食品衛(wèi)生微生物檢驗的

質(zhì)量控制整理ppt實驗室質(zhì)量控制規(guī)范-

食品微生物檢測BG/T27405-2008實驗室的質(zhì)量控制包括的內(nèi)容：--人、機、料、法、環(huán)。整理ppt人員技術(shù)專業(yè)培訓；生物安全培訓；檢驗技能的客觀評估(內(nèi)部質(zhì)量控制、能力驗證或標準菌株測試、新方法使用前的操作技能評估)。整理ppt儀器設(shè)備普通玻璃器皿的滅菌、消毒；測量設(shè)備、定容器具的校準與維護；特殊設(shè)備的驗證與性能評估(標準菌株、實驗室間的比對)。整理ppt試劑與材料培養(yǎng)基的制備與性能測試；標準試劑、標準培養(yǎng)物的保存(可追溯性、有效期限、老化、退化或變異、污染)。整理ppt檢驗方法與質(zhì)量控制規(guī)范管理體系、質(zhì)量體系的運行；標準方法的有效性；非標方法的確認與驗證；實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制與外部質(zhì)量評估；不確定度的測量。整理ppt實驗室環(huán)境監(jiān)測總體布局(滿足工作量、對樣品無污染、對人員無傷害可能)；不同的工作區(qū)域劃分；溫度、濕度、照度、噪聲、潔凈度符合檢驗與生物安全要求；整理ppt食品衛(wèi)生微生物學檢驗的

培養(yǎng)基質(zhì)量控制原則整理ppt培養(yǎng)基的起源與發(fā)展微生物培養(yǎng)基(CultureMedia)，是指由人工方法配制而成，用于微生物培養(yǎng)、分離、鑒別、保存、藥敏試驗等的混合營養(yǎng)物制品。十九世紀未，德國著名細菌學家科赫(RoberKock，1843~1910)成功地制備固體培養(yǎng)基，并發(fā)明了玻璃培養(yǎng)皿，極大地推動了細菌的分離、培養(yǎng)和鑒別。整理ppt美國Difco公司至今已有100多年歷史，早在1895年就開始生產(chǎn)胃酶、胰酶制品，1917年生產(chǎn)脫水培養(yǎng)基。英國Oxid公司1950年開始商品化生產(chǎn)干燥培養(yǎng)基。Difco和Oxid的產(chǎn)品被全球微生物實驗室廣泛接受，產(chǎn)品達400多種。我國1958年開始研制干燥培養(yǎng)基，目前已有50多個生產(chǎn)廠家，商品干粉培養(yǎng)基達200多種。整理ppt培養(yǎng)基質(zhì)量控制的意義培養(yǎng)基的質(zhì)量直接關(guān)系到樣品的檢驗結(jié)果。微生物的檢驗與研究是否成功，在很大程度上取決于培養(yǎng)基的質(zhì)量。培養(yǎng)基質(zhì)量是保證實驗結(jié)果的準確性、科學性、公正性的根本。高質(zhì)量的培養(yǎng)基可提高工作效率、降低使用成本。整理ppt國際通用的培養(yǎng)基質(zhì)控標準目前國際上通用的培養(yǎng)基質(zhì)控標準：ISO/TS1113-1：2000；ISO/TS1113-2：2003。食品和動物飼料-培養(yǎng)基制備指南-實驗室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則。食品和動物飼料-培養(yǎng)基制備指南-培養(yǎng)基性能測試實用指南。整理ppt國內(nèi)現(xiàn)行的培養(yǎng)基質(zhì)控標準SN/T1538.1-2005；SN/T1538.2-2007。培養(yǎng)基制備指南第1部分：實驗室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則培養(yǎng)基制備指南第2部分：培養(yǎng)基性能測試實用指南WS/T232-2002商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質(zhì)量檢驗規(guī)程。衛(wèi)生部1993年頒布的“食品衛(wèi)生微生物檢驗用干燥培養(yǎng)基生產(chǎn)質(zhì)控和質(zhì)量標準”。整理ppt培養(yǎng)基實驗室配制的基本程序檢查與稱量測定及矯正PH溶化(水化)無菌檢驗、性能檢驗分裝滅菌密封性、日期、說明、配方蒸餾水、加熱惰性容器、＜500mL25℃,滅菌后

