液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀校準(zhǔn)作業(yè)指導(dǎo)書液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀校準(zhǔn)作業(yè)指導(dǎo)書/液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀校準(zhǔn)作業(yè)指導(dǎo)書液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀校準(zhǔn)作業(yè)指導(dǎo)書范圍本作業(yè)指導(dǎo)書適用于新安裝、使用中和維修后的離子阱和四極桿（包括三重四級(jí)）兩種種類LC-MS的校準(zhǔn)，四極桿—翱翔時(shí)間串通等其他種類臺(tái)式LC-MS的校準(zhǔn)可參照此作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行。引用文件以下文件所包括的條則，經(jīng)過在本指導(dǎo)書中的引用而組成本指導(dǎo)書的條則。本指導(dǎo)書宣布時(shí)，所示版本均為有效。所有標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范或規(guī)程都會(huì)被校正，使用本指導(dǎo)書的各方應(yīng)商議使用以下文件最新版本的可能性。JJF1001-1998《通用計(jì)量術(shù)語及定義》JJF1059-1999《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》JJF1164-2006《臺(tái)式氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀校準(zhǔn)規(guī)范》歸納液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀是以液相色譜為進(jìn)樣分別系統(tǒng)并經(jīng)過必然的接口與質(zhì)譜儀耦合到儀器的解析儀器。樣品經(jīng)過色譜分別后經(jīng)離子源離子化產(chǎn)生帶有必然電荷、質(zhì)量數(shù)的離子，采用不相同的質(zhì)量解析器把電離子按質(zhì)荷比（m/z）分開,獲取依質(zhì)量序次排列的質(zhì)譜圖。經(jīng)過對(duì)質(zhì)譜圖的解析辦理，進(jìn)行定性、定量解析。液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀主要由液相色譜、離子源、質(zhì)量解析器、檢測(cè)器、真空系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)等幾部分組成。計(jì)量特色LC-MS各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)見表1表1LC-MS主要技術(shù)指標(biāo)技術(shù)指標(biāo)要求質(zhì)量范圍

