（優(yōu)選）技術(shù)原理講解及人的基因擴(kuò)增本文檔共24頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分DNA的結(jié)構(gòu)本文檔共24頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分DNA的復(fù)制模板：基因組DNA原料：游離的核苷酸

A、G、C、T催化劑：DNA聚合酶需要的條件：活細(xì)胞內(nèi)的微觀環(huán)境本文檔共24頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分DNA的復(fù)制本文檔共24頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分體內(nèi)invivo體外invitroDNA的復(fù)制本文檔共24頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分PCR技術(shù)的發(fā)明KaryB.Mullis

Californianhighway本文檔共24頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分Khorana(1971)等提出在體外經(jīng)DNA變性,與適當(dāng)引物雜交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的設(shè)想。1983年,Mullis發(fā)明了PCR技術(shù),使Khorana的設(shè)想得到實(shí)現(xiàn)。1988年Saiki等將耐熱DNA聚合酶（Taq）引入了PCR技術(shù)。1989年美國《Science》雜志列PCR為十余項(xiàng)重大科學(xué)發(fā)明之首,比喻1989年為PCR爆炸年,Mullis榮獲1993年度諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。本文檔共24頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分本文檔共24頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分PCR技術(shù)的特點(diǎn)1）高度的靈敏性2）特異性3）操作簡便易行4）用途廣泛30輪循環(huán)擴(kuò)增量達(dá)230個(gè)拷貝（109拷貝）本文檔共24頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分生命科學(xué)：DNA重組、轉(zhuǎn)基因生物醫(yī)學(xué)工程：基因疫苗、產(chǎn)前診斷疾病診斷：艾滋病、禽流感法醫(yī)學(xué)：血跡、精斑等痕跡DNA考古學(xué)：遠(yuǎn)古人類、猛犸DNAPCR技術(shù)的應(yīng)用本文檔共24頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分人的性別決定本文檔共24頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分人的性別決定FatherMother22pairs+XY22pairs+XX22+X22+Y22+Xspermegg22pairs+XX22pairs+XYGirlBoy本文檔共24頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分

1959年生物學(xué)家發(fā)現(xiàn)Y染色體決定人（和老鼠）的男性特征;

1975年，Wachtel等提出Y染色體上有一個(gè)組織相容性抗原的基因H-Y和男性決定有關(guān);

1987年,DavidPage認(rèn)為Y染色體上一個(gè)特定的基因ZFY是決定男性的基因;

1988年,澳大利亞的Sinclair實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)袋鼠類的ZFY基因不在Y染色體上，而是在常染色體上;

1990年，澳大利亞女科學(xué)家MarshallGraves和英國的Lovell-Badge兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)另外一個(gè)基因SRY。本文檔共24頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分人的性別決定————————YSRY男性本文檔共24頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分利用PCR技術(shù)檢測SRY基因男性，有SRY——陽性結(jié)果女性，無SRY——陰性結(jié)果應(yīng)用：奧運(yùn)會(huì)運(yùn)動(dòng)員的性別鑒定犯罪現(xiàn)場血痕、毛發(fā)的性別鑒定野生動(dòng)物的性別鑒定······男女本文檔共24頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分

總體積25lBuffer緩沖液

dNTP原料

Primer引物

DNA分子模板

Taq酶DNA聚合酶

反應(yīng)體系本文檔共24頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分移液器（pipette）槍頭（tips）反應(yīng)管（tube）本文檔共24頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分95℃3min；94℃30s、52℃30s、72℃30s30個(gè)循環(huán)；72℃延伸5min.本文檔共24頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分核酸電泳1.根據(jù)欲分離DNA片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠：準(zhǔn)確稱量瓊脂糖干粉，加入到配膠用的三角燒瓶內(nèi)，定量加入電泳緩沖液。本文檔共24頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分2.放入到微波爐內(nèi)加熱熔化本文檔共24頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分3.冷卻片刻，加入一滴熒光染料，輕輕旋轉(zhuǎn)以充分混勻凝膠溶液，倒入電泳槽中，待其凝固。凝膠完全凝結(jié)，小心拔出梳子，將凝膠安放在電泳槽內(nèi)本文檔共24頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分4.向電泳槽中倒入電泳緩沖液，其量以沒過膠面1mm為宜，如樣品孔內(nèi)有氣泡，應(yīng)設(shè)法除去。本文檔共24頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期日\18點(diǎn)27分5.在DNA樣品中加入10×體積的載樣緩沖液（loadingbuffer），混勻后，用槍將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內(nèi)。本文