pH±0.21MNaOHor1MHCl121℃,15min.一般用NaOH調(diào)節(jié)時，滅菌后pH會下降0.1~0.2，用NaHCO3調(diào)節(jié)時，滅菌后pH會上升0.1。干粉培養(yǎng)基不需調(diào)節(jié)pH。整理ppt培養(yǎng)基制備前的準備實驗室收到培養(yǎng)基后，建立實驗室檢查記錄單：--培養(yǎng)基的名稱和批號；--接收日期及有效期；--包裝及其完整性。整理ppt貯存時，建立實驗室保存有效培養(yǎng)基的目錄清單：

--貯存條件(溫度、時間)；--容器密閉性復查；--首次開封日期；--內(nèi)容物的感觀檢查(粉未的流動性、均勻性、色澤、結(jié)塊)。整理ppt培養(yǎng)基實驗室制備通則水--配制培養(yǎng)基應使用蒸餾水或相同質(zhì)量的水，以排除測試條件下抑制或影響微生物生長的物質(zhì)。--如果蒸餾水是用氯消毒的水制備的，在蒸餾前應先對氯進行中和。--為保證蒸餾水的質(zhì)量，蒸餾水的電阻率最少應達到3000000Ωcm。整理ppt--采用離子交換器（去離子）生產(chǎn)的去離子水，微生物含量較高，這種水在過濾滅菌后仍可能帶有細菌生長的抑制因子。所以配置培養(yǎng)基時最好不要使用這種方法生產(chǎn)的去離子水，而應使用蒸餾水。--盛放蒸餾水的容器最好是由中性材料制成的（如中性玻璃，聚乙烯等），在初次使用前要確認容器中不含有任何抑制因子。整理ppt稱重和復水--操作人員的自我防護：注意緩慢操作，必要時佩戴口罩或在通風柜中操作，以防吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末。--嚴格按產(chǎn)品說明書準確稱量。--稱量所需量的脫水培養(yǎng)基，先加入適量的水，充分混合（注意避免培養(yǎng)基結(jié)塊），然后加水至所需的量。--盡量在濕度較低的房間中稱量，以避免培養(yǎng)基受潮。整理ppt溶解和分裝--脫水培養(yǎng)基加水后適當加熱，并不停攪拌使其快速溶解，必要時重新溶解。--含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱前應浸泡幾分鐘。--用各種成分制備的培養(yǎng)基應將不同成分分別加入適量的水中，并充分溶解，然后再加水至所需的量。整理pptpH值的測定和調(diào)整--培養(yǎng)基滅菌冷卻到25℃時，pH的變化不應超過0.2個單位。--用稀酸或稀堿（1mol的NaOH或Hcl）將其pH調(diào)至要所需要求。--不可反復調(diào)pH，否則會影響培養(yǎng)基的滲透壓。--測定pH的溫度為25℃。--商品化的培養(yǎng)基高壓滅菌前后pH可能變化很大，但采用優(yōu)質(zhì)蒸餾水或去離子水，滅菌前無需調(diào)節(jié)pH。整理ppt分裝--將配好的培養(yǎng)基分裝到適當?shù)娜萜髦?，根?jù)不同用途，容器的體積可為培養(yǎng)基的1倍、2倍或3倍。容器的選擇：--在使用過程中不會釋出改變培養(yǎng)基pH的物質(zhì)。--不得使用銅鍋或鐵鍋(當培養(yǎng)基的含銅量>0.3mg/1000mL時，細菌不易生長。當含鐵量>0.14/1000mL時，則防礙細菌毒素的產(chǎn)生)。--容器應有留有足夠的空間(一般至少為培養(yǎng)基總體積1倍以上)。整理ppt滅菌--培養(yǎng)基和試劑應采用濕熱滅菌法或過濾除菌。--亮綠培養(yǎng)基等特定的培養(yǎng)基中含有對光和熱敏感的物質(zhì)，只能煮沸滅菌。煮沸后應迅速冷卻，避光保存；--明膠、血清、糖類等不耐高溫的物質(zhì)，應采用高壓鍋低溫滅菌法/間歇滅菌法滅菌；--有些試劑則不需滅菌，可根據(jù)相關(guān)標準或供應商使用說明直接采用。整理ppt濕熱滅菌--高壓滅菌一般采用121℃滅菌15分鐘。當培養(yǎng)基體積超過1000mL時，要對滅菌條件進行適當?shù)恼{(diào)整，但應按照標準或使用說明的規(guī)定進行。--高壓滅菌過程要通過放置到特定位置的熱電耦或測試條件進行監(jiān)測，以保證滅菌的效果。--滅菌效果的控制是關(guān)鍵。