不低于

1000u質(zhì)量正確性

*

±

0.6u分辨力（

R）*

≤1u正ESI

10pg

利血平，

m/z609

處

S/N≥10：1

（峰峰值）信噪比

*

負(fù)ESI

20pg

氯霉素，

m/z321

處

S/N≥10：1

（峰峰值）正APCI

20pg

利血平，

m/z609

處

S/N≥10：1

（峰峰值）整機(jī)定量重復(fù)性

*

RSD≤10%注：1標(biāo)*的為必定校準(zhǔn)項(xiàng)目本技術(shù)指標(biāo)僅供參照,不作為合格性判斷依照校準(zhǔn)/測(cè)試條件5.1實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求儀器室內(nèi)不得有強(qiáng)烈的機(jī)械振動(dòng)和電磁攪亂，不得存放與實(shí)驗(yàn)沒關(guān)的易燃、易爆和強(qiáng)腐化性氣體或試劑。實(shí)驗(yàn)室溫度：20℃～30℃。相對(duì)濕度：≤70％。5.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與試劑利血平-50%乙腈水溶液：100.0pg/μL；利血平-50%乙腈水溶液：10.0pg/μL；氯霉素-50%乙腈水溶液：200.0pg/μL；氯霉素-50%乙腈水溶液：20.0pg/μL；碘化銫鈉-異丙醇水溶液：2μg/μL碘化鈉，50ng/μL碘化銫溶于50%異丙醇水溶液；5.3標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備微量注射器：10μL6校準(zhǔn)/測(cè)試項(xiàng)目與校準(zhǔn)/測(cè)試方法6.1外觀檢查儀器應(yīng)擁有以下表記：名稱、型號(hào)、制造廠名(或公司名)、出廠編號(hào)，并附使用說明書。儀器主機(jī)、色譜儀、計(jì)算機(jī)、真空部件和檢測(cè)器等圓滿(吻合出廠說明書要求)，各部件連接正確，各插件親密配合，接觸優(yōu)異，儀器啟動(dòng)后無異常噪聲。儀器的按鍵開關(guān)、各調(diào)治旋紐均能正常工作，無松動(dòng)現(xiàn)象，指示燈顯示正常。儀器運(yùn)行中使用的高電壓、大電流和高溫等應(yīng)在儀器的顯然部位貼有警示標(biāo)志，提示操作者注意這些潛藏危險(xiǎn)。儀器應(yīng)注明使用電壓和頻率等。6.2分辨力儀器牢固后，選擇ESI正離子模式，采用手動(dòng)調(diào)諧，將碘化銫鈉溶液直接注入質(zhì)譜中，參照附錄D平均選擇5個(gè)掃描質(zhì)量，優(yōu)化儀器至最正確狀態(tài)，記錄各目標(biāo)離子峰獲取半峰寬W1/2。6.3質(zhì)量范圍參照6.2條件將碘化銫鈉溶液經(jīng)過進(jìn)樣泵直接注入質(zhì)譜中，選擇Scan模式，設(shè)定掃描范圍為（20~2000）m/z，觀察可否出現(xiàn)質(zhì)量數(shù)1000以上的質(zhì)譜峰。6.4質(zhì)量正確度參照6.2條件，將碘化銫鈉溶液經(jīng)過進(jìn)樣泵直接注入質(zhì)譜中，記錄133，323,473,623,922,1072等碘化銫鈉主要離子的質(zhì)量數(shù)，理論值見附錄D，依照公式（1）計(jì)算質(zhì)量正確度MMi測(cè)量Mi理論(1)式中Mi測(cè)量——第i個(gè)離子三次測(cè)量平均值，u；Mi理論——第i個(gè)離子理論值，u。6.5信噪比正ESI源儀器牢固后，將100pg/ul的利血平溶液作為調(diào)諧液注入到質(zhì)譜中，優(yōu)化母離子最正確響應(yīng)后記錄參數(shù)并保存調(diào)諧文件。

609至調(diào)諧達(dá)成后依照調(diào)諧文件設(shè)定參數(shù)，以

50：50乙腈水溶液為流動(dòng)相，使用

C18或等效色譜柱分別，注入

10pg利血平溶液，選擇

SIM模式，提取

m/z

609特色離子，依照公式（

2）計(jì)算信噪比。S/N

Hm/zH噪聲

(2)式中：

Hm/z——提取離子的峰高；H噪聲——基線噪聲。負(fù)ESI源儀器牢固后，將200pg/ul的氯霉素溶液作為調(diào)諧液注入到質(zhì)譜中，優(yōu)化母離子最正確響應(yīng)后記錄參數(shù)并保存調(diào)諧文件。

321至調(diào)諧達(dá)成后依照調(diào)諧文件設(shè)定參數(shù)，以50：50乙腈水溶液為流動(dòng)相，使用C18或等效色譜柱分別，注入20pg氯霉素溶液，選擇SIM模式，提取m/z321特色離子，依照公式（2）計(jì)算信噪比。正APCI源儀器牢固后，將100pg/ul的利血平溶液作為調(diào)諧液注入到質(zhì)譜中，優(yōu)化母離子609至最正確響應(yīng)后記錄參數(shù)并保存調(diào)諧文件。調(diào)諧達(dá)成后依照調(diào)諧文件設(shè)定參數(shù)，以50：50乙腈水溶液為流動(dòng)相，使用C18或等效色譜柱分別，注入

20pg利血平溶液，選擇

SIM模式，提取

m/z

609特色離子，依照公式（2）計(jì)算信噪比。6.6測(cè)量重復(fù)性參照6.5.1條件，注入200pg/ul的；利血平溶液10ul，選擇SIM模式，提取m/z609特色離子，連續(xù)測(cè)量6次，記錄相應(yīng)峰面積，依照公式（3）計(jì)算重復(fù)性RSD

