2015版耐膽鹽革蘭陰性菌及車間微生物知識介紹北京同仁堂股份南廠QC2020/12/151一.2015版耐膽鹽革蘭陰性菌變化

1.耐膽鹽革蘭陰性菌簡介

2.大腸菌群簡介

3.大腸埃希菌簡介

4.指標的意義二.車間微生物污染的媒介1.空氣；2.水；3.表面；4.人三.過程控制措施

1.原料控制

2.車間環(huán)境監(jiān)控

(1)空氣；(2)水；(3)表面；(4)人

3.取樣

4.培訓2020/12/152精品資料3你怎么稱呼老師？如果老師最后沒有總結一節(jié)課的重點的難點，你是否會認為老師的教學方法需要改進？你所經歷的課堂，是講座式還是討論式？教師的教鞭“不怕太陽曬，也不怕那風雨狂，只怕先生罵我笨，沒有學問無顏見爹娘……”“太陽當空照，花兒對我笑，小鳥說早早早……”4一.2015版耐膽鹽革蘭陰性菌變化1.耐膽鹽革蘭陰性簡介

2.大腸菌群簡介

3.大腸埃希菌簡介

4.指標的意義2020/12/1551.耐膽鹽革蘭陰性菌簡介

2015版中國藥典用耐膽鹽革蘭陰性菌檢查法替代2010版大腸菌群檢查法。耐膽鹽革蘭陰性菌檢查法在檢出率和準確率上均比大腸菌群檢查法高，檢測的菌種范圍更廣，實驗結果易于判斷。定義：耐膽鹽革蘭陰性菌指在膽汁酸中可以存活并繁殖的革蘭陰性菌。2020/12/156包含分類及來源

腸桿菌科：主要包含大腸菌群，來源于人畜糞便假單胞菌屬：屬于假單胞菌科，存在于土壤、水、空氣中，人體皮膚、腸道和呼吸道均有存在氣單胞菌屬：屬于弧菌科，自然界廣泛存在，可從土壤及人類糞便中分離2020/12/157結構圖耐膽鹽革蘭氏陰性菌（2015版方法）假單胞菌屬腸桿菌科氣單胞菌屬沙門氏菌大腸菌群（2010版方法）志賀氏菌腸桿菌屬埃希菌屬枸櫞酸菌屬克雷伯菌屬大腸埃希菌（大腸桿菌）2020/12/1582.大腸菌群簡介大腸菌群是指在37℃生長時能發(fā)酵乳糖，24h內產酸產氣的革蘭陰性、氧化酶陰性、需氧或兼性厭氧的無芽孢桿菌，它不是分類學上的名稱。2020/12/159大腸菌群包括

埃希菌屬（為主）腸桿菌屬枸櫞酸菌屬克雷伯菌屬

這些屬的細菌均來自于人和溫血動物的腸道。2020/12/1510

大腸菌群中以埃希氏菌屬為主，本群中典型大腸桿菌以外的菌屬，除直接來自糞便外，也可能來自典型大腸桿菌排出體外7~30天后在環(huán)境中的變異。2020/12/1511大腸菌群的滅菌大腸菌群對氯很敏感，在含有0.5～1ppm氯量的水中，很快死亡。大腸菌群等革蘭氏陰性無芽孢桿菌對紫外線最敏感，用15瓦紫外線殺菌燈,距離50cm，照射1分鐘，或距離10cm，照射6秒鐘，幾乎可全部殺死。大腸菌群在60℃，熱死時間為5～30分鐘，在70℃，熱死時間為<5分鐘。2020/12/15123.大腸埃希菌簡介大腸埃希菌，俗名大腸桿菌（革蘭氏陰性短桿菌），周身鞭毛，能運動，無芽。是人和動物腸道中的正常棲居菌。大腸埃希菌的致病物質之一是血漿凝固酶。腸出血性大腸埃希菌O157:H7是導致1996年日本食物中毒暴發(fā)的罪魁禍首，它是出血性大腸埃希菌中的致病性血清型，主要侵犯小腸遠端和結腸。2020/12/1513大腸桿菌的代時大腸桿菌在不同溫度下的代時：

