第三節(jié)濁度法

在一定范圍內(nèi)，菌懸液中細胞濃度與混濁度成正比。細菌菌體是不透光的，光束通過細菌懸液，將會由于被散射或被吸收而降低其透過量。細菌懸液的光密度或透光度可以反映細菌的濃度，而光密度或透光度可借光電池精確地測出。測生長量間接法

1.比濁法

用分光光度法對無色的微生物懸浮液進行測定，一般選用450～650nm波段。實驗測量時應(yīng)控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內(nèi)（0.2-0.8），否則不準(zhǔn)確。在一定波長下，測定菌懸液的光密度，以光密度（opticaldensity,即O.D.）表示菌量。若要連續(xù)跟蹤某一培養(yǎng)物的生長動態(tài)，可用帶有側(cè)臂的三角燒瓶作原位測定，即不必取樣。微生物比濁儀：能夠?qū)μ幱跍囟雀叨染鶆蚝銣嘏囵B(yǎng)過程中的微生物進行多通道比濁法自動在線檢測分光光度計搖床電腦2.生理指標(biāo)法樣品中微生物數(shù)量多或生長旺盛，這些指標(biāo)愈明顯，因此可以借助特定的儀器如瓦勃氏呼吸儀、微量量熱計等設(shè)備來測定相應(yīng)的指標(biāo)。微生物的生理指標(biāo)，如氮、碳、DNA、ATP等物質(zhì)的含量，呼吸強度、耗氧量、酶活性、生物熱等與其群體的規(guī)模成正相關(guān)。常用于對微生物的快速鑒定與檢測一種特定的微生物，每一個細胞中的ATP濃度幾乎是一個常數(shù)，所以測定這種微生物的ATP含量，即可知其細胞數(shù)。已知細胞數(shù)的微生物樣品測定ATP含量測定未知細胞數(shù)的微生物樣品的ATP含量換算出每個細胞所含的ATP量即可算出未知樣中細胞數(shù)ATP濃度的測定E＋L＋AMP＋H2O熒光素酶E還原型熒光素LH2E-LH2?AMP復(fù)合物ATPppiMg2＋＋＋＋＋光O2生物發(fā)光儀在這個反應(yīng)系統(tǒng)中，酶、熒光素和O2都過量時，保證光的強度與ATP的量成正比?？捎蒙锇l(fā)光儀測定光照強度，從而換算出ATP的濃度。生物發(fā)光儀現(xiàn)用于各種樣品中細胞數(shù)的測定。Eg.臨床上測血液、尿液中的菌數(shù)；工業(yè)上發(fā)酵液中的菌數(shù)；環(huán)境污染狀況的測定等。細胞總含氮量來確定細菌濃度原理：蛋白質(zhì)是細胞的主要成分，含量也比較穩(wěn)定。氮又是蛋白質(zhì)的重要組成元素，可以細菌含氮量來表示原生質(zhì)含量的多少，即細菌的多少。方法：從一定量培養(yǎng)物中分離出細菌，洗滌，除去由于培養(yǎng)基帶來的含氮物質(zhì)；用凱氏微量定氮法測定總氮含量，蛋白質(zhì)含氮量為16％，細菌中蛋白質(zhì)含量占細菌固型物的50％－80％，一般以65％為代表?？偤颗c蛋白質(zhì)總量之間的關(guān)系蛋白質(zhì)總量＝含氮量x6.25細胞