6x)2(xii11100%(3)61x式中：RSD——相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，%；xi——第i次測(cè)量峰面積；——峰面積的算術(shù)平均值。校準(zhǔn)/測(cè)試結(jié)果辦理與復(fù)校周期7.1按程前言件《CX34-01證書/報(bào)告管理程序》要求出具校準(zhǔn)/測(cè)試報(bào)告。7.2檢測(cè)部門對(duì)原始記錄進(jìn)行整理和歸檔。7.3依照校準(zhǔn)結(jié)果，發(fā)校準(zhǔn)證書或校準(zhǔn)通知書。在校準(zhǔn)結(jié)論中明確說明被校準(zhǔn)儀器可否合格、存在問題及建議。7.4液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的校準(zhǔn)周期為2年，更換重要部件、維修或?qū)x器性能思疑時(shí)，應(yīng)隨時(shí)校準(zhǔn)。附錄A液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀信噪比擴(kuò)展不確定度A.1歸納測(cè)量依照SSY0052-2010《液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀作業(yè)指導(dǎo)書》環(huán)境條件溫度（15～27）℃，相對(duì)濕度小于75%RH。測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。被測(cè)對(duì)象Agilent6100測(cè)量過程SSY0052-2010《液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀作業(yè)指導(dǎo)書》評(píng)定結(jié)果的使用吻合上述條件的測(cè)量結(jié)果，一般可直接使用本不確定度的評(píng)定結(jié)果。A.2數(shù)學(xué)模型數(shù)學(xué)模型：S/NHm/z(1)H噪聲式中：Hm/z：提取離子(m/z)的峰高H噪聲：噪聲峰高度A.3不確定度重量的計(jì)算信號(hào)峰高值測(cè)量不確定度u(Hz/m)：儀器測(cè)量峰高時(shí)，它與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度、進(jìn)樣量和峰高測(cè)量值的不確定度有關(guān)，因此信號(hào)峰高值測(cè)量不確定度應(yīng)包括三個(gè)方面：信號(hào)峰高測(cè)量值的相對(duì)不確定度進(jìn)u(H1)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度u(H2)、微量進(jìn)樣器的不確定度u(H3)和儀器重復(fù)測(cè)量的不確定度。信號(hào)峰高測(cè)量值的相對(duì)不確定度進(jìn)u(H1):信號(hào)峰高測(cè)量值的測(cè)量有兩種方法：一是依照工作站中記錄的選擇離子流圖，讀取峰高值和基線值，以兩點(diǎn)差的絕對(duì)值作為峰高的測(cè)量值，這種峰高的測(cè)量方法的相對(duì)不確定度優(yōu)于0.2%；二是用工作站記錄相應(yīng)的選擇離子流圖，再用游標(biāo)卡尺量取譜圖的峰高的高度。譜圖的高度一般為100mm,峰高為70～90nm，其相對(duì)不確定度的重量估計(jì)為u(H)0.5%。A.3.1.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相對(duì)不確定度u(H2)：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相對(duì)不確定度是檢定質(zhì)譜計(jì)的不確定度的主要本源之一，它直接影響檢定結(jié)果，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相對(duì)不確定度平時(shí)由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書給出，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書給出其定值的偏差為10mg±2%，以為其為矩形分布，因此u(H2)2%/31.2%。微量進(jìn)樣器校準(zhǔn)的相對(duì)不確定度u(H3)：微量注射器的體積刻度是重要的不確定度本源之一，因此，微量注射器必定經(jīng)校準(zhǔn)后才能使用。規(guī)程中規(guī)定校準(zhǔn)一般稱量6次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差1%。(進(jìn)行檢定結(jié)果計(jì)算時(shí)，應(yīng)當(dāng)采用校準(zhǔn)值)uW2)1/60.4%。(重復(fù)測(cè)量相對(duì)不確定度u(H4):現(xiàn)在以一臺(tái)6310的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀為例做重復(fù)性測(cè)量：在相同的條件重復(fù)進(jìn)樣10次，按儀器自己計(jì)算信噪比的軟件進(jìn)行計(jì)算，所得的表1中的數(shù)據(jù)：表1：型號(hào)為6310的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀10次連續(xù)測(cè)量的數(shù)據(jù)序號(hào)12345678910信噪185132185225228219196174231212比nx)21(xi由上表可計(jì)算出其單次相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差i114.8%snx1由于u(H1)，u(H2)，u(H3)，u(H4)相對(duì)獨(dú)立，22(H3)222222則u(Hz/m)u(H1)u(H2)(H4)0.5%1.2%0.4%14.8%14.9%A.3.2基線噪聲測(cè)量值的不確定度u(N)：基線噪聲測(cè)量的不確定度主要來自卡尺檢定的不確定度和用卡尺測(cè)量的不確定度，一般為2%。若是用色譜工作站記錄基線噪聲，則其不確定度優(yōu)于1%。A.4合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度：A.4.1數(shù)學(xué)模型：S/NHm/zH噪聲式中：Hm/z：提取離子(m/z)的峰高H噪聲：噪聲峰高度A.4.2方差與流傳系數(shù)由：uc2(y)[f/xi]2u2(xi)依照(1)可以推導(dǎo)出：u2(S/N)c12u2(Hm/z)c22u2(H噪聲)c11(S/N)/Hm/zH噪聲c2(S/N)/1H噪聲H噪2聲由于式中各不確定度重量互相獨(dú)立，c1c21表3不確定度一覽表不確定度重量標(biāo)準(zhǔn)不確定度本源u(xi)u(H1)信號(hào)峰高測(cè)量值的相對(duì)不確定度u(H2)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度u(Hz/m)u(H3)微量進(jìn)樣器校準(zhǔn)的相對(duì)不確定度u(H4)重復(fù)測(cè)量不確定度u(N)基線噪聲值測(cè)量的不確定度A.4.4合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度：2(S/N)22(Hz/m)22(H噪聲),c1c2由uc1uc2uu(S/N)u2(Hz/m)u2(H噪聲)(14.8%)2擴(kuò)展不確定度：為了計(jì)算的方便，均取=2由公式Urelku(S/N)可得：Urelku(S/N)214.9%29.8%30%