10度

860min

15度

120min

20度

90min

25度

40min

35度

22min2020/12/1514大腸桿菌的滅菌大腸桿菌生長溫度范圍7～49.5℃，最適生長溫度37℃。致病性大腸桿菌在室溫下能生存數周，在土壤和水中可達數月，O157大腸桿菌75℃時，1min即被殺死，但它耐低溫。2020/12/15154.指標意義檢出耐膽鹽革蘭陰性，表示樣品受到污染。大腸菌群屬于人或溫血動物的糞便污染，其中典型大腸桿菌為糞便近期污染，其他菌屬則可能為糞便的陳舊污染?？梢酝茰y該藥品中存在著腸道致病菌污染的可能性（如沙門氏菌、志賀氏菌等）。2020/12/1516二.車間微生物污染的媒介1.空氣2.水3.表面4.人2020/12/1517二.車間微生物污染的媒介

微生物特點：

存在范圍廣

生長速度快

生存能力強2020/12/1518潔凈室內微生物在哪里空氣水表面人員2020/12/15191.空氣中的微生物在一般空氣中，微生物達800~3500cfu/m3，空氣并不是產生污染的介質，但它是污染的危險攜帶者?？諝庵械奈⑸锒鄶蹈街诨覊m上，或以芽孢形式懸浮于空氣中，1μm（微米）以下者處于懸浮狀態(tài)，10μm以上者會逐漸沉下來而形成菌塵。充滿微生物的塵埃和水滴就是通過空氣作為侵襲我們產品的媒介而成為重要的污染源的。2020/12/15202.水中的微生物在嚴重污染的水中可達107cfu/ml（飲用水要求菌落總數≤100cfu/ml，大腸桿菌、大腸菌群不得檢出）大腸桿菌經水塔或蓄水池儲存后，短期內可大量繁殖繁殖在生產過程中，水是用量最大、應用最廣泛的輔料之一。微生物在純水中不能生長，但是水中總會有一定量的可溶性有機物和鹽類被微生物利用作為他們的生長養(yǎng)料。

2020/12/15213.表面的微生物空氣中的濕度，使表面包裹上一層水膜，這層薄膜由于靜電吸引而飽含塵埃微粒，表面因塵埃微粒和微生物由空氣傳播的回降而受到污染，一個表面看起來很干凈，實際上已被千百萬個微生物所污染，除非已經做了正確的消毒滅菌。2020/12/15224.人

————潔凈室中最大的微生物污染源人的頭皮上有140萬cfu/cm2，兩手上約有4~40萬，1g指甲污垢有38億，1g糞便可達10~1000億。人在代謝過程中會釋放和分泌污染物。人體表面、衣服能沾染、攜帶污染物。人在潔凈室內的各種動作也會產生微粒和微生物。2020/12/1523人體內外微生物的分布1、皮膚：表皮葡萄球菌、白色葡萄球菌、八疊球菌屬細菌、類白喉棒桿菌、金黃色葡萄球菌等2、口腔：唾液鏈球菌、溶血鏈球菌、乳酸桿菌、流感桿菌、類白喉棒桿菌等3、上呼吸道：包括喉、鼻道和鼻咽。甲型鏈球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感桿菌、乙型鏈球菌、葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、變形桿菌等。4、下呼吸道：包括氣管、支氣管和肺。健康人的下呼吸道是無菌的。5、胃腸道：大腸埃希氏菌、產氣桿菌、變形桿菌、糞產堿桿菌、糞鏈球菌、梭桿菌屬、螺旋體屬、乳桿菌屬、梭菌屬、擬桿菌屬中的一些種6、泌尿生殖道：常見的有嗜酸乳桿菌、類白喉棒桿菌、葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌2020/12/1524國外實驗資料，可以認為人員的發(fā)菌量有以下數據可供參考。①潔凈室內當工作人員穿無菌服時，靜止時的發(fā)菌量一般為10～300個／(min·人)，軀體一般活動時的發(fā)菌量為150～1000個／(min·人)，快步行走時的發(fā)菌量為900—2500個／(min·人)。②咳嗽一次的發(fā)菌量一般為70～700個／(min·人)，噴嚏一次的發(fā)菌量一般為4000～60000個／(min·人)。③穿平常衣服時發(fā)菌量為3300～62000個／(min·人)。④無口罩發(fā)菌量：有口罩發(fā)菌量為(1：7)～(1：14)。人體的發(fā)菌量2020/12/1525三.過程控制措施1.原粉控制2.車間環(huán)境控制（1）空氣（2）水（3）表面（4）人3.取樣4.培訓2020/12/1526三.過程控制措施由于微生物檢驗的特殊性，屬于概率檢出，檢驗結果不復檢，而丸劑劑型又沒有最終滅菌，所以一定要加強生產過程的控制。2020/12/15271.原粉的控制

