標準操作規(guī)程StandardOperationProcedure吉林大學研發(fā)中心Bradford法測蛋白質含量標準操作規(guī)程編號SOP-QC-007-01Bradford法檢測蛋白質含量1.試劑與水：所有試劑為分析純（AR）；水為蒸餾水或超純水。2.器皿與耗品：所有玻璃器皿為清潔級，37度烤干。tube、tip：—次性使用，容量瓶，96孔酶標板，3.儀器設備：酶標儀：旋渦混勻器。4.溶液的配置：G250儲存液：95%無水乙醇：100ml88%磷酸：200ml考馬斯量蘭G250：350mg室溫下可長期保存，穩(wěn)定。G250工作液：雙蒸水：425ml95%無水乙醇：15ml88%磷酸：30mlG250儲存液：30ml可根據體積相應縮小比例配制，用1號濾紙過濾并保存于室溫棕色瓶中，可使用數周。6.3牛血清白蛋白標準品BSA（實驗室購買）.配制標準品標準程序：將牛血清白蛋白配制成lmg/m1,取牛血清白蛋白lOOmg，先用超純水溶解，待其溶解后定容到一個潔凈的100ml容量瓶中，300ul分裝，保存于-20度，使用時，將其稀釋至200ug/ml,配制標準品備用。標準品的鑒定用原有的標準品做標準曲線，隨機取三支本分裝品為樣品，測定樣品蛋白含量，得X土SD（其中X單位為ug/ml）與RSD,當X值為98-102，且RSD值小于等于2%者，認為該標準品的標示濃度為200ug/ml。l標準操作規(guī)程StandardOperationProcedure吉林大學研發(fā)中心Bradford法測蛋白質含量標準操作規(guī)程編號SOP-QC-007-015.程序：5.1.樣品的處理一次檢測過程包括標準不能超過20個樣品。若是原液或成品,每個樣品需做2個或3個稀釋度：V廠V原（dT）其中V水為需要加入純化水的體積，V原為稀釋前樣品的體積，d為稀釋度水原待測樣品如為凍干品，則根據標示量稀釋至lmg/m1,再稀釋10倍；待測樣品如為未知濃度的樣品，可以根據bradford標準品顏色目測后稀釋樣品。待測樣品均需溶解后先離心，再進行稀釋和檢測操作。稀釋后的樣品需做同樣的三個反應體系。標準曲線的制備（見9.5工作標準品的配制）管號123456配制工作標準品濃度（ug/ml）20016012080400200ug/m1標準品加入量（ul）20016012080400ddH2O加入量（ul）040801201602005.3.測定步驟（操作溫度不能高于室溫，每2個加樣時間間隔均勻，為15秒）步驟內容標記管號123456N工作標準品濃度（ug/ml）20016012080400一加入工作標準品10ul加入稀釋后樣品（ul）10ul一加入G250工作液125ul混勻，室溫靜置2-3分鐘5.4.使用酶標板測OD值每管樣品（包括標準品）取lOul加在酶標板上，然后沒孔加入125U1G250工作液，做三復孔，使用酶標儀檢測578nm比色波長（單波長），并計算得出蛋白濃度數值。酶標準操作規(guī)程StandardOperationProcedure吉林大學研發(fā)中心Bradford法測蛋白質含量標準操作規(guī)程編號SOP-QC-007-01標儀的使用及設置參見《酶標儀使用標準操作規(guī)程》剩余樣品處理若為發(fā)酵樣品或蛋白樣品，稀釋后的樣品應保存于4°冰箱一天反應后的樣品測完后可以直接丟棄。結果計算與分析：7.1.結果判定標準標準曲線的相關系數均r值（詐0.99）；若是rV0.99的話，實驗需要重新做；同一樣品，同一稀釋度，若是三個不同的反應體系得出結果RSDN10的話，也需要重新檢測。若是樣品分不同稀釋度得出的結果RSDN10的話，也需要重新檢測。數據的取舍標準。選擇所測蛋白濃