加熱后采用適當?shù)姆绞嚼鋮s，以防加熱過度。這對于腸道菌培養(yǎng)基和大容器中的培養(yǎng)基等的滅菌十分重要。整理ppt過濾滅菌--過濾除菌可在真空負壓或加壓的條件下進行。使用孔徑為0.22μm的濾膜或過濾器。--過濾前先將濾膜和濾墊滅菌。過濾器于121℃下滅菌15min(可以整體滅菌也可以拆卸后滅菌)，滅菌后在無菌條件下組裝。--一些濾膜上附著有蛋白質(zhì)（如抗生素）。為了達到有效過濾，應事先將濾膜用無菌水潤濕。整理ppt監(jiān)測--應對經(jīng)濕熱或過濾滅菌的培養(yǎng)基進行監(jiān)測，尤其要對pH、色澤、滅菌效果和均勻度等指標進行監(jiān)測。整理ppt添加成分的制備--制備含有有毒物質(zhì)的添加成分（尤其是抗生素）時應小心操作（必要時在通風柜中操作），避免因粉塵的擴散造成實驗人員過敏或發(fā)生其他不良反應；--制備溶液時應小心按產(chǎn)品使用說明操作；不要使用過期的產(chǎn)品；--抗生素工作溶液應現(xiàn)用現(xiàn)配；批量配置的抗生素溶液分裝后冷凍貯存，但解凍后的貯存溶液不能再次冷凍；--廠商應提供冷凍對抗生素活性影響的有關(guān)資料，也可由使用者自行測定。整理ppt培養(yǎng)基的使用--將培養(yǎng)基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法（如高壓鍋中的蒸汽）使之融化。--經(jīng)過高壓的培養(yǎng)基應盡量減少重加熱時間，避免過度加熱。--培養(yǎng)基融化后放入47℃±2℃的恒溫水浴鍋中保溫，直至使用。--融化后的培養(yǎng)基應盡快使用，放置時間一般不應超過4小時。整理ppt添加成分的加入--對熱不穩(wěn)定的添加成分應在培養(yǎng)基冷卻至47℃±2℃時再加入。--無菌的添加成分在加入前應先放置到室溫，避免冷的液體造成瓊脂凝結(jié)或形成片狀物。--將加入添加成分的培養(yǎng)基緩慢充分混勻，盡快分裝到待用的容器中。整理ppt平板的制備和儲存--傾注融化的培養(yǎng)基到平皿中，使之在平皿中形成一個至少2mm厚的瓊脂板（直徑90mm的平皿，通常要加入15mL瓊脂培養(yǎng)基）。將平皿蓋好皿蓋后放到水平平面使瓊脂冷卻凝固。--在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基會損失水分。當水分損失的量大于培養(yǎng)基總量的15%時，就會影響微生物的生長。整理ppt--造成培養(yǎng)基水分損失的因素很多，如培養(yǎng)基成分，平皿中培養(yǎng)基總量和培養(yǎng)箱的類型等（如使用帶風扇的培養(yǎng)箱，培養(yǎng)箱中的濕度偏低，平板在培養(yǎng)箱中放置的位置靠近加熱管，培養(yǎng)溫度過高等)，操作時應注意避免。--凝固后的培養(yǎng)基應立即使用或存放于暗處和（或）4℃~12℃冰箱的密封袋中，最多存放一周或按廠商提供的標準執(zhí)行。在平板底部做好標記，標記的內(nèi)容包括名稱、制備日期和（或）有效期。也可使用適宜的培養(yǎng)基編碼系統(tǒng)進行標記。整理ppt--將倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延長貯存期限。--為了避免冷凝水的產(chǎn)生，平板應冷卻后再裝入袋中。貯存前不要對培養(yǎng)基表面進行干燥處理。--對于采用表面接種形式培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基,應先對瓊脂表面進行干燥：揭開平皿蓋，將平板倒扣于烘箱/培養(yǎng)箱中（溫度設(shè)為25℃~50℃）；或放在有對流的無菌凈化臺中，直到培養(yǎng)基表面的水滴消失為止。--注意不要過度干燥。商業(yè)化的平板瓊脂培養(yǎng)基應按照廠商提供的說明使用。整理ppt培養(yǎng)--培養(yǎng)時每垛最多堆放六個平板，平板間要留空隙以保證空氣流通，使培養(yǎng)物的溫度盡快與培養(yǎng)箱溫度達到一致；--液體培養(yǎng)基溫度與培養(yǎng)箱達到一致取決于很多因素，如體積、內(nèi)容物量、容器類型、培養(yǎng)箱類型等，如有特殊要求應先將液體培養(yǎng)基預熱至所需溫度再接種；--使用厭氧罐時，堆放的平板數(shù)可以超過六個。