丸劑作為原粉制劑，要注意前處理原料的凈選。土壤中微生物復雜，動物藥易滋生細菌，要嚴格按工藝凈選處理。不要把微生物控制都寄托在照射滅菌上。因污染程度、物品擺放及時間的不同，輻照滅菌效果會有差異。2020/12/15282.車間環(huán)境監(jiān)控車間監(jiān)控要到位，注意最薄弱點的監(jiān)控，尤其注意無攝像頭的位置死角。對車間主要污染途徑空氣、水、表面、人進行重點關注。2020/12/1529（1）空氣的監(jiān)控對空氣采取過濾措施車間廠房的密閉性空氣消毒（臭氧等）必須保持緩沖間門的關閉，不得同時開啟。2020/12/1530純化水的制備、儲存和分配應能防止微生物的滋生和污染。儲罐和輸送管道所用材料應無毒、耐腐蝕。管道的設計和安裝應避免死角、盲管。儲罐和管道要規(guī)定清洗、滅菌周期。

純化水清洗后的設備容器要最后進行消毒。（2）水的監(jiān)控2020/12/1531（3）表面的監(jiān)控設備表面地面進入控制區(qū)的原、輔料，包材2020/12/1532設備表面

消毒劑濃度合適，針對特定范圍內的細菌選擇相應的消毒劑。消毒劑在三個月內輪換使用，以防細菌耐藥。紫外燈消毒時記錄使用時間，紫外燈的輸出功率隨使用時間增加而降低。超過平均壽命時，就達不到預期效果，必須更換。2020/12/1533地面灰塵、微粒具有沉降和粘附的趨勢，所以同一區(qū)域內，地面是微粒相對集中的地方，也是微生物相對較多的地方，墻壁也容易粘附灰塵。不能用腳踏在墊板和料桶上。不得跑跳、大聲喧嘩。不靠在墻上或其他物體上。2020/12/1534進入控制區(qū)的原、輔料，包材物料進入潔凈區(qū)，用吸塵器或清潔抹布，將灰塵擦干凈，脫去外包裝。用紫外滅菌燈照射后，按物流走向經物流通道進入潔凈區(qū)后，將物料存放在相應的位置。2020/12/1535（4）人的監(jiān)控更鞋、更衣、洗手、手消毒要嚴格履行規(guī)程；一更更鞋：腳底是最臟的部分。帶發(fā)套：保證發(fā)套完整的包裹頭發(fā)。換工作服：阻斷外界沉降在外套上的灰塵。洗手：洗手一定要用洗手液和充足的流水。二更帶口罩：潔凈區(qū)內不能脫下口罩。穿潔凈服：潔凈區(qū)內不能解開連體服。手消毒：75%的酒精能殺滅99%的微生物。二次更鞋：潔凈區(qū)工作鞋不能穿出二更的鞋箱外。

2020/12/1536發(fā)膠、香粉、耳環(huán)、戒指、項鏈、手鏈等不能帶入潔凈區(qū)；注意衣著、口罩、手套等是否到位；不攜帶個人物品進入生產區(qū)，不在生產區(qū)內吃東西；不能未更換工作服就進入生產區(qū)、潔凈區(qū)；不能走物流通道；潔凈區(qū)衣物與一般生產區(qū)衣物應分開分柜存放，不能交叉；避免不必要的走動和動作，不要頻繁進出潔凈室；離開工作場地必須脫掉工作服；要注意隨手關門；2020/12/1537在潔凈室中，人的數量和活動應有特別嚴格的限制。當員工沒有按照SOP進行工作時，車間的污染程度將增加。2020/12/15383.取樣操作藥品取