個指標(biāo))工程師上門調(diào)試，

再次驗證試劑性能不定期動態(tài)檢驗各省區(qū)代理商的支持公司層面統(tǒng)一操作手冊(SOP)統(tǒng)一質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，要求客戶做規(guī)范的室內(nèi)質(zhì)控(L-J質(zhì)控圖+Wesgard的1,2規(guī)則)并每天進(jìn)行數(shù)據(jù)上傳醫(yī)院層面各單位室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)上傳，觀察CV值或失控原因定期進(jìn)行室間調(diào)查，一致性評價（每次5個濃度）同衛(wèi)生部和上海臨檢中心的做法專家咨詢項目組層面網(wǎng)絡(luò)信息貫穿檢驗申請患者準(zhǔn)備標(biāo)本采集標(biāo)本運送34檢驗分析的全過程分析前分析中分析后標(biāo)本處理標(biāo)本分析質(zhì)量控制報告結(jié)果審核發(fā)放臨床解釋投訴建議信息反饋

各單位加強分析全過程質(zhì)量控制35351、質(zhì)控圖的定義規(guī)范室內(nèi)質(zhì)控；Levey-Jennings質(zhì)控圖共二個水平3636建議：使用Westgard至少二個規(guī)則

（自己室內(nèi)可用-常規(guī)六規(guī)則）

若本批檢驗有一個質(zhì)控結(jié)果超