雙黃連口服液中有效成份含量測定技術目的利用HPLC法對雙黃連口服液中黃苓苷的含量進行科學測定。方法其固定相主要是在結合實際的基礎上對十八烷基鍵合硅膠進行選擇。其中流動相為甲醇：水：冰乙酸（60：50：1）。結果黃苓苷所呈現(xiàn)的線性良好，但是為范圍在25?220瞄范圍內，注意其平均回收率需要控制在100.59%。結論該種方法不僅可實現(xiàn)對雜質的有效分離，對該制劑中黃苓苷的含量測定工作的順利開展有積極意義。標簽：高效液相色譜法；黃苓苷；雙黃連口服液金銀花、黃苓和連翹是雙黃連口服液處方的主要成分，辛涼解表、清熱解毒是雙黃連口服液的主要功效，在緩解外感風熱引起的發(fā)熱、咳嗽、咽痛癥狀方面也起著相當重要的作用。中國要藥典針對雙黃連口服液中黃苓苷含量測定工作所使用的質量指標為HPLC法。通過實驗發(fā)現(xiàn)黃苓苷峰與雜質峰之間呈現(xiàn)出無法分離的狀態(tài)。效果好，快速準確，重現(xiàn)性好是改變流動相比例的明顯優(yōu)勢，因此我我們說將其用于制劑質量控制工作過程中至關重要。一、 儀器與試藥1.SSIW型液相泵是在實際實驗過程中所使用的主要儀器，該儀器由美國生產，M525紫外檢測器，Anastar色譜工作站也是同一公司所提供的試驗儀器。電子天平也是試驗過程中不可缺少的工具之一，其型號為賽多利斯BP-211D。中國藥品生物制品檢定所，批號200512的黃苓苷是本次試驗的對照品。雙黃連口服液主要由哈高科白天鵝藥業(yè)集團有限公司、江蘇吳中實業(yè)股份有限公司蘇州長征制藥廠以及中國黑龍江完達山制藥提供，批號分別為05117-1.050114以及050301。甲醇（色譜純）、冰乙酸（AR）以及重蒸水也是在試驗過程中所必須使用的材料，在實際準備過程中必須對其質量進行嚴格檢驗。KromasilC18tt（5^m，250mmx4.6mm）是藥典流動相樣品的HPLC色譜條件色譜柱，甲醇：水：冰乙醇（60：50：1）作為流動相存在于上述試驗中，注意其溫度最高不可超過40°C，檢測波長也需要借助必要的措施與手段控制在274nm。二、 試驗方法和結果在實際稱取黃苓苷對照品的過程中我們需要將其控制在20.60mg，這也是對照品液的制備工作順利開展的基礎與前提，注意必須保障其精密性，其放置的量瓶為200ml。在添加甲醇的過程中必須充分結合實際，為在真正意義上促使其溶解必須放置在水浴中進行振搖。然后放置在室溫下進行稀釋，直到刻度為止，最后要搖晃至均勻。標準曲線精密吸取上述對照品溶液0.25ml,0.50ml,0.75ml,1.00ml,1.25ml,1.50ml,1.75ml,2.00ml,置10ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度。進樣20^1,記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標，進樣量（ 曜）為橫坐標繪制回歸方程：Y=6535.7X+9508（r=0.9995）,結果黃苓苷在25?220瞄范圍內呈良好的線性關系。改進流動相后對照品的HPLC色譜圖精密度試驗分別精密進對照品溶液20^1，重復進樣6次，按上述色譜條件記錄峰面積，結果RSD%=0.89%。樣品分離度按樣品測定法制備供試液進樣20^1，記錄色譜圖（圖3）,結果峰與相鄰雜質峰分離完全，分離度＞2.5o重現(xiàn)性試驗取同一批樣品（05117-1），按樣品測定法制備供試液，在上述色譜條件下進行5次平行測定，結果RSD=1.56%，表明本法測定的重現(xiàn)性好。穩(wěn)定性試驗取批號05117-1的供試品溶液，分別在制備后0,2,4,8,12h測定，結果黃苓苷的峰面積RSD=1.82%，表明溶液基本穩(wěn)定。陰性干擾實驗取陰性對照樣品（按《中國藥典》2000版一部缺黃苓苷制劑），精密進陰性對照品溶液20^1,按上述色譜條件記錄色譜圖。結果黃苓苷對照品相應無干擾峰出現(xiàn)，說明處方中其他成分對測定結果無干擾。改進流動相后陰性對照的HPLC色譜圖?；厥章试囼灢捎眉訕踊厥辗ā＞芰咳∫阎康臉悠?ml，置50ml量瓶中，分別精密加入濃度為10.30mg/ml；黃苓苷對照品溶液1ml，2ml,3ml，加50%甲醇稀群至刻度。進樣20^1，測定峰面積，計算回收率。加樣回收率試驗結果。樣品測定精密量取各樣品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理20min，放置至室溫，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用45呻液膜過濾，濾液即為供試品溶液，在上述色譜條件下，進樣20^1，記錄峰面積，計算黃苓苷含量。改進流動相后樣品的HPLC色譜，雙黃連口服液含量測定結果。三、討論本法測定雙黃連口服液的黃苓苷的含量，操作簡單易行，以甲醇：水：冰乙酸（60：50：1）為流動相，樣品中黃苓苷與雜質峰完全分離，出峰時間短，峰形穩(wěn)定，進樣量在20?220瞄范圍內呈良好線性，回收率高且穩(wěn)定，可以選定上述色譜條件的流動相，作為該制劑黃苓苷的含量測定。1.樣品的制備用50%甲醇溶解樣品后，分別觀察了不同頻率超聲波處理后綠原酸、連翹苷、黃苓苷和漢黃苓素溶出率的差別，結果顯示不同頻率超聲處理未能增加4種指標成分的溶出率，從節(jié)省時間和能源角度出發(fā)，本實驗采用50%甲醇溶解樣品后直接檢測分析。分析波長的選擇通過對綠原酸、連翹苷、黃苓苷和漢黃苓素四種標準品在190?800nm紫外可見光譜掃描，結果表明綠原酸在326nm有較強吸收，連翹苷在226nm有較強吸收，黃苓苷和漢黃苓素在278nm波長處有較強吸收，由于連翹苷和漢黃苓素在樣品中含量較低，而綠原酸和黃苓苷在樣品中含量較高，為了兼顧4種成分的同時測定，增加方法的靈敏度和準確度，并減少干擾，本實驗采用波長轉換點檢測方法，分別選擇4種成分的各自最大吸收波長作為測定波長。流動相的選擇雙黃連制劑為中藥復方，成分組成較復雜，而且綠原酸、連翹苷、黃苓苷、漢黃苓素4個指標成分極性差別較大，曾采用等度洗脫，綠原酸與鄰近組分不能有效分離，連翹苷和黃苓苷也未能完全分離開來，且連翹苷和黃苓苷分離效果甲醇系統(tǒng)明顯優(yōu)于乙臘系統(tǒng)，但乙臘系統(tǒng)中4個指標成分峰型對稱，優(yōu)于甲醇系統(tǒng)。因此，本文最終采用梯度洗脫的方法，在0?8min乙臘的比例為12%，使綠原酸和鄰近組分達到基線分離，8?20min乙臘的比例保持不變，通過增加甲醇濃度來提高洗脫和分離效果，使連翹苷和黃苓苷基線分離，20?27min提高乙臘的濃度，使?jié)h黃苓素達到基線分離。實驗結果表明雙黃連口服液中4種標志成份峰分離度良好，峰形對稱，與相鄰峰達到基線分離，并且方法學考察也達到分析要求，