整理ppt培養(yǎng)基的棄置--所有污染和未使用的培養(yǎng)基的棄置應采用安全的方式，并且要符合相關(guān)法律法規(guī)的規(guī)定。--應根據(jù)相關(guān)法律法規(guī)和標準的要求以及各實驗室的實際情況，在所指定的藥品試劑安全管理規(guī)范當中加入有關(guān)培養(yǎng)基棄置的具體要求，以確保所棄置培養(yǎng)基的安全性。整理ppt培養(yǎng)基成品的質(zhì)量控制供應商或制備者應確保培養(yǎng)基的理化特性滿足相關(guān)標準的要求：--外觀，色澤和均一性；--瓊脂凝膠的硬度；--水分含量；--pH；--緩沖能力；--微生物污染。整理ppt微生物學要求-選擇能代表整批產(chǎn)品的樣品進行微生物學性能測試。定量：采用采用定量方法時，應使用參考培養(yǎng)基進行對照；(多用于固體培養(yǎng)基)。半定量：采用半定量和定性方法時，可使用參考培養(yǎng)基或能得到“陽性”結(jié)果的培養(yǎng)基進行對照有助于結(jié)果的解釋；(多用于液體培養(yǎng)基)。參考培養(yǎng)基應是從近期批次中選出的已知質(zhì)量良好的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基穩(wěn)定性測試應使用來自不同供應商的培養(yǎng)基或即用型培養(yǎng)基。

整理ppt培養(yǎng)基的性能測試需要進行性能測試的培養(yǎng)基主要包括：選擇性培養(yǎng)基、非選擇性培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)三大類。固體培養(yǎng)基一般采用定量的方法進行測試；液體培養(yǎng)基多采用半定量的方法測試；鑒別培養(yǎng)基主要用定性方法。整理ppt選擇性培養(yǎng)基的性能測試選擇性培養(yǎng)基包括：選擇性增菌液、選擇性分離培養(yǎng)基。測試項目：--生長率；--選擇性；--特異性。測試方法：定量、半定量、定性。整理ppt非選擇性培養(yǎng)基的性能測試非選擇性培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、營養(yǎng)培養(yǎng)基。有液態(tài)和固態(tài)兩種。測試項目：--生長率。測試方法：定量、半定量、定性。整理ppt鑒別培養(yǎng)基的性能測試鑒別培養(yǎng)基：用于對微生物進行生化鑒定的培養(yǎng)基。根據(jù)不同的鑒別培養(yǎng)基(如高層斜面固體、半固體、液體、微量生化管等)，采用不同方法接種特定的標準菌株，觀察具特征性的生化結(jié)果。測試方法：定性。整理ppt測試菌株應具有其代表種的穩(wěn)定特性并能有效證明實驗室特定培養(yǎng)基最佳性能的一套菌株。測試菌株主要購置于標準菌種保藏中心，也可以是實驗室自己分離的具有良好特性的菌株。實驗室應檢測和記錄標準儲備菌株的特性；新復蘇的菌株可能會有非特異性反應，使用時應引起注意；最好使用從食品中分離的菌株。培養(yǎng)基性能測試的質(zhì)控菌株要求整理ppt每種培養(yǎng)基的測試菌株應包括：--具典型反應特性的(強陽性)菌種；--微弱生長的陽性菌株（對培養(yǎng)基中選擇劑等試劑敏感性強的菌株）；--非特異性菌株。如：產(chǎn)生不同發(fā)酵反應和熒光反應的菌株；--陰性菌株。質(zhì)控標準菌株的復蘇應按醫(yī)用細菌菌種復蘇方法進行。如果菌株失去原有的特性，則視為菌株變異，不能使用。整理ppt從菌種保藏中心得到的菌株為零代，菌株啟開后應分為二份，一份供保存菌種用，一份供存代用為工作菌株。工作菌株使用不超過5代。復蘇后的菌種一般在傳1~2代后使用。整理ppt工作菌株的制備工作菌株是將標準儲備菌株接種到非選擇性肉湯中所制備的處于穩(wěn)定生長期的純菌株，也可以采用其他制備方法，但要保證接種菌株的純度和操作的規(guī)范性，以確保工作菌株的可靠性。如經(jīng)過冷凍的菌株復蘇后能在選擇性培養(yǎng)基上存活，則該菌株可以使用。整理ppt生長率測試用工作菌株：生長率試驗的目標菌(定量或半定量)常用每平板（或試管）的接種水平為10CFU～100CFU。選擇性測試用工作菌株：培養(yǎng)基選擇性試驗是將濃度為104CFU/mL～106CFU/mL的非目標菌工作菌株懸浮液接種到平板上或試管中。

