第三章植物細(xì)胞工程

PlantCellEngineering第一節(jié)細(xì)胞工程的基礎(chǔ)知識(shí)與基本技術(shù)1.基礎(chǔ)知識(shí)原核細(xì)胞：DNA裸露，生長(zhǎng)迅速，易于操作；但細(xì)胞壁為肽聚糖，表達(dá)真核基因受一定限制。真核細(xì)胞：接近人類(lèi)需要，但具細(xì)胞周期，要同步化培養(yǎng)；生長(zhǎng)慢，植物細(xì)胞和真菌細(xì)胞具細(xì)胞壁（纖維素和果膠）。植物細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特征植物細(xì)胞的亞顯微結(jié)構(gòu)

（質(zhì)膜）洋蔥表皮細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)細(xì)胞壁cellwall細(xì)胞核nucleus液泡vacuole細(xì)胞質(zhì)Cytoplasm葉綠體Chloroplast動(dòng)植物細(xì)胞區(qū)別

細(xì)胞壁、質(zhì)體、液泡三部分是植物細(xì)胞特有的結(jié)構(gòu)，動(dòng)物細(xì)胞沒(méi)有。植物細(xì)胞是完整的,一個(gè)健全的植物細(xì)胞通過(guò)分化與增殖可發(fā)于成一株完整的植物,但動(dòng)物細(xì)胞不可以。模式植物細(xì)胞構(gòu)造

細(xì)胞壁胞間層初生壁次生壁后含物

原生質(zhì)體貯藏物質(zhì)晶體細(xì)胞膜細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞器細(xì)胞核模式植物細(xì)胞模式植物細(xì)胞是由細(xì)胞壁、原生質(zhì)體、后含物三大部分組成質(zhì)體線粒體液泡內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核糖體高爾基體植物細(xì)胞全能性指植物的每個(gè)細(xì)胞都包含著該物種的全部遺傳信息，從而具備發(fā)育成完整植株的遺傳能力。在適宜條件下，任何一個(gè)細(xì)胞都可以發(fā)育成一個(gè)新個(gè)體。植物細(xì)胞全能性是植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)。離體培養(yǎng)之所以能夠成功，首先是由于植物細(xì)胞具有全能性的緣故。一個(gè)細(xì)胞所具有的產(chǎn)生完整生物個(gè)體的固有能力。2.基本操作2.1無(wú)菌操作概念與技術(shù)無(wú)菌室布局、衛(wèi)生、消毒、超凈臺(tái)第一節(jié)細(xì)胞工程的基礎(chǔ)知識(shí)與基本技術(shù)無(wú)菌操作asepsis實(shí)驗(yàn)員消毒實(shí)驗(yàn)室、無(wú)菌臺(tái)滅菌實(shí)驗(yàn)器材的滅菌無(wú)菌接種消毒實(shí)驗(yàn)臺(tái)衛(wèi)生培養(yǎng)室培養(yǎng)(1)消毒，更換實(shí)驗(yàn)服、帽子與鞋子，進(jìn)入接種室。(2)打開(kāi)超凈工作臺(tái)和無(wú)菌操作室的紫外燈，照射40min左右，后關(guān)閉。(3)開(kāi)啟過(guò)濾室風(fēng)機(jī)，使無(wú)菌風(fēng)吹拂工作臺(tái)面和四周的臺(tái)壁。(4)用70%—75%的酒精擦拭工作臺(tái)和雙手。(5)用沾有70%—75%酒精的紗布擦拭盛培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿，放進(jìn)工作臺(tái)。(6)把解剖刀、剪刀、鑷子等器械浸泡在95%的酒精中，再在火焰上消毒，放在器械架上。(7)在酒精燈火焰附近切割備用的接種材料。(8)打開(kāi)瓶口，用火焰燒瓶口，轉(zhuǎn)動(dòng)瓶口使瓶口各部分都燒到。(9)取下接種器械，在火焰上消毒。(10)把培養(yǎng)材料放入培養(yǎng)瓶，蓋上瓶口。(11)接種結(jié)束后，清理和關(guān)閉超凈工作臺(tái)。取樣滅菌培養(yǎng)傳代收獲除菌取樣原生質(zhì)體融合篩選鑒定2.基本操作2.1細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)第一節(jié)細(xì)胞工程的基礎(chǔ)知識(shí)與基本技術(shù)2.3

