實驗八大分子物質(zhì)的水解和糖發(fā)酵試驗第一頁，共十三頁，2022年，8月28日一、目的與要求證明不同微生物對各種有機(jī)大分子的水解能力不同，從而說明不同微生物有著不同的酶系。掌握微生物大分子水解試驗的原理和方法。了解糖發(fā)酵的原理及在腸道細(xì)菌鑒定中的重要作用。掌握通過糖發(fā)酵鑒別不同微生物的方法。學(xué)習(xí)微生物接菌技術(shù)。第二頁，共十三頁，2022年，8月28日二、基本原理1、淀粉水解試驗微生物不能直接利用淀粉，必須靠自身產(chǎn)生的胞外淀粉酶將大分子淀粉分解成糊精、雙糖和單糖才能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，細(xì)菌是否能產(chǎn)生淀粉酶可通過觀察細(xì)菌菌落周圍的淀粉物質(zhì)是否被水解來證實，淀粉遇碘液會產(chǎn)生藍(lán)色，被細(xì)菌水解淀粉的區(qū)域，用碘則呈褐色。第三頁，共十三頁，2022年，8月28日二、基本原理2、明膠水解試驗微生物不能直接利用明膠這蛋白質(zhì)，必須靠自身產(chǎn)生的胞外明膠酶將大分子蛋白質(zhì)水解成蛋白胨或氨基酸才能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，細(xì)菌能否產(chǎn)生明膠酶可通過明膠穿刺培養(yǎng)來證實，在微生物的明膠酶作用下，明膠失去凝固性，呈液化狀態(tài)。第四頁，共十三頁，2022年，8月28日二、基本原理3、糖發(fā)酵試驗糖發(fā)酵試驗是常用的鑒別微生物的生化反應(yīng)，在腸道細(xì)菌的鑒定中尤為重要。大腸菌群能在370C培養(yǎng)下，利用乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣。當(dāng)產(chǎn)酸時，溴甲酚紫指示劑可由紫色（pH6.8）變?yōu)辄S色（pH5.2）。當(dāng)產(chǎn)氣時，可通過倒置小倒管內(nèi)的氣泡來判斷。第五頁，共十三頁，2022年，8月28日圖糖類發(fā)酵試驗

第六頁，共十三頁，2022年，8月28日三、實驗器材1、菌種：枯草芽孢桿菌、普通變形桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌2、培養(yǎng)基：淀粉培養(yǎng)基2塊培養(yǎng)血/每組(6人）明膠半固體培養(yǎng)基5支試管/每組(6人）乳糖發(fā)酵培養(yǎng)液3支試管/每組(6人）葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)液3支試管/每組(6人）2、試劑：碘液3、儀器或其他用具：培養(yǎng)箱、水浴鍋、接種環(huán)、接種針、酒精燈、無菌培養(yǎng)血等。第七頁，共十三頁，2022年，8月28日四、操作步驟1、淀粉水解試驗溶化三角瓶內(nèi)的淀粉培養(yǎng)基→趁熱倒入二塊無菌培養(yǎng)皿各內(nèi)約15ml→冷凝后點(diǎn)植法接入大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌→貼好標(biāo)簽→平板倒置，370C培養(yǎng)24小時→滴加碘液鑒別有無淀粉水解圈2、明膠水解試驗取五支明膠試管培養(yǎng)基→用接種針分別穿刺接入大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、普通變形桿菌，另一支不接菌為空白對照管→貼好標(biāo)簽→

200C培養(yǎng)3-5d

→觀察明膠液化情況第八頁，共十三頁，2022年，8月28日四、操作步驟3、乳糖發(fā)酵試驗取三支乳糖蛋白胨培養(yǎng)基→分別接入大腸桿菌、普通變形桿菌，另一支不接菌為空白對照管→貼好標(biāo)簽→

370C培養(yǎng)24小時→觀察產(chǎn)酸、產(chǎn)氣情況4、葡萄糖發(fā)酵試驗取三支葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基→分別接入大腸桿菌、普通變形桿菌，另一支不接菌為空白對照管→貼好標(biāo)簽→

370C培養(yǎng)24小時→觀察產(chǎn)酸、產(chǎn)氣情況操作要點(diǎn)：注意無菌操作，勿染雜菌。接好菌的平板一定要倒置放入培養(yǎng)箱中。第九頁，共十三頁，2022年，8月28日無菌操作技術(shù)第十頁，共十三頁，2022年，8月28日五、實驗數(shù)據(jù)及處理結(jié)果1、大分子物質(zhì)水解試驗

將結(jié)果填入下表?！?”表示陽性，“-”表示陰性菌名淀粉水解試驗明膠水解試驗枯草芽孢桿菌普通變形桿菌金黃色葡萄球菌對照第十一頁，共十三頁，2022年，8月28日2、糖發(fā)酵試驗將結(jié)果填入下表?！皑?/p>

”表示產(chǎn)酸產(chǎn)氣，“+”表示產(chǎn)酸，“-”表示陰性糖類發(fā)酵大腸桿菌普通變形桿菌對照葡萄糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵第十二頁，共十三頁，2022年，8月28日六、思考