課題2月季的花藥培養(yǎng)單倍體育種花藥ABAbaBab離體培養(yǎng)二倍體植物AaBb單倍體幼苗ABAbaBab秋水仙素純合二倍體AABBAabbaaBBaabb特點(diǎn)：明顯縮短育種年限花藥離體培養(yǎng)：花藥單倍體幼苗單倍體育種：花藥單倍體幼苗純合二倍體花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉雄蕊一、被子植物的花粉發(fā)育減數(shù)分裂四分體時(shí)期有絲分裂營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞2個(gè)精子有絲分裂

花粉母細(xì)胞（小孢子母細(xì)胞）4個(gè)小孢子減數(shù)分裂1個(gè)小孢子

花粉粒（雙核）有絲分裂花粉管細(xì)胞核營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞生殖細(xì)胞核2個(gè)精子花粉是小孢子母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細(xì)胞。1花粉母細(xì)胞4個(gè)小孢子減分有分4個(gè)花粉管細(xì)胞核4個(gè)生殖細(xì)胞核有分8個(gè)精子花粉的發(fā)育要經(jīng)歷：四分體時(shí)期、單核期、雙核期（二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑①②移栽花藥中的花粉胚狀體脫分化愈傷組織花藥中的花粉脫分化分化

叢芽再分化

叢芽誘導(dǎo)生根體細(xì)胞胚（胚狀體）：在組織培養(yǎng)過程中，某些細(xì)胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu)，發(fā)育過程亦與合子胚類似這兩種途徑之間沒有絕對(duì)的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及濃度配比。胚狀體——在組織培養(yǎng)過程中，某些細(xì)胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu)，發(fā)育過程亦與合子胚類似；神奇的人工種子愈傷組織轉(zhuǎn)接種到再生培養(yǎng)基愈傷組織分化形成再生植株水稻花藥培養(yǎng)愈傷組織發(fā)育途徑部分花藥產(chǎn)生愈傷組織接種在平板上的水稻花藥胚狀體：離體培養(yǎng)的某些體細(xì)胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu)，胚芽，胚軸，胚根等結(jié)構(gòu)完整，就像一顆種子，這種結(jié)構(gòu)叫體細(xì)胞胚，或胚狀體。愈傷組織：離體的組織細(xì)胞經(jīng)過細(xì)胞分裂，形成的排列疏松無規(guī)則，高度液泡化呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。一般來說，在單核期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥培養(yǎng)的成功率最高。即：最適合花藥培養(yǎng)的小孢子發(fā)育時(shí)期為單核靠邊期。選擇單核期以前的花藥接種，質(zhì)地幼嫩，極易破碎；選擇單核期之后的花藥接種，花瓣已有些松動(dòng)，又給材料的消毒帶來困難，且難以挑選到單核期的花藥。③花藥培養(yǎng)時(shí)期的選擇④其它時(shí)期選擇的缺點(diǎn)為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全未開放的花蕾。盛開的或略微開放的花，都不宜選作實(shí)驗(yàn)材料。⑥選擇完全未開放花蕾的原因完全未開放的花蕾，可挑選到單核期的花藥，菌少、易消毒⑤單核期花藥的挑選⑦為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來困難？

花瓣松動(dòng)后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難。⑦花藥培養(yǎng)時(shí)間一般月季的花藥培養(yǎng)時(shí)間選在5月初到5月的中旬，即月季的初花期。初花期的花蕾營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)及生理狀態(tài)會(huì)比較好，可提高花粉的誘導(dǎo)成功率。（一）材料選取

從花藥看：月季的初花期從花粉看：?jiǎn)魏似?/p>

從花蕾看：完全未開放的

四、實(shí)驗(yàn)操作1.我們?cè)鯓舆x擇想要的花粉呢？

鏡檢方法：醋酸洋紅法(將染色體染成紅色)

焙花青-鉻礬法(花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色)。

花藥（載玻片上）→1%的醋酸洋紅1滴→用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片→鏡檢（花粉粒的細(xì)胞核被染成紅色）

花藥（在卡諾氏固定液中處理20min）→取出，置于載玻片上→焙花青－鉻礬溶液染色→蓋上蓋玻片→鏡檢（花粉粒的細(xì)胞核被染成藍(lán)黑色）2.我們?cè)鯓颖ＷC所選的材料處于單核期？（一）材料選取2、通過鏡檢來確定是否處于適宜的發(fā)育期。

方法：醋酸洋紅法(將染色體染成紅色)

焙花青-鉻礬法(花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色)。1、從花藥看：月季的初花期從花粉看：?jiǎn)魏似?/p>

從花蕾看：完全未開放的

四、實(shí)驗(yàn)操作在無菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥②要徹底去除花絲，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。立即將花藥接種于培養(yǎng)基上，通常每瓶接種花藥7-10個(gè)。1、剝?nèi)』ㄋ帰傥饟p傷花藥，否則接種后容易從受傷部位產(chǎn)生愈傷組織。2、接種注意：（三）接種和培養(yǎng)①培養(yǎng)條件：溫度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

3、培養(yǎng)②培養(yǎng)：一般經(jīng)過20-30天培養(yǎng)后，會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體。長(zhǎng)出愈傷組織則將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。③注意：如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個(gè)花藥內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。接種是否成功如果接種的花藥長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體，花藥培養(yǎng)的第一步就成功了。要適時(shí)轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基，以便愈傷組織或胚狀體進(jìn)一步分化成再生植株。課題成果評(píng)價(jià)植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)花藥培養(yǎng)技術(shù)相同點(diǎn)1培養(yǎng)基配制方法、無菌技術(shù)及接種操作等基本相同