細(xì)胞融合技術(shù)第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境一、所需環(huán)境條件與自然條件一樣，組織培養(yǎng)中的材料的生長(zhǎng)要受到溫度、光照、濕度等各種物理?xiàng)l件，不同氣體、培養(yǎng)基的組成、pH值和滲透壓等各種化學(xué)條件，以及外植體部位、大小、細(xì)胞密度等各種生物條件等環(huán)境條件的影響。如何根據(jù)需要來(lái)控制培養(yǎng)條件是組織培養(yǎng)中的一個(gè)重要問(wèn)題。溫度光照濕度氣體培養(yǎng)基的滲透壓pH值植物材料一般最適溫度在25±2℃之間環(huán)境條件最常用的光周期是光照16h，黑暗8h一般情況下，培養(yǎng)器內(nèi)相對(duì)濕度應(yīng)達(dá)100%，培養(yǎng)室內(nèi)環(huán)境的相對(duì)濕度在70%—80%氧氣是愈傷組織生長(zhǎng)所必需的

調(diào)節(jié)滲透壓常常從糖入手

植物組織培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基的pH值大多在5.0—6.5二、營(yíng)養(yǎng)成分植物體內(nèi)至少含有幾十種化學(xué)元素，其中大部分元素在植物體內(nèi)起到一定的生理作用：a、組成各種化合物，參與機(jī)體的建造，成為結(jié)構(gòu)物質(zhì)；b、構(gòu)成一些特殊的生理活性物質(zhì)，參與活躍的新陳代謝；c、元素之間相互協(xié)調(diào)，以維持離子濃度平衡、膠體穩(wěn)定、電荷平衡等點(diǎn)化學(xué)方面的作用；d、發(fā)育方面，特定的元素影響植物的形態(tài)發(fā)生和組織、器官建成。第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的高等植物所必需的營(yíng)養(yǎng)元素有16（17）種：

C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、（Ni）在植物中含量差別很大，同一元素在植物不同時(shí)期、不同條件下含量也不同。根據(jù)植物體內(nèi)含量多少，可把這些元素分為※大量營(yíng)養(yǎng)元素：占干物質(zhì)重量的0.1%以上；

C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等9種※微量營(yíng)養(yǎng)元素：占干物質(zhì)重量的0.1%以下有的只含0.1mg/kgFe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等7種按照國(guó)際植物生理協(xié)會(huì)的建議：所需濃度>0.5mmol/L的元素為大量元素所需濃度<0.5mmol/L的元素為微量元素1、大量元素N:是蛋白質(zhì)、酶、葉綠素、維生素、核酸、磷脂、生物堿等的組成成分，在植物生命活動(dòng)中占有重要的位置。

P:是磷脂的主要成分。培養(yǎng)基中常用KH2PO4NaH2PO4等。

K:對(duì)碳水化合物合成，轉(zhuǎn)移，以及氮素代謝等有密切關(guān)系。二、營(yíng)養(yǎng)成分第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境Mg、S、Ca:是葉綠素的組成成分，又是激酶的活化劑，對(duì)核蛋白體結(jié)構(gòu)具有穩(wěn)定作用；S:是含S氨基酸的蛋白質(zhì)的組成成分。Ca:是構(gòu)成細(xì)胞壁的成分，對(duì)細(xì)胞分裂，穩(wěn)定質(zhì)膜結(jié)構(gòu)有顯著作用，此外，Ca及鈣調(diào)素在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。2、微量元素

在微量元素中，鐵的使用最大：

◆一些氧化酶的組成成分

◆葉綠素形成的必要條件

◆使用乙二胺四乙酸鐵（EDTA-Fe）鰲合物防止鐵的沉淀二、營(yíng)養(yǎng)成分第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境

硼與蛋白質(zhì)合成、糖類(lèi)運(yùn)輸有著密切的關(guān)系

銅是某些氧化酶的成分，能夠促進(jìn)離體根的生長(zhǎng)

