兔VX2腎癌模型的建立及其影像學(xué)表現(xiàn)【摘要】目的：建立兔VX2腎癌模型，觀察模型動物在螺旋CT，MRI及腎動脈造影的影像學(xué)表現(xiàn).方法：新西蘭大白兔20只，采取VX2瘤塊種植法成瘤，分別在不同時段行螺旋CT，MRI及腎動脈造影檢查.結(jié)果：實驗組成瘤率100%.腫瘤在螺旋CT平掃時呈等密度或低密度灶，增強(qiáng)后呈低密度結(jié)節(jié)，邊緣環(huán)形強(qiáng)化.MRI平掃時，腫瘤在T1WI和T2WI上分別為較均勻低信號和稍高信號灶，3wk后腫瘤因壞死、液化而表現(xiàn)為高低密度混合型結(jié)節(jié).腎動脈插管造影，VX2腎癌呈豐富血供表現(xiàn).結(jié)論：兔VX2腎癌模型的最佳干預(yù)期是植瘤后2～3wk，螺旋CT篩檢精確可靠，可作動態(tài)觀測.

【關(guān)鍵詞】VX2腎癌；螺旋CT；磁共振成像；腎動脈造影；兔

0引言

裸鼠移植瘤常被用于腎癌的實驗研究，但因動物體型小，抗干預(yù)能力差，不適宜進(jìn)行腫瘤介入研究.我們建立兔VX2腎癌模型，利用螺旋CT，MRI及腎動脈造影動態(tài)監(jiān)測瘤灶變化，總結(jié)不同時段移植瘤的生長特征，為制定實驗動物篩檢標(biāo)準(zhǔn)和選擇最佳實驗干預(yù)期提供理論依據(jù).

1材料和方法

材料新西蘭大白兔20只，體質(zhì)量～kg，雌雄不限，由西安交通大學(xué)動物實驗中心提供；VX2瘤株由第四軍醫(yī)大學(xué)提供；PQ6000超高檔螺旋CT，PhilipsNT5型核磁共振，PhilipsAlluramonoplane型數(shù)字減影儀；3FSP微導(dǎo)管.

方法取冰凍VX2瘤細(xì)胞懸液，培養(yǎng)成1010/L,將2mL注入兔雙側(cè)后腿皮下即成為荷瘤種兔.2wk后形成直徑2cm大小包塊，完整切取腫瘤，去除包膜及壞死組織，剪取腫瘤邊緣生長旺盛部分，在Hanks液中盡量剪碎成直徑1mm，制成瘤細(xì)胞懸液.30mg/kg戊巴比妥鈉兔耳緣靜脈麻醉，俯臥位固定，取右12肋緣下切口3～4cm，暴露右腎下級后用眼科鑷穿刺cm隧洞，將前述剪碎后瘤組織植入其中，明膠海綿壓迫止血后用生物蛋白膠填塞.全部操作h內(nèi)完成，術(shù)后青霉素40萬U/d,im,3d.造模后7,9,11,13,15,17,19,21,23,25及27d各處死1只兔子.取新鮮瘤組織標(biāo)本，戊二醛固定，備透射電鏡觀察.取原發(fā)瘤灶及淋巴結(jié)，肝臟、肺臟可疑轉(zhuǎn)移灶，40g/L多聚甲醛溶液固定48h,石蠟包埋,連續(xù)5μm切片,HE染色,光學(xué)顯微鏡觀察.

螺旋CT及MRI檢測瘤細(xì)胞種植后7,9,11,13,15,17,19,21,23,25,27d，實驗動物在耳緣靜脈麻醉后行螺旋CT及MRI平掃及增強(qiáng)掃描.增強(qiáng)CT造影劑選用歐乃派克5mL，經(jīng)耳緣靜脈以mL/s速度［1］注射.掃描條件：電壓120kV，電流200mA，螺距，層距5mm,層厚5mm.MRI采用頭線圈，常規(guī)定位后獲取冠狀位、軸位T1WI和T2WI的平掃圖像.

右腎動脈造影腫瘤最大直徑增至約3cm時，行DSA檢查.30mg/kg戊巴比妥兔耳緣靜脈麻醉，仰臥位固定，在右腹股溝區(qū)分離并固定股動脈，遠(yuǎn)端7號絲線提起后剪口植入3FSP微導(dǎo)管，間斷注入300g/L泛影葡胺，顯示導(dǎo)管頂端，插至雙側(cè)腎動脈開口處，行右腎動脈DSA.

A:大體標(biāo)本；B:光鏡下×40.

圖1兔VX2腎癌病理表現(xiàn)

2結(jié)果

實驗動物觀察期內(nèi)無1例感染或死亡.本組動物全部成瘤，病理分型為鱗癌.植瘤后2～3wk，腫瘤體積持續(xù)穩(wěn)定增長，邊緣完整、未超出腎臟輪廓，無液化、壞死，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，是施加實驗干預(yù)措施的最佳時期.3wk后腫瘤體積迅速增大至20～25cm3以上，中央壞死、液化，壓迫周圍組織并出現(xiàn)肝、肺、腎門淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移.兔VX2腎癌大體標(biāo)本為突出于腎臟表面的結(jié)節(jié)樣包塊，與周圍分界清楚，有完整包膜形成，質(zhì)地較硬，切面呈魚肉樣，晚期瘤體中央因缺血壞死而成豆渣樣.光鏡下腎小球和腎小管結(jié)構(gòu)清晰，腫瘤細(xì)胞呈彌漫性或片灶狀分布，病理分型為鱗癌.

