DB37T 3624-2019牛場(chǎng)氣溶膠結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)規(guī)程_第1頁(yè)
DB37T 3624-2019牛場(chǎng)氣溶膠結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)規(guī)程_第2頁(yè)
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DB37DetectionofMycobacteriumtuberculosiscomplexpathogenicorganismsinaerosolofcattlefarmbyReal-timePCR山東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院奶牛研究中心、山東師牛場(chǎng)氣溶膠結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了牛場(chǎng)環(huán)境氣溶膠樣本中結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的技術(shù)要GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和4縮略語(yǔ)AGI：全玻璃液體沖擊式采樣器（All-Glass-Imping8.2氣溶膠樣品的采集后的滅活處理待檢樣品在2℃~8℃保存不應(yīng)超過24h；-20℃保存不超過三個(gè)月；-80℃以下可長(zhǎng)期保存。樣品應(yīng)置于低溫（2℃~8℃)、密封的容器內(nèi)運(yùn)輸。9操作方法9.1氣溶膠樣本的前處理9.2核酸提取采用商品化細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒進(jìn)行9.3.1反應(yīng)液的配制9.3.2加樣在已分裝有熒光PCR預(yù)混液的PCR光學(xué)管中每管分別加入2μL待檢樣品或?qū)φ漳０?，混勻質(zhì)控有效的條件為：陰性對(duì)照和空白對(duì)照應(yīng)無(wú)Ct值或≥35，陽(yáng)性對(duì)照的Ct值應(yīng)＜35，且呈現(xiàn)S型擴(kuò)明顯對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期，判為熒光定量PCR陰性反A.2臺(tái)式離心機(jī)（轉(zhuǎn)子容積2mL，50mL；最高離心力15000×gA.6冰箱（2℃~8℃,-20℃,-80℃)。B.6.1設(shè)備安裝：首先安裝三腳架，空氣微生物采樣器放置高度為距地面1.5m，將30mL滅菌生理鹽1和2的模板分別為牛結(jié)核分枝桿菌和結(jié)核結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸陽(yáng)性的熔解曲線Tm次性滅菌離心管。防止不同樣品之間通過采樣器、氣溶

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