錳參與植物的光合、呼吸代謝

鉬參與氮素的代謝

氯是光合作用水光解的活化劑

微量元素的主要作用是作為酶的輔助因子或激活劑參與代謝的調(diào)節(jié)。二、營(yíng)養(yǎng)成分第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境3、碳源碳源物質(zhì)包括糖類(lèi)物質(zhì)、醇類(lèi)物質(zhì)和有機(jī)酸，以糖類(lèi)物質(zhì)最重要。糖類(lèi)物質(zhì)特點(diǎn)：

◆具有熱易變的性質(zhì)◆利于吸收和利用

◆使用濃度一般在2%—5%

◆提供能源和調(diào)節(jié)滲透壓二、營(yíng)養(yǎng)成分第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境4、維生素類(lèi)

◆以各種輔酶的形式存在◆參與多種代謝活動(dòng)◆對(duì)生長(zhǎng)，分化等有很好的促進(jìn)作用◆主要分為脂溶性維生素和水溶性維生素◆常用維生素有VB1和VB6

二、營(yíng)養(yǎng)成分第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境5、肌醇◆環(huán)己六醇◆細(xì)胞壁的構(gòu)建材料◆參與碳水化合物、磷脂代謝及離子平衡等生理活動(dòng)◆促進(jìn)活性物質(zhì)發(fā)揮作用二、營(yíng)養(yǎng)成分第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境6、氨基酸

◆蛋白質(zhì)的組成成分

◆有機(jī)氮源

◆可直接被細(xì)胞吸收利用

◆培養(yǎng)基中常用的是甘氨酸二、營(yíng)養(yǎng)成分第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境7、天然復(fù)合物

◆促進(jìn)某些愈傷組織和器官的生長(zhǎng)

◆化學(xué)成分不明、復(fù)雜

◆天然營(yíng)養(yǎng)混合物如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物二、營(yíng)養(yǎng)成分第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境8、瓊脂

◆是使用最普遍的凝固劑◆用量一般在6—10g/L之間◆顏色以淺、透明度高好，潔凈為上品

除了瓊脂外，在組織培養(yǎng)中還可以使用瓊脂糖、結(jié)冷膠等。二、營(yíng)養(yǎng)成分第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境9、活性炭

◆吸附培養(yǎng)基及培養(yǎng)物分泌物中的抑制物質(zhì)

◆抑制外植體褐變

◆防止玻璃苗的產(chǎn)生

◆促進(jìn)培養(yǎng)物生長(zhǎng)和分化

◆促進(jìn)生根缺點(diǎn)：

◆沒(méi)有選擇性10、抗生素

◆防止外植體內(nèi)生菌造成的污染活性炭二、營(yíng)養(yǎng)成分第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境11、生長(zhǎng)素類(lèi)

◆促進(jìn)細(xì)胞伸長(zhǎng)和分裂

◆促進(jìn)生根、抑制器官脫落、性別控制、延長(zhǎng)休眠、頂端優(yōu)勢(shì)、單性結(jié)實(shí)

◆誘導(dǎo)愈傷組織形成

◆溶于95%酒精或0.1mol/L的NaOH中，后者的溶解效果更好

◆常用的生長(zhǎng)素：

IAA(吲哆乙酸)NAA(奈乙酸)2,4-D(二氯苯氧乙酸)IBA(吲哆丁酸)二、營(yíng)養(yǎng)成分第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境12、細(xì)胞分裂素類(lèi)

◆促進(jìn)細(xì)胞分裂和分化

◆誘導(dǎo)胚狀體和不定芽的形成

◆延緩組織的衰老并增強(qiáng)蛋白質(zhì)的合成

◆用于離體成花的調(diào)控

◆溶于0.5—1.0mol/L的鹽酸或稀薄的NaOH中

◆常用的細(xì)胞分裂素：

KT(激動(dòng)素)BA(6-卞基腺嘌呤)2-ip(異戊烯氨基嘌呤)玉米素二、營(yíng)養(yǎng)成分第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境13、赤霉素類(lèi)和脫落酸

A、赤霉素類(lèi)