標(biāo)準(zhǔn)不確定度重量值Ciu(xi)0.5%1.2%0.4%14.8%2.0%1得：(2.0%)214.9%A.5擴(kuò)展不確定度的評(píng)定為了計(jì)算的方便，均取=2由公式Urelku(S/N)可得：Urelku(S/N)214.9%29.8%30%A.6測(cè)量不確定度的報(bào)告該液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀信噪比的擴(kuò)展不確定度表示為U=30%，k=2。附錄B液相色譜儀-質(zhì)譜聯(lián)用儀量值溯源圖國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心化學(xué)基準(zhǔn)直接測(cè)量深圳市計(jì)量質(zhì)量檢測(cè)研究院標(biāo)準(zhǔn)名稱：液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)量范圍：離子阱和四極桿液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀正確度等級(jí)：二級(jí)直接測(cè)量客戶被測(cè)名稱：液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)量范圍：離子阱和四極桿液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀信噪比不確定度：Urel=30%，k=2附錄C計(jì)量質(zhì)量檢測(cè)研究院校準(zhǔn)記錄格式（供參照）客戶名稱：型號(hào)規(guī)格：

出廠編號(hào)：

儀器名稱：液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀財(cái)富編號(hào)：制造廠名：技術(shù)依照：有效期/復(fù)校周期：標(biāo)準(zhǔn)器名稱特色

年檢定/校準(zhǔn)地點(diǎn)：設(shè)備編號(hào)

檢定/校準(zhǔn)日期：檢定/校準(zhǔn)證書號(hào)有效期

年代日環(huán)境條件：使用前后狀態(tài)

℃

%RH使用前：□正常

/□不正常使用后：□正常

/□不正常一、外觀：正?！醵?、分辨率：三、質(zhì)量范圍：四、質(zhì)量正確度理論值實(shí)測(cè)值五、信噪比峰高信噪比六、測(cè)量重