螺旋CT及MRI表現(xiàn)移植瘤螺旋CT平掃呈低密度或等密度結(jié)節(jié)狀病變，CT值40~50Hu.增強(qiáng)掃描呈低密度，邊緣薄環(huán)狀強(qiáng)化，強(qiáng)化環(huán)可表現(xiàn)為完整型(圖2A)、線條樣和結(jié)節(jié)樣(圖2B)，與周圍正常腎臟組織分界清楚.腫瘤液化、壞死區(qū)CT表現(xiàn)出明顯低密度灶［２］.2wk時MRI平掃T1WI和T2WI像，腫瘤病灶分別為較均勻的低信號和稍高信號，3wk后因壞死、液化，腫瘤T1WI低信號灶內(nèi)出現(xiàn)更低信號，而T2WI稍高信號灶內(nèi)出現(xiàn)高、低信號混雜結(jié)節(jié).

A,B:螺旋CT;C:MRI.

圖2兔VX2腎癌的螺旋CT和MRI表現(xiàn)

表現(xiàn)3FSP導(dǎo)管選擇性右腎動脈造影，見腎臟輪廓完整，右腎動脈主干略增粗，下極分支粗細(xì)不均，腫瘤周圍有增多、紊亂的血管網(wǎng)包繞呈抱球狀，可見細(xì)小分支深入瘤體內(nèi).正常腎組織濃染，腫瘤區(qū)染色劑淺淡.

圖3兔VX2腎癌的DSA表現(xiàn)

3討論

兔VX2腎癌模型已成功建立，但在造模方式上仍有值得改進(jìn)之處，有關(guān)兔VX2移植瘤的影像學(xué)及形態(tài)學(xué)資料有待進(jìn)一步完善［３］.本研究實驗動物全部成瘤，首先與采用瘤組織塊整體植入有關(guān)，它提高了單位面積的瘤細(xì)胞密度，增強(qiáng)了對機(jī)體免疫抵抗的屏障作用.其次，瘤塊修剪在冰塊上進(jìn)行，手術(shù)操作無菌、輕柔、熟練，h內(nèi)完成；植入后明膠海綿壓迫止血并用生物蛋白膠堵塞針道，防止瘤塊逆出或術(shù)野種植；術(shù)后預(yù)防感染，也與提高動物成瘤率有關(guān).VX2瘤株種植成活后依次經(jīng)歷腫瘤血管形成期、腫瘤血管穩(wěn)定期和腫瘤血管退化期3個階段［４］.成瘤初期腫瘤均呈指數(shù)性生長，推測2～3wk時進(jìn)入穩(wěn)定生長期，腫瘤體積增長穩(wěn)定，無液化壞死和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，是施加實驗措施的最佳階段.3～4wk時因瘤體積過大，中央血供不足易發(fā)生壞死、液化及遠(yuǎn)處肝、肺、腎門淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等.4～5wk后因腫瘤血管退化，腫瘤大片壞死，體積過度倍增而形成廣泛浸潤、粘連，進(jìn)而影響試驗療效的準(zhǔn)確性.螺旋CT對種植1wk后的腫瘤檢出率為70%，2wk后檢出率達(dá)100%，分析其中可能的影響因素有：①腫瘤直徑小于掃描層距，造成遺漏；②呼吸動度影響.故動物早期未檢出腫瘤，并不能定性為造模失敗，如果聯(lián)合MRI技術(shù)則可明顯提高檢出率.MRI圖像清晰，可以發(fā)現(xiàn)早期微腫瘤.MRI圖像分辨率與掃描時間成正比，但反復(fù)在麻醉狀態(tài)下進(jìn)行檢查，降低荷瘤兔免疫力，并可能促使腫瘤侵襲.我們認(rèn)為，只要選定適宜的技術(shù)、條件和參數(shù)，植瘤后2wk時，螺旋CT及MRI檢查的影像密度或信號均勻，腫瘤檢出率為最高.腎動脈插管操作簡便、微創(chuàng)，適宜各類介入研究，螺旋CT用于實驗動物的影像學(xué)觀察具有方便、準(zhǔn)確、無創(chuàng)、可重復(fù)性強(qiáng)的優(yōu)點，值得動物實驗采用.

【參考文獻(xiàn)】

［1］賈洪順，全顯躍，曾盛，等.兔VX2肝癌CT及MRI動態(tài)評估［J］.第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2002,2:41-144.

［2］張琳，丁仕義，黃學(xué)全.兔VX2肝移植癌模型傳代的改進(jìn)和螺旋CT評價［J］.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2002,24:1125-1127