◆組織培養(yǎng)中不常使用

◆加速細(xì)胞的伸長(zhǎng)生長(zhǎng)

◆促進(jìn)細(xì)胞的分裂

◆主要是GA3

B、脫落酸

◆抑制細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng)

◆促進(jìn)脫落和衰老

◆促進(jìn)休眠和提高抗逆能力二、營(yíng)養(yǎng)成分第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境◆培養(yǎng)基形態(tài)不同：固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基◆培養(yǎng)過(guò)程不同：初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基◆其作用不同：誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基

◆營(yíng)養(yǎng)水平不同：基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基1、培養(yǎng)基的種類(lèi)三、培養(yǎng)基的配制、滅菌與保存第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境MS培養(yǎng)基:

◆無(wú)機(jī)鹽濃度高◆高含量的氮、鉀，尤其是硝酸鹽◆含有一定數(shù)量的銨鹽◆營(yíng)養(yǎng)豐富◆不需要添加更多的有機(jī)附加物2、幾種常見(jiàn)培養(yǎng)基的特點(diǎn)第二節(jié)植物細(xì)胞工程培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境三、培養(yǎng)基的配制、滅菌與保存White培養(yǎng)基

◆1943年由White為培養(yǎng)番茄根尖而設(shè)計(jì)

◆1963年作了改良，提高M(jìn)gSO4的濃度和增加硼元素

◆無(wú)機(jī)鹽濃度較低◆使用廣泛◆在生根培養(yǎng)、胚胎培養(yǎng)中有良好的效果大量元素含量微量元素含量鐵鹽含量有機(jī)物含量其他含量KNO380H3BO31.5Fe2(SO4)32.5肌醇100蔗糖30000Ca(NO3)24H2O300MnSO44H2O7.0煙酸0.3瓊脂8000MgSO47H2O720ZnSO47H2O3.0鹽酸硫胺素0.1

NaH2PO44H2O16.5MoO30.0001鹽酸吡哆辛0.1KCl65CuSO45H2O0.001甘氨酸3Na2SO4200附表：White培養(yǎng)基B5培養(yǎng)基

◆1968年由Gamborg等為培養(yǎng)大豆根細(xì)胞而設(shè)計(jì)

◆含有較低的銨鹽

◆較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素組成成分?jǐn)?shù)量(mg/l）組成成分?jǐn)?shù)量(mg/l)KNO3

2500FeSO4·7H2O27.8CaCl2·2H2O150CuSO4·5H2O0.025MgSO4·7H2O250蔗糖40(NH4)2SO4134pH5.5KI0.75肌醇100H3BO43.0煙酸1.0MnSO4·4H2O10鹽酸吡哆醇1.0ZnSO4·7H2O2.0激動(dòng)素0.1Na2MoO4·2H2O0.252,4－D0.1－1.0CoCl2·6H2O0.025鹽酸硫銨10Na2-EDTA37.3

B5培養(yǎng)基的組成和配方N6培養(yǎng)基

◆1974年朱至清等為水稻等禾谷類(lèi)作物花藥培養(yǎng)設(shè)計(jì)

◆

KNO3和（NH4）SO4含量高，不含鉬組成成分?jǐn)?shù)量(mg/l)組成成分(mg/l)KNO3

2.3Na2－EDTA37.3CaCl2·2H2O166FeSO4·7H2O27.8MgSO4·7H2O185蔗糖50KH2PO4

400pH5.8(NH4)2SO4

463煙酸0.5KI0.8鹽酸吡哆醇0.5H3BO31.6甘氨酸2.0MnSO4·4H2O4.4鹽酸硫銨1.0ZnSO4·7H2O1.5N6培養(yǎng)基組成及配方配制培養(yǎng)基應(yīng)做好幾點(diǎn)工作：（1）實(shí)驗(yàn)用具的準(zhǔn)備。包括配制過(guò)程中所需電爐、酸度計(jì)、高壓滅菌鍋等設(shè)備及其他玻璃器皿的清洗和準(zhǔn)備(2)試劑、藥品的準(zhǔn)備(3)根據(jù)培養(yǎng)基的配方、母液擴(kuò)大倍數(shù)及需要配制的培養(yǎng)基體積計(jì)算所需各種母液及其他附加物的量3、培養(yǎng)基的配制具體操作如下：1、取規(guī)定數(shù)量的糖源和凝固劑置于燒杯或搪瓷鍋內(nèi)，加蒸餾水加熱使之溶解，并不斷攪拌；2、根據(jù)計(jì)算所需量依次加入大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液及其他特殊的附加物，攪拌均勻；3、加水定容至規(guī)定體積，攪拌均勻；4、調(diào)整培養(yǎng)基的pH值；5、分裝；6、封口。組織培養(yǎng)必須在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行，因此培養(yǎng)基的滅菌操作非常重要。培養(yǎng)基分裝封口后立刻進(jìn)行滅菌，至少在24h內(nèi)完成滅菌程序。一般采用的是高壓蒸汽滅菌。4、培養(yǎng)基的滅菌

滅菌鍋有很多種，實(shí)驗(yàn)室中常用手提式高壓蒸汽滅菌鍋，使用時(shí)要注意一下幾點(diǎn)：1、鍋中應(yīng)放足量的水，以免造成空燒或干燒；2、裝鍋時(shí)不要過(guò)度傾斜，可保持內(nèi)部有一定的空間，利于蒸汽流動(dòng)；3、增壓前高壓鍋內(nèi)的空氣必須排凈，否則易影響滅菌效果；4、滅菌過(guò)程中，應(yīng)盡量保持壓力恒定，嚴(yán)格遵守滅菌時(shí)間；5、排氣降壓時(shí)應(yīng)緩慢進(jìn)行；6、只有待高壓鍋內(nèi)壓力表指針恢復(fù)到零后，才能開(kāi)啟壓力鍋；7、高壓鍋工作時(shí)，應(yīng)有專人看守?！魷缇蟮呐囵B(yǎng)基經(jīng)冷卻和凝固后即可使用檢驗(yàn)滅菌效果。檢驗(yàn)方法：將培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室中3天，若沒(méi)有污染現(xiàn)象，說(shuō)明滅菌可靠，可以使用?！舯４嬖诘蜏貤l件下。常溫下保存時(shí)要進(jìn)行防塵和避光處理?！舯４鏁r(shí)間不可過(guò)長(zhǎng)。5、培養(yǎng)基的保存一、概述1.植物組織培養(yǎng)概念（concept）狹義概念：

指對(duì)植物體組織或由植物器官培養(yǎng)產(chǎn)生的愈傷組織（callus）進(jìn)行培養(yǎng)直至生成完整植株。廣義概念：無(wú)菌操作分離植物體一部分(即外植體)接種到培養(yǎng)基，在人工條件下培養(yǎng)直至生成完整植株。生物技術(shù)中的一個(gè)基本技術(shù)第三節(jié)植物組織培養(yǎng)愈傷組織〔callus〕:在離體培養(yǎng)過(guò)程中形成的具有分生能力的一團(tuán)不規(guī)則細(xì)胞，多在植物體切面上產(chǎn)生。指植物體的局部受到創(chuàng)傷刺激后，在傷口表面新生的組織。它由活的薄壁細(xì)胞組成，起源于植物體任何器官內(nèi)各種組織的活細(xì)胞。這種組織沒(méi)有發(fā)生分化。在適合的光照、溫度和一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與激素等條件下，愈傷組織才開(kāi)始分化，產(chǎn)生出植物的各種器官和組織，進(jìn)而發(fā)育成一棵完整的植株。外植體〔explant〕：從植物體上分離下來(lái)的用于離體培養(yǎng)的材料。胚軸花粉胚乳胚種子果實(shí)花器葉芽莖根組織原生質(zhì)體子葉子房苞片胚珠花藥花梗分生組織成熟組織花托葉柄幼苗2.植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)細(xì)胞全能性（totipotency）理論植物每一個(gè)具有完整細(xì)胞Totipotencyistheabilityofasinglecelltodivideandproduceallofthedifferentiatedcellsinanorganism的體細(xì)胞，都含有植物體的全部遺傳信息，在適當(dāng)條件下，具有發(fā)育成完整植株的潛在能力。1958年Steward等人在以胡蘿卜根組織為外植體的組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，證實(shí)了細(xì)胞的全能性。3.相關(guān)名詞分化〔differentiation〕細(xì)胞在分裂過(guò)程中發(fā)生結(jié)構(gòu)和功能上的改變，從而在個(gè)體發(fā)育中形成各類(lèi)組織和器官完成整個(gè)生活周期。脫分化〔dedifferentiation〕已分化好的細(xì)胞在人工誘導(dǎo)條件下，恢復(fù)分生能力，回復(fù)到分生組織狀態(tài)的過(guò)程。再分化〔redifferentiation〕脫分化后具有分生能力的細(xì)胞再經(jīng)過(guò)與原來(lái)相同的分化過(guò)程，重新形成各類(lèi)組織和器官的過(guò)程。植物組織培養(yǎng)過(guò)程總結(jié)離體的植物器官、組織或細(xì)胞（外植體）離體的植物器官、組織或細(xì)胞（外植體）愈傷組織根、芽植物體脫分化再分化4.植物組織培養(yǎng)的特點(diǎn)（CharacteristicsofPlantTissueCultureTechniques）(1)培養(yǎng)條件可以人為加以控制

