第三章

基因工程制藥基因工程的基礎(chǔ)知識第一節(jié)基因的概念與特性一、基因的概念:DNA分子中含有特定遺傳信息的一段核苷酸序列,是遺傳物質(zhì)的最小功能單位。早期認(rèn)為遺傳物質(zhì)是蛋白質(zhì)，1944年Avery從肺炎鏈球菌轉(zhuǎn)化實驗證明是DNA。A：S有夾膜致病菌，B：R突變非致病菌，C：加熱殺死S菌，D：活R死S三、DNA的結(jié)構(gòu)與性能⒈DNA的結(jié)構(gòu)：四種核苷酸（ATCG）連接。DNA二級結(jié)構(gòu)雙螺旋結(jié)構(gòu)。⒉DNA的性質(zhì)與功能①吸收光譜260②電場中泳動③變性復(fù)性雜交第二節(jié)DNA的復(fù)制與表達一、DNA的復(fù)制：半保留復(fù)制

二、基因表達⒈轉(zhuǎn)錄：在RNA聚合酶的催化下以DNA為模板合成mRNA的過程。

轉(zhuǎn)錄后加工：剪切：除去內(nèi)含子加帽：5’加m7Gppp加尾：3’加poly（A）

基因表達真核細(xì)胞的翻譯過程⒉翻譯后的肽鏈加工肽鏈切斷①羥基化②糖基化③磷酸化④乙?；谝还?jié)概述20世紀(jì)70年代基因工程誕生最先應(yīng)用在醫(yī)藥科學(xué)領(lǐng)域。1982年第一個基因工程產(chǎn)品--人胰島素在美國問世。優(yōu)點:大量生產(chǎn)、應(yīng)用臨床、深入研究、擴大應(yīng)用、改造不足。第二節(jié)基因工程藥物生產(chǎn)的基本過程基因工程技術(shù)是將重組對象的目的基因插入載體，拼接后轉(zhuǎn)入新的宿主細(xì)胞，構(gòu)建成工程菌(或細(xì)胞），實現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重新組合，并使目的基因在工程菌內(nèi)進行復(fù)制和表達的技術(shù)?；蚬こ袒具^程基因工程藥物制藥的主要程序獲得目的基因組建重組質(zhì)粒構(gòu)建工程菌（或細(xì)胞）培養(yǎng)工程菌產(chǎn)物分離純化除菌過濾半成品檢定成品檢定包裝第三節(jié)目的基因的獲得克隆真核基因常用方法：逆轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法。

一、逆轉(zhuǎn)錄法逆轉(zhuǎn)錄法就是先分離純化目的基因的mRNA，在反轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后進行cDNA的克隆表達。⒈mRNA的純化⒉cDNA第一鏈的合成⒊cDNA第二鏈的合成⒋cDNA的克?、祵⒅亟M體導(dǎo)入宿主細(xì)胞⒍cDNA文庫的鑒定⒎目的cDNA克隆的分離和鑒定用化學(xué)法合成目的基因DNA不同部位的兩條鏈的寡核苷酸短片段，再退火成為兩端形成粘性末端的DNA雙鏈片段，然后將這些雙鏈片段按正確的次序進行退火使連接成較長的DNA片段，再用連接酶連接成完整的基因。人工化學(xué)合成基因的限制有：⒈不能合成太長的基因。目前DNA合成儀所合成的寡核苷酸片段僅為50～60bp，因此只適用于克隆小分子肽的基因。⒉遺