整理ppt生長率(定量法)將適量測試菌株(目標菌)的工作培養(yǎng)液，分別接種(可采用涂布法或傾注法)于待測培養(yǎng)基和參考培養(yǎng)基中(一般每種培養(yǎng)基接種三塊平行板)；按相關(guān)標準規(guī)定的條件進行培養(yǎng)。計算每一平板中的菌落數(shù)，評價菌落的大小和表面特征。--生長率PR的計算：PR＝NS／N0--NS：從一個或多個待測培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)。--N0：從一個或多個規(guī)定的參考培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)(該菌落總數(shù)應≥100cfu)。整理ppt每種培養(yǎng)基上菌株的生長率應達到所規(guī)定的最低限值。非選擇培養(yǎng)基上目標菌的生長率最低應為0.7，該類培養(yǎng)基應易于目標菌生長；選擇性培養(yǎng)基上目標菌的生長率最低應為0.1。通常應達到這個要求，特殊情況可放寬判定標準。整理ppt生長率(半定量法)按常規(guī)的方法用大約15mL瓊脂培養(yǎng)基制備平板。用1μl接種環(huán)按圖將工作培養(yǎng)液劃線接種平板。A部分用接種環(huán)按0.5cm的間隔劃4條平行線，按同樣的方法在B區(qū)和C區(qū)劃線，最后在D區(qū)內(nèi)劃一條連續(xù)的曲線。按相關(guān)標準規(guī)定的條件進行培養(yǎng)。整理ppt操作時用接種環(huán)而不用接種針，接種環(huán)應完全浸入培養(yǎng)基中。取一滿環(huán)接種物，將接種環(huán)接觸容器邊緣3次可去除多余的液體。劃線時，接種環(huán)與瓊脂平面的角度應為20°～30°；接種環(huán)壓在瓊脂表面的壓力和劃線速度前后一致，整個劃線應快速連續(xù)；移取液體培養(yǎng)物時應將接種環(huán)伸入培養(yǎng)液下部分以防止環(huán)上產(chǎn)生氣泡或泡沫。通常用同一個接種環(huán)對A～D部分進行劃線，操作過程不需要對接種環(huán)滅菌。整理ppt計算：培養(yǎng)后，評價菌落的形狀、大小和生長密度，并計算生長指數(shù)G。每條有菌落生長的劃線記作1分，每個培養(yǎng)皿上最多為16分。如果僅一半的線有菌落生長，記作0.5分。如果劃線上沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半，則記作0。記錄每個平板的得分總和便得到G。整理ppt結(jié)果解釋：--目標菌的生長指數(shù)G大于6時，培養(yǎng)基可以接受。非選擇培養(yǎng)基的G值通常較高；--目標菌在培養(yǎng)基上應呈現(xiàn)典型的生長；--而非目標菌的生長應部分或完全被抑制。整理ppt選擇性(定量法)將適量測試菌株的工作培養(yǎng)物，涂布接種至選擇性培養(yǎng)基和參考培養(yǎng)基中。按相關(guān)標準規(guī)定的條件進行培養(yǎng)。選擇因子的計算：SF＝D0－DS--D0：能在參考培養(yǎng)基上生長至少10個菌落的最高稀釋度的對數(shù)。--DS：能在待測培養(yǎng)基上顯示生長的最高稀釋度的對數(shù)。整理ppt非目標菌在選擇性培養(yǎng)基上的SF至少為2。通常應達到這個要求，特殊情況時可以放寬判定標準。整理ppt選擇性(定性)按常規(guī)的方法用大約15mL瓊脂培養(yǎng)基制備平板；用1μl接種環(huán)取測試菌培養(yǎng)物，在測試培養(yǎng)基表面劃平行直線?？赏瑫r在一個平板上接種多個菌株，但劃線不能交叉；也可使用其他劃線技術(shù)；按標準中規(guī)定的培養(yǎng)時間和溫度對接種后的平板進行培養(yǎng)。整理ppt結(jié)果解釋：非目標菌的生長應該被部分或全部抑制（1或0）。--培養(yǎng)后按以下方法對培養(yǎng)基計分：--0表示無生長；