(2)繁殖系數(shù)大，培養(yǎng)周期短(3)管理方便，有利于實(shí)現(xiàn)工廠化生產(chǎn)和自動(dòng)化控制5.組織培養(yǎng)發(fā)展歷史

1902年Haberlandt首次進(jìn)行離體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，發(fā)表了“植物離體細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)”報(bào)告；1934年White由番茄根建立了第一個(gè)活躍生長(zhǎng)的無(wú)性系，第一次器官培養(yǎng)；1939年White、Gautheret和Nobecourt愈傷組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)成功，第一次進(jìn)行細(xì)胞/組織培養(yǎng)；1957年Skoog和Miller提出了有關(guān)植物激素控制器官形成的概念，通過(guò)改變培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素這兩類(lèi)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的相對(duì)濃度可以控制器官的分化；

1958年Steward在胡蘿卜愈傷組織培養(yǎng)中形成了體細(xì)胞胚；1960年Morel提出了一個(gè)離體無(wú)性繁殖蘭花的方法；繁殖系數(shù)高，迅速建立起“蘭花工業(yè)”；1962年Murashige和Skoog為煙草組織培養(yǎng)建立了培養(yǎng)基，此培養(yǎng)基被證明適合大部分植物的組織培養(yǎng)，至今仍被廣泛使用。自60年代以來(lái)，組織培養(yǎng)技術(shù)得到了飛速發(fā)展，特別是進(jìn)30年來(lái)，迄今進(jìn)行組培的植物已達(dá)3000多種，已從開(kāi)始時(shí)的純學(xué)術(shù)性研究，發(fā)展到今天有巨大應(yīng)用價(jià)值的技術(shù)。離體的植物器官、組織、細(xì)胞脫分化愈傷組織再分化芽根植物體培養(yǎng)植物組培的基本過(guò)程Schemeofplanttissueculture二、植物組織培養(yǎng)的基本要求

1、植物組織培養(yǎng)的基本流程二、植物組織培養(yǎng)的基本要求

1、植物組織培養(yǎng)的基本流程植物組培的基本過(guò)程除菌與接種

自來(lái)水多次漂洗消毒劑處理無(wú)菌水反復(fù)沖洗外植體

無(wú)菌濾紙吸干切割

無(wú)菌外植體小塊外植體置培養(yǎng)基上培養(yǎng)起始培養(yǎng)

消毒劑使用濃度/%清除消毒時(shí)間/min滅菌效果次氯酸鈉2容易5~30很好次氯酸鈣9~10容易5~30很好漂白粉飽和溶液容易5~30很好升汞0.1~1較難2~10最好

酒精70~75容易0.2~2好過(guò)氧化氫10~12最容易5~15好溴水1~2容易2~10很好硝酸銀1較難5~30好抗生素4~50mg/L中等30~60較好常用消毒劑的使用和效果

轉(zhuǎn)移到溫室大田移栽和生長